锌指蛋白ZNF146的用途制造技术

本发明专利技术公开了锌指蛋白ZNF146在制备鼻咽癌诊断试剂盒中的应用，以及能够提高细胞或组织中锌指蛋白ZNF146表达量或ZNF146 mRNA含量的试剂在制备抗鼻咽癌的药物中的应用。基于本发明专利技术的应用，为鼻咽癌的诊断提供了有力的依据，并为鼻咽癌的治疗提供了新的思路和有效的药物。

【技术实现步骤摘要】
锌指蛋白ZNF146的用途
本专利技术涉及肿瘤抑制
，尤其是锌指蛋白ZNF146在制备鼻咽癌诊断试剂盒中的用途。
技术介绍
鼻咽癌是我国南方高发的恶性肿瘤，主要治疗手段是放疗和化疗。但是放化疗尤其是放疗存在着严重的头颈部并发症，主要包括长年的口干、牙齿松动、耳鸣、消瘦和体质虚弱等；晚期远处转移病人仍然缺乏有效的治疗手段[1]。因此，阐明鼻咽癌进展的分子机制，为发展新的治疗手段和策略提供理论依据，具有重要意义。转录因子在调节基因表达过程中发挥关键作用，其异常是癌症发生发展的主要原因之一，因此也是癌症诊治靶标的研究热点[2]。目前已报道的鼻咽癌相关转录因子包括：1)功能激活或者上调的转录因子：MYC[3]、HIF1A[4]、EZH2[5]、COPS5[6]、TWIST1[7]、BMI1[8]、EPAS1[9]、SNAI1[10]和PARP1[11]；2)功能抑制或者下调的转录因子：PML[12]、NRF1[13]、PAWR[14]、FEZF2[15]、ATOH8[16]、HOXC8[17]、PRDM2[18]、RARB[19]和HOPX[10]等。这些转录因子的功能涉及鼻咽癌的增殖、干性、转移和治疗耐受等特性，因此成为鼻咽癌诊治研究的靶标。转录因子ZNF146是一个33KDa的Kruppel蛋白，结构上仅由10个重复的锌指结构域(motif)组成[20](图1)，在人的各种组织中普遍高表达[21](http://www.proteinatlas.org)，表现出“看家基因”的特性。转基因小鼠显示，乳腺特异性表达ZNF146导致乳腺发育迟滞[22]，表现出“生长抑制”的特性。除了转录因子活性以外，已知ZNF146与端粒蛋白hRap1[20]和泛素连接酶UBC9[23]存在相互作用。目前，ZNF146调控的下游靶基因以及上游调控其表达的基因未见报道。总之，目前ZNF146的功能还知之甚少。常见抑瘤基因(如TP53和RB1等)在鼻咽癌中鲜有发生突变[24]。目前，已报道的鼻咽癌相关抑瘤基因(如CDKN2A/B、RASSF1、THY1、CADM1、DLC1、PTPRG、SOX1和DAB2等)大多由于启动子甲基化导致表达下调或缺失，从而失去抑瘤作用[24]。最近，南方医科大学李欣教授课题组也发现，启动子甲基化是抑瘤基因PTEN在鼻咽癌表达下调的原因之一[25]。为全面探究鼻咽癌的甲基化图谱，中山大学马骏教授课题组开展了鼻咽癌全基因组的甲基化分析[26]，发现2173个CpG岛在鼻咽癌特异甲基化；同时他们发现转录因子HOPX的启动子甲基化介导鼻咽癌的远处转移[10]。但是，在他们发现的2173个鼻咽癌特异甲基化CpG岛中，没有ZNF146的CpG岛；可能的原因是，他们所用的Illumina450KBeadChip中，有关ZNF146CpG岛的探针在鼻咽癌中没有检测到信号。
技术实现思路
基于上述问题，本申请的专利技术人在研究ZNF146功能的过程中发现，ZNF146在鼻咽癌组织中表达量比鼻咽非癌组织下调，基于此发现，进行了相关的研究探索。基于上述研究的结果，本专利技术提供了以下技术方案：在第一个方面，本专利技术提供了锌指蛋白ZNF146在制备鼻咽癌诊断试剂盒中的应用。根据本申请的专利技术人的发现，在鼻咽癌组织中锌指蛋白ZNF146的表达量显著低于鼻咽非癌组织中ZNF146的表达量，由此，通过检测同一个患者鼻咽癌组织以及鼻咽非癌组织中ZNF146的表达量，可以为鼻咽癌诊断提供重要的依据。在第二个方面，本专利技术提供了一种鼻咽癌诊断试剂盒，所述试剂盒中含有用于检测细胞或组织中锌指蛋白ZNF146的表达量或ZNF146mRNA含量的试剂。其中，检测锌指蛋白ZNF146的表达量的试剂优选为ZNF146的抗体；检测ZNF146mRNA含量的试剂优选用于荧光定量PCR的ZNF146mRNA的扩增引物。在第三个方面，本专利技术提供了锌指蛋白ZNF146在制备或筛选抗鼻咽癌的药物中的应用。