一种大球盖菇多糖及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种大球盖菇多糖及其制备方法和应用。该多糖是自大球盖菇子实体依次通过水提醇沉、除蛋白、离子交换柱层析和透析浓缩得到的，其为α‑D‑半乳糖、α‑D‑葡萄糖和β‑D‑葡萄糖组成的杂多糖，其中α‑D‑半乳糖与葡萄糖(包括α‑D‑葡萄糖与β‑D‑葡萄糖)的残基的摩尔比为3:1，α‑D‑葡萄糖与β‑D‑葡萄糖的残基的摩尔比为2:1。该多糖具有显著的免疫调节活性。

A polysaccharide from Pleurotus ostreatus and its preparation method and Application

【技术实现步骤摘要】
一种大球盖菇多糖及其制备方法和应用
本专利技术属于真菌多糖应用
，具体地说，涉及一种大球盖菇多糖及其制备方法和应用。
技术介绍
多糖(polysaccharides)是生物体普遍存在的一类生物大分子。近代生物化学研究发现，多糖能参与细胞骨架和一些生物活性分子；如维持细胞结构的纤维素、几丁质；提供能量来源的淀粉、糖元等物质。多糖的发展较晚，结构又复杂多样，因此对研究其结构、活性等都较困难。近20年来，关于多糖生物活性的研究报道主要集中在免疫调节、抗肿瘤、抗病毒、抗氧化和降血糖等方面，其作用是多途径、多环节、多靶点的。大球盖菇，拉丁学名Strophariarugosoannulata，又称皱环球盖菇、皱球盖菇、酒红色球盖菇、斐氏球盖菇。菌盖肉质，近半球形，子实体单生、丛生或群生，子实体较大。幼嫩子实体初为白色，常有乳头状的小突起，随着子实体逐渐长大，菌盖渐变成红褐色至葡萄酒红褐色或暗褐色，老熟后褪为褐色至灰褐色。多生长于阔叶林下的落叶层上目前，对大球盖菇多糖的精细结构与免疫调节活性研究及其应用尚未见任何报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服上述技术存在的缺陷，提供一种大球盖菇多糖及其制备方法和应用。其具体技术方案为：本专利技术提供一种大球盖菇多糖，其为α-D-半乳糖、α-D-葡萄糖和β-D-葡萄糖组成的杂多糖，其中α-D-半乳糖与葡萄糖(包括α-D-葡萄糖与β-D-葡萄糖)的残基的摩尔比为3:1，α-D-葡萄糖与β-D-葡萄糖的残基的摩尔比为2:1。进一步地，该多糖的重均分子量为8000-20000Da(如8000、10000、12000、13000、14000、15000、18000、20000Da)；在本专利技术的一个实施例中，该多糖的重均分子量为13281Da。进一步地，该多糖的化学结构中包含1,6-连接的α-D-半乳糖残基、1,4,6-连接的β-D-葡萄糖残基和2-连接的α-D-葡萄糖残基。再进一步地，该多糖的化学结构中包含由1,6-连接的α-D-半乳糖残基组成的主链和由1,4,6-连接的β-D-葡萄糖残基和与其2-连接的α-D-葡萄糖残基组成的侧链。在本专利技术的一个实施例中，该多糖具有如下结构式：其中，n为3-10的整数(如3、4、5、6、7、8、9、10)。上述多糖是自大球盖菇子实体依次通过水提醇沉、除蛋白、离子交换柱层析和透析浓缩得到的。本专利技术还提供一种上述大球盖菇多糖的制备方法，其包括如下步骤：(1)取大球盖菇子实体粉末，热水浸提，将所得水提物依次经浓缩、醇沉、除蛋白得到粗多糖；(2)将步骤(1)所得粗多糖通过离子交换柱层析，洗脱，收集洗脱液；(3)将步骤(2)所得洗脱液用透析袋进行透析浓缩。优选地，(4)将步骤(3)完成后的透析袋内液体冷冻干燥。进一步地，热水浸提步骤中，浸提温度为80-100℃(如80、85、90、95、100℃)，在本专利技术的一个实施例中，该浸提温度为100℃。进一步地，热水浸提步骤中，大球盖菇子实体粉末与水的料液比(W/V，mg/mL)为1:1-10(如1:1、1:2、1:3、1:5、1:8、1:10)；在本专利技术的一个实施例中，该料液比为1:3。进一步地，浸提次数为1次或多次(如2、3、4、5次)；在本专利技术的一个实施例中，该浸提次数为3次。进一步地，每次浸提时间为1-10小时(如1、3、5、8、10小时)；在本专利技术的一个实施例中，每次浸提时间为3小时。在本专利技术的一个实施例中，热水浸提步骤包括：取大球盖菇子实体粉末，与水混合，并置于水浴中煮沸。进一步地，醇沉步骤中，醇与水提物的浓缩液的体积比为1-10:1(如1:1、3:1、4:1、5:1、10:1)；在本专利技术的一个实施例中，该体积比为3:1。在本专利技术的一个实施例中，醇沉步骤中，醇为乙醇。在本专利技术的一个实施例中，除蛋白采用Sevage法。进一步地，步骤(1)包括：取大球盖菇子实体粉末，热水浸提，收集上清液，浓缩，加入无水乙醇，收集沉淀，烘干，除去其中的蛋白质，得到粗多糖。进一步地，离子交换柱为纤维素柱，该纤维素柱的填料如DEAE-纤维素。进一步地，洗脱所用洗脱剂为NaCl溶液。再进一步地，该洗脱为梯度洗脱，洗脱剂浓度为0.01-1.0mol/L(如0.01、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.8、1.0)mol/L。进一步地，步骤(2)包括：将步骤(1)所得粗多糖的水溶液通过纤维素柱，梯度洗脱，收集洗脱液，浓缩。进一步地，透析袋的截留分子量为5000-10000Da(如5000、7000、8000、10000Da)；在本专利技术的一个实施例中，该截留分子量为7000Da。进一步地，步骤(3)包括：将步骤(2)所得洗脱液置于透析袋中进行透析，持续3天，透析两天。本专利技术还提供一种上述大球盖菇多糖在制备增强免疫的药物、保健品和食品中的应用。本专利技术还提供一种上述大球盖菇多糖在制备用于预防和/或治疗肿瘤的药物、保健品和食品中的应用。上述应用中，大球盖菇多糖可单独使用，可也与其他活性成分联合使用。本专利技术自大球盖菇分离纯化得到多糖SR-1，其具有显著的免疫调节活性，在20μg/mL浓度时，B、T细胞和RAW264.7细胞促增殖率最高；该多糖同时还能促进B细胞分泌免疫球蛋白，提高RAW264.7细胞的吞噬活性。附图说明图1所示为SR-1的HPGPC谱图；图2所示为SR-1的红外谱图；图3所示为SR-1的HLPC谱图；图4所示为SR-1的1HNMR谱图；图5所示为SR-1的13CNMR谱图；图6所示为SR-1的1H-1H-COSY谱图；图7所示为SR-1的HMQC谱图；图8所示为SR-1的化学结构；图9所示为SR-1对B细胞增殖的影响的实验结果；图10所示为SR-1对T细胞增殖的影响的实验结果；图11所示为SR-1对RAW264.7细胞增殖的影响的实验结果；图12所示为SR-1对RAW264.7吞噬功能的影响的实验结果。具体实施方式除非另有定义，本专利技术中所使用的所有科学和技术术语具有与本专利技术涉及
的技术人员通常理解的相同的含义。下面结合附图和具体实施例对本专利技术的技术方案作进一步详细地说明。实施例1大球盖菇多糖SR-1的分离提取1.1大球盖菇多糖SR-1的分离提取1.1.1水提醇沉法提取大球盖菇粗多糖将粉碎后的大球盖菇子实体粉末和蒸馏水以1:3的料液比(W/V)在100℃的水浴中煮沸3小时，煮沸3次，收集上清液浓缩至200mL。加入三倍体积的无水乙醇，形成絮状沉淀物，收集沉淀并干燥。用Sevage法除去提取液中的蛋白质而获得大球盖菇粗多糖。1.1.2DEAE-纤维素柱层析法分离纯化大球盖菇粗多糖称取DEAE-纤维素50.00g，用蒸馏水搅拌均匀后，浸泡24h，以除去悬浮颗粒。然后经过0.5mol/LNaOH溶液浸泡4h，蒸馏水洗至中性→再用0.5mol/LHC1溶液浸泡4h，蒸馏水洗至中性→再次用0.5mol/LNaOH溶液浸泡4h，蒸馏水洗至中性。此时的纤维素就具有活性，可与多糖进行交换吸附而被分离纯化。将活化的纤维素装柱后，经蒸馏水压柱平衡24h后即可进行粗多糖的分离纯化。将粗多糖稀释后的上清液(3mL)加入DEAE纤维素柱中，加入不同浓度的NaCl(0mol/L，0.1mol/L，0.2mol/L，0.3mol本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种大球盖菇多糖，其为α‑D‑半乳糖、α‑D‑葡萄糖和β‑D‑葡萄糖组成的杂多糖，其中所述α‑D‑半乳糖与葡萄糖的残基的摩尔比为3:1，所述α‑D‑葡萄糖与β‑D‑葡萄糖的残基的摩尔比为2:1。

