一种与肝癌相关的长链非编码RNA及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种与肝癌相关的长链非编码RNA及其应用，具体的涉及LINC01311或LINC00189。本发明专利技术通过高通量测序结合生物信息学分析首次发现了LINC01311或LINC00189在肝癌组织中呈现差异性表达，并进一步扩大样本量证实了LINC01311或LINC00189在肝癌组织中显著性上调。本发明专利技术同时通过细胞实验证明了改变LINC01311或LINC00189的水平可以影响肝癌细胞的增殖，说明LINC01311或LINC00189可作为可能的分子标志物和靶标应用于肝癌的诊断和治疗。

【技术实现步骤摘要】
一种与肝癌相关的长链非编码RNA及其应用
本专利技术属于生物医药领域，涉及一种与肝癌相关的长链非编码RNA及其应用，所述长链非编码RNA为LINC01311或LINC00189。
技术介绍
肝细胞性肝癌(Hepatocellularcarcinoma,HCC)是我国最常见的恶性肿瘤之一，其死亡率位列癌症相关肿瘤死亡率第三位。HCC具有起病隐匿、恶性程度高、进展迅速、易转移、病死率高、总体预后不佳等特点，严重危害人类健康。因此，探索肝癌发生以及其早期转移的具体机制对于肝癌早期诊断及提高患者预后具有重要价值。既往针对于肝癌发生发展的机制研究多集中于传统的蛋白编码基因，主要涉及遗传学，表观遗传学以及相关信号通路的调控。随着高通量测序技术发展，研究者已经揭示在人类基因组中非编码RNA(Non-codingRNA，ncRNA)比例占据了95％以上，蛋白编码RNA以及功能性非编码RNA间复杂相互作用在癌症的发生发展中具有重要的作用。长链非编码RNA(longnon-codingRNA,1ncRNA)作为ncRNA的重要组成成分之一，也越来越受到重视。LncRNAs是一类分子量大于200个核苷酸，保守性很差的ncRNAs，其数量远大于miRNA，lncRNA能在转录水平和转录后水平调节基因表达，正式和反式调控是其两种主要的转录调控方式，以此lncRNA可以分别靶向当前和远处的基因。而转录后水平的机制则主要包括对mRNAs的剪接，编辑，转运，翻译和降解。此外基因组印记和染色质重塑也是其调控基因的方式。LncRNA分为五类，正义(sense)或反义(antisense)，双向(bidirectional)，内含和基因间。lncRNA参与了生物生长，发育，衰老和死亡等过程，同时也参与了多类疾病的发生发展，但最引人关注的还是其与各种癌症的紧密关系。近年来越来越多的相关实验证明特定的lncRNA与特定的癌症存在十分明确的关系，这些1ncRNA的不同表达水平也许可以作为肿瘤转移和预后的标志。而作为高发肿瘤的HCC自然也被发现存在大量的1ncRNA与之相关。大量的实验发现异常表达的1ncRNA被发现与肝癌的发生存在关联，其在肝癌的转移与预后上也扮演着关键的角色(CN201710522694.9、CN201710522693.4)。因此，积极开展肝癌发生发展相关机制的研究，寻找新的分子标志物及治疗靶点并进行早期干预和个体化治疗，提高患者生存率具有重要的临床价值和社会意义。
技术实现思路
为了弥补现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供与肝细胞癌发生发展相关的分子标志物，通过检测分子标志物的表达水平以及改变其相关水平，实现肝癌的早期诊断与靶向治疗；同时分子标志物也可用于筛选治疗肝癌的候选药物。为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：本专利技术提供了检测基因表达水平的试剂在制备诊断肝细胞癌的产品中的应用，所述基因选自LINC01311或LINC00189的一种或两种。进一步，所述试剂包括：特异性识别LINC01311或LINC00189的探针；或特异性扩增LINC01311或LINC00189的引物。进一步，特异性扩增LINC01311的引物序列如SEQIDNO.1～2所示，特异性扩增LINC00189的引物序列如SEQIDNO.3～4所示。本专利技术提供了一种诊断早期肝细胞癌的产品，所述产品包括检测LINC01311或LINC00189表达水平的试剂，所述产品包括(但不限于)芯片、核酸膜条、试剂盒。进一步，所述试剂包括特异性识别LINC01311或LINC00189的探针；或特异性扩增LINC01311或LINC00189的引物。进一步，特异性扩增LINC01311的引物序列如SEQIDNO.1～2所示，特异性扩增LINC00189的引物序列如SEQIDNO.3～4所示。