根据专利技术人的发现，沉默ZNF146促进鼻咽癌细胞体外增殖和增加干性，说明正常的鼻咽非癌细胞中ZNF146锌指蛋白具有一定的表达水平，由此可知，通过提高细胞或组织中锌指蛋白ZNF146表达量或ZNF146mRNA含量可以抑制鼻咽癌细胞的增殖和干性，进而起到抗鼻咽癌的效果。在第四个方面，本专利技术提供了能够提高细胞或组织中锌指蛋白ZNF146表达量或ZNF146mRNA含量的试剂在制备抗鼻咽癌的药物中的应用。在第五个方面，本专利技术提供了ZNF146基因启动子的去甲基化药物在制备或筛选抗鼻咽癌的药物中的应用。根据专利技术人的发现，ZNF146基因启动子的去甲基化后，在鼻咽癌细胞中ZNF146mRNA含量显著提高，基于上述第三个方面的分析，ZNF146基因启动子的去甲基化试剂具有抗鼻咽癌的效果。优选地，所述去甲基化药物为5-杂氮-2-脱氧胞苷。在第六个方面，本专利技术提供了一种抗鼻咽癌的药物，所述药物中含有能够提高细胞或组织中锌指蛋白ZNF146表达量或ZNF146mRNA含量的试剂。优选地，所述药物中含有ZNF146基因启动子的去甲基化药物。优选地，所述去甲基化药物为5-杂氮-2-脱氧胞苷。综上所述，本专利技术的有益效果为：本申请的专利技术人在研究ZNF146功能的过程中发现，ZNF146在鼻咽癌组织中表达量比鼻咽非癌组织下调；沉默ZNF146促进鼻咽癌细胞体外增殖和增加干性；ZNF146基因启动子的去甲基化后，在鼻咽癌细胞中ZNF146mRNA含量显著提高，为鼻咽癌的诊断提供了有力的依据，并为鼻咽癌的治疗提供了新的思路和有效的药物。附图说明图1为锌指蛋白ZNF146的结构域示意图；其中，ZNF146由292个氨基酸组成，包含10个重复的锌指C2H2样结构域；图2基于102例鼻咽癌和慢性鼻咽炎基因芯片的表达谱聚类结果图，其中，蓝色条带对应一型非角化性鼻咽癌，绿色条带对应慢性鼻咽炎，橙色条带对应二型非角化性鼻咽癌；图3是五个二型非角化性NPC主要调节因子的相互调控关系图；图4是五个主要调节因子调控635个二型非角化性NPC的上调基因的关系图；图5是免疫组化实验检测ZNF146的结果图，显示了在鼻咽癌组织标本上的表达谱及与临床病理特征的相关性；其中，A-B显示免疫组化显示ZNF146表达在鼻咽癌中显著下调；C是ZNF146在不同TNM分期鼻咽癌组织中表达的代表性图；D显示ZNF146在不同TNM分期的阳性率；备注：*P<0.05,#p<0.001；图6是ZNF146沉默对鼻咽癌细胞的影响检测结果图，显示ZNF146沉默(采用ShRNA2)促进鼻咽癌细胞的体外增殖；其中，A-B显示ZNF146沉默促进鼻咽癌细胞(CNE2和SUNE1细胞)体外增殖(CCK8assay)；C-D显示克隆形成实验证实沉默ZNF146促进鼻咽癌细胞(SUNE1和HONE1-EBV细胞)体外增殖；备注：*P<0.05,**P<0.01,#p<0.001；图7是ZNF146沉默对鼻咽癌细胞的干性影响检测结果图，显示ZNF146沉默(采用ShRNA2)增加鼻咽癌细胞的干性；其中，A-B显示ZNF146沉默促进鼻咽癌细胞(CNE2和SUNE1细胞)形成肿瘤球；C显示ZNF146沉默促进鼻咽癌细胞本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.锌指蛋白ZNF146在制备鼻咽癌诊断试剂盒中的应用。

【技术特征摘要】
1.锌指蛋白ZNF146在制备鼻咽癌诊断试剂盒中的应用。2.一种鼻咽癌诊断试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中含有用于检测细胞或组织中锌指蛋白ZNF146的表达量或ZNF146mRNA含量的试剂。3.锌指蛋白ZNF146在制备或筛选抗鼻咽癌的药物中的应用。4.能够提高细胞或组织中锌指蛋白ZNF146表达量或ZNF146mRNA含量的试剂在制备抗鼻咽癌的药物中的应用。5.ZNF146基因启动子的去甲基化药物在制备或筛选...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄仲曦，章建平，林桃燕，汪佳宏，姜浩元，林献威，冯玉珍，
申请(专利权)人：南方医科大学，广州序科码生物技术有限责任公司，
类型：发明
国别省市：广东,44