【技术特征摘要】
1.一种大球盖菇多糖，其为α-D-半乳糖、α-D-葡萄糖和β-D-葡萄糖组成的杂多糖，其中所述α-D-半乳糖与葡萄糖的残基的摩尔比为3:1，所述α-D-葡萄糖与β-D-葡萄糖的残基的摩尔比为2:1。2.如权利要求1所述的多糖，其特征在于，所述多糖包含1,6-连接的α-D-半乳糖残基、1,4,6-连接的β-D-葡萄糖残基和2-连接的α-D-葡萄糖残基。3.如权利要求1所述的多糖，其特征在于，所述多糖的化学结构中包含由1,6-连接的α-D-半乳糖残基组成的主链和由1,4,6-连接的β-D-葡萄糖残基和与其2-连接的α-D-葡萄糖残基组成的侧链。4.如权利要求1所述的多糖，其特征在于，所述多糖具有如下结构式：5.如权利要求1-4任一项所述的多糖，其特征在于，所述多糖的重均分子量为8000-20000Da，优选为13281Da。6.一种权利要求1-5任一项所述的大球盖菇多糖，其包括如下步骤：(1)取大球盖菇子实体粉末，热水浸提，将所得水...

【专利技术属性】
技术研发人员：侯怡铃，丁祥，蒋琳，
申请(专利权)人：西华师范大学，
类型：发明
国别省市：四川,51