本专利技术提供了基因在筛选治疗肝细胞癌的候选药物中的应用，所述基因为LINC01311或LINC00189。进一步，筛选治疗肝细胞癌的候选药物的步骤如下：用待筛选物质处理表达或含有LINC01311或LINC00189的培养体系；和检测所述体系中LINC01311或LINC00189基因的表达水平；其中，若所述待筛选的物质可以抑制LINC01311或LINC00189基因的水平(优选显著降低，如低20％以上，较佳的低50％以上；更佳的低80％以上)，则表明该待筛选物质是治疗肝细胞癌的候选药物。进一步，所述的步骤还包括：对上面步骤获得的候选药物进一步测试其抑制肝癌的效果，若测试化合物对肝癌有显著的抑制效果，则说明该化合物为治疗肝癌的候选药物。所述培养体系包括(但不限于)细胞体系、亚细胞体系、溶液体系、组织体系、器官体系或动物体系(如动物模型，优选非人哺乳动物的动物模型，如鼠、兔、羊、猴等)等。本专利技术提供了基因在制备治疗肝细胞癌的药物组合物中的应用，所述基因选自LINC01311或LINC00189的一种或两种。进一步，所述药物组合物包括LINC01311或LINC00189的抑制剂。其中，所述LINC01311或LINC00189的抑制剂选自：以LINC01311或LINC00189或其转录本为靶序列、且能够抑制LINC01311或LINC00189基因表达或基因转录的干扰分子，包括：shRNA(小发夹RNA)、小干扰RNA(siRNA)、dsRNA、微小RNA、反义核酸，或能表达或形成所述shRNA、小干扰RNA、dsRNA、微小RNA、反义核酸的构建物。优选的，所述抑制剂为siRNA。更为优选的所述siRNA的序列如SEQIDNO.9～20所示。本专利技术提供了一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括LINC01311或LINC00189的抑制剂。优选的，所述抑制剂为siRNA。更为优选的，所述siRNA具有如SEQIDNO.9～20所示的序列。进一步，所述组合物还包括与所述抑制剂相配伍的其他药类以及药学上可接受的载体和/或辅料。药学上可接受的载体和/或辅料包括(但不限于)稀释剂、粘合剂、表面活性剂、致湿剂、吸附载体、润滑剂、填充剂、崩解剂。附图说明图1是利用QPCR检测LINC01311或LINC00189在肝细胞癌患者中的表达情况图；其中，图A是LINC01311，图B是LINC00189。图2是检测转染siRNA对肝细胞癌细胞中LINC01311或LINC00189的表达影响图；其中，图A是LINC01311，图B是LINC00189。图3是利用CCK8检测LINC01311或LINC00189对肝癌细胞增殖的影响图；其中，图A是LINC01311，图B是LINC00189。具体的实施方式本专利技术经过广泛而深入的研究，通过高通量测序方法，检测肝细胞癌组织和癌旁组织中lncRNA的表达水平，发现其中具有明显表达差异的lncRNA片段，探讨其与肝细胞癌的发生之间的关系，从而为肝细胞癌的早期检测及靶向治疗寻找更好的途径和方法。通过筛选，本专利技术首次发现了肝细胞癌中LINC01311或LINC00189显著性上调，并且大样本进一步证明了上述结果；同时，细胞实验证明，改变LINC01311或LINC00189的表达水平可以影响肝细胞癌细胞的增殖能力；提示LINC01311或LI本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.检测基因表达水平的试剂在制备诊断肝细胞癌的产品中的应用，其特征在于，所述基因选自LINC01311或LINC00189的一种或两种。

【技术特征摘要】
1.检测基因表达水平的试剂在制备诊断肝细胞癌的产品中的应用，其特征在于，所述基因选自LINC01311或LINC00189的一种或两种。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述试剂选自：特异性识别所述基因的探针；或特异性扩增所述基因的引物。3.一种诊断早期肝细胞癌的产品，其特征在于，所述产品包括检测权利要求1所述的基因的表达水平的试剂。4.根据权利要求3所述的产品，其特征在于，所述试剂包括特异性识别所述基因的探针；或特异性扩增所述基因的引物。5.根据权利要求4所述的产品，其特征在于，所述特异性扩增LINC01311的引物序列如SEQIDNO.1～2所示，特异性扩增LINC00189的引物序列如SEQIDNO...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈圣雄，徐晓云，胡静，
申请(专利权)人：河北医科大学第二医院，
类型：发明
国别省市：河北,13