一种测定肌酐的试剂盒及方法技术

本发明专利技术公开了一种测定肌酐的试剂盒及方法，试剂盒包括第一试剂，所述第一试剂包括：磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、乙二胺四乙酸、Brij 35、吐温80、抗坏血酸氧化酶、肌酸酶、肌氨酸氧化酶、TOOS、过氧化物酶、亚铁氰化钾、硫酸庆大酶素和吐温30；方法包括以下步骤：1)按原料组分及含量分别溶解第一试剂和第二试剂；2)将溶解的第一试剂加入待测样品中；3)加入溶解的第二试剂；4)测定溶液在546nm波长下的吸光率；本发明专利技术提供了精密度、准确性均较高且稳定的测定肌酐的试剂盒及方法。

【技术实现步骤摘要】
一种测定肌酐的试剂盒及方法
本专利技术涉及生物医药领域，尤其涉及一种测定肌酐的试剂盒及方法。
技术介绍
肌酐(Creatinine,Cr)检测试剂盒，供医疗机构用于体外定量检测人血清样本中的肌酐(Creatinine,Cr)的含量，作辅助诊断用。人体内肌肉代谢产生的肌酐释放进入血液后，则为血肌酐。血肌酐与肌酐清除率并不完全一致，肌酐清除率较血肌酐更为敏感。在肾功能减退早期(代偿期)，肌酐清除率下降而血肌酐却正常。当肾小球滤过率下降到正常的50％以上时，血肌酐才开始迅速上升，因此当血肌酐明显高于正常时，常表示肾功能已严重损害。由于肌酐清除率还受到肾小球浓缩功能的影响，在肾浓缩功能受损的情况下，血肌酐就是反映肾小球功能的最可靠指标。正常男性血肌酐为53-106gmol/L，女性为44.2-97.2gmol/L。血肌酐增高:见于肢端肥大症、巨人症、糖尿病、感染、进食肉类、运动、摄入药物(如维生素C、左旋多巴、甲基多巴等)、急性或慢性肾功能不全。血肌酐减低:见于重度充血性心力衰竭、贫血、肌营养不良、白血病、素食者，以及服用雄激素、噻嗪类药等。在众多肌酐(Creatinine,Cr)检测试剂盒中，主要有以下几种方法：1.肌酐测定试剂盒(苦味酸法)产品性能结构及组成氢氧化钠120mmol/l、苦味酸2.9mmol/l、防腐剂；但是该方法由于苦味酸法的特异性较差,影响测定值的干扰物质较多，这种干扰在测定低值标本时尤其明显,，易造成结果的重复性较差2.同位素稀释液相色谱串联质谱法(ID-LC-MS/MS)；但是该方法价格昂贵且需特定的仪器,一定程度上限制了它的应用。3.干化学法，但是该方法对临床高值样本的结果的准确性较差。4.肌酐测定试剂盒(酶法)产品性能结构及组成试剂1:肌酸酶,肌氨酸氧化酶,N-(3-磺丙基)-3-甲氧-5-甲基苯胺；试剂2:肌酐酶,4-氨基安替吡啉,过氧化物酶,叠氮化钠；但是该方法酚磺乙胺对肌酐酶偶联肌氨酸氧化酶法法检测肌酐有负干扰。
技术实现思路
针对上述技术问题，本专利技术提供了精密度、准确性均较高且稳定的测定肌酐的试剂盒及方法。本专利技术的第一个方面，提供了一种测定肌酐的试剂盒，包括第一试剂，所述第一试剂包括：磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、乙二胺四乙酸、Brij35、吐温80、抗坏血酸氧化酶、肌酸酶、肌氨酸氧化酶、TOOS、过氧化物酶、亚铁氰化钾、硫酸庆大酶素和吐温30。优选地，所述亚铁氰化钾在所述第一试剂中含量为1.5-3.5mg/L。优选地，所述乙二胺四乙酸在所述第一试剂中的含量为5-15mmol/L。优选地，所述肌酸酶在所述第一试剂中的含量为25-35U/ml，所述肌氨酸氧化酶在所述第一试剂中的含量为10-15U/ml。优选地，还包括第二试剂，所述第二试剂包括：三氨基甲烷、3-吗啉丙磺酸、4-AAP、Brij35、肌酐酶、吐温30、ProClin150。优选地，所述ProClin150在所述第二试剂中的含量为0.06-0.10％。优选地，所述肌酐酶在所述第二试剂中的含量为300-500U/ml，所述4-AAP在所述第二试剂中的含量为1-5mmol/L。优选地，所述Brij35在所述第一试剂和所述第二试剂中的含量均为3-8％。本专利技术的第二个方面，提供了一种测定肌酐的试剂盒，包括以下原料及含量：第一试剂：0.5-3mmol/L磷酸二氢钾、25-30mmol/L磷酸氢二钾、5-15mmol/L乙二胺四乙酸、3-8％Brij35、0.5-1.5mmol/L吐温80、1500-2500U/L抗坏血酸氧化酶、25-35U/ml肌酸酶、10-15U/ml肌氨酸氧化酶、0.2-1.0mmol/LTOOS、4500-5500U/L过氧化物酶、1.5-3.5mg/L亚铁氰化钾、150000-170000U/L硫酸庆大酶素和0.1-0.5％吐温30；第二试剂：25-35mmol/L三氨基甲烷、0.1-0.3mmol/L3-吗啉丙磺酸、1-5mmol/L4-AAP、3-8％Brij35、300-500U/ml肌酐酶、0.1-0.5％吐温30、0.06-0.10％ProClin150。优选地，第一试剂：1.5mmol/L磷酸二氢钾、28.5mmol/L磷酸氢二钾、10mmol/L乙二胺四乙酸、5％Brij35、1mmol/L吐温80、2000U/L抗坏血酸氧化酶、30U/ml肌酸酶、13.5U/ml肌氨酸氧化酶、0.6mmol/LTOOS、5000U/L过氧化物酶、2.5mg/L亚铁氰化钾、160000U/L硫酸庆大酶素和0.3％吐温30；第二试剂：30mmol/L三氨基甲烷、0.1mmol/L3-吗啉丙磺酸、2mmol/L4-AAP、6％Brij35、400U/ml肌酐酶、0.3％吐温30、0.08％ProClin150。本专利技术的第三个方面，提供了本专利技术所述的试剂盒的使用方法，包括以下步骤：1)按原料组分及含量分别溶解第一试剂和第二试剂；2)将溶解的第一试剂加入待测样品中；3)加入溶解的第二试剂；4)测定溶液在546nm波长下的吸光率。优选地，所述第一试剂、所述第二试剂的PH值均为8.0。本专利技术的试剂盒能够实现精密度、准确性均较高且稳定，其主要原理包括以下内容：1、本专利技术的专利技术人发现，本专利技术的乙二胺四乙酸能够与试剂中的金属离子结合，避免金属离子干扰，从而大大增加了试剂盒的准确性。2、本专利技术的第一试剂和第二试剂中均加入了ProClin150，ProClin150在第一试剂和第二试剂主要起到抑制第一试剂和第二试剂自身反应、降解的功能，具有较好的稳定性和低毒性，从而大大增加了试剂盒的稳定性。3、在本专利技术的试剂盒中，Brij35可以抑制过氧化氢酶的活性，高铁氰化钾可以起到去除样胆红素干扰。庆大素属于抗生素发挥抑菌作用，维持试剂稳定性。与现有技术相比，本专利技术的技术方案具有以下优点：本专利技术提供了精密度、准确性均较高且稳定的测定肌酐的试剂盒及方法；本专利技术使用方便、操作简单，参与偶联反应的成分都很稳定，不会引起内外源物质的干扰，稳定性好，可以长时间使用。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1是本专利技术测定肌酐的试剂盒的制备流程图。具体实施方式以下将结合附图对本专利技术的构思、具体结构及产生的技术效果作进一步说明，以充分地了解本专利技术的目的、特征和效果。实施例1根据图1所示的流程制备试剂盒，大体包括以下步骤：1、主要材料及仪器第一试剂：磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、乙二胺四乙酸、Brij35、吐温80、抗坏血酸氧化酶、肌酸酶、肌氨酸氧化酶、TOOS、过氧化物酶、亚铁氰化钾、硫酸庆大酶素、和吐温30。第二试剂：三氨基甲烷、3-吗啉丙磺酸、4-AAP、Brij35、肌酐酶、吐温30、ProClin150。仪器：AL104精密电子天平(灵敏度0.1mg)、TC30K型精密电子天平(灵敏度10mg)、T1000Y型电子天平(灵敏度10mg)、磁力搅拌器(99-1型)、精密酸度计(FE20)、电子秤(灵敏度20g)、玻璃烧杯、量本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种测定肌酐的试剂盒，其特征在于，包括第一试剂，所述第一试剂包括：磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、乙二胺四乙酸、Brij 35、吐温80、抗坏血酸氧化酶、肌酸酶、肌氨酸氧化酶、TOOS、过氧化物酶、亚铁氰化钾、硫酸庆大酶素和吐温30。

【技术特征摘要】
1.一种测定肌酐的试剂盒，其特征在于，包括第一试剂，所述第一试剂包括：磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、乙二胺四乙酸、Brij35、吐温80、抗坏血酸氧化酶、肌酸酶、肌氨酸氧化酶、TOOS、过氧化物酶、亚铁氰化钾、硫酸庆大酶素和吐温30。2.如权利要求1所述的测定肌酐的试剂盒，其特征在于，所述亚铁氰化钾在所述第一试剂中含量为1.5-3.5mg/L。3.如权利要求1所述的测定肌酐的试剂盒，其特征在于，所述乙二胺四乙酸在所述第一试剂中的含量为5-15mmol/L。4.如权利要求1所述的测定肌酐的试剂盒，其特征在于，所述肌酸酶在所述第一试剂中的含量为25-35U/ml，所述肌氨酸氧化酶在所述第一试剂中的含量为10-15U/ml。5.如权利要求1所述的测定肌酐的试剂盒，其特征在于，还包括第二试剂，所述第二试剂包括：三氨基甲烷、3-吗啉丙磺酸、4-AAP、Brij35、肌酐酶、吐温30、ProClin150。6.如权利要求5所述的测定肌酐的试剂盒，其特征在于，所述ProClin150在所述第二试剂中的含量为0.06-0.10％。7.如权利要求5所述的测定肌酐的试剂盒，其特征在于，所述肌酐酶在所述第二试剂中的含量为300-500U/ml，所述4-AAP在所述第二试剂中的含量为1-5mmo...

【专利技术属性】
技术研发人员：高国华，
申请(专利权)人：上海高踪医疗器械科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31