一种海棠水提液中根皮苷的分离纯化方法技术

本发明专利技术提供一种海棠水提液中根皮苷的分离纯化方法，具体是将海棠水提取液在75‑85℃下浓缩得浸膏；待浸膏降至室温后，转入0～5℃的冷库静置结晶20‑30h；将结晶后的浸膏与冰水混匀，分离，滤除母液；滤出母液后，加入冰水清洗，甩干得到含根皮苷的产品；将根皮苷粗品在常温下，乙醇溶解，过滤，减压浓缩，收膏，加入热水混匀后静置降温，待温度降到常温以后转入0～5℃的冷库静置，结晶20‑30h得根皮苷纯品。利用常用的工业设备和溶剂开发出一种经济适用、稳定可靠的用于湖北海棠水提取液中根皮苷的分离方法，并具有工艺简单、安全可靠，易于实施，回收率高、成本低廉等特点。

A Method for Separation and Purification of Phloretin from Water Extract of Begonia crabapple

The invention provides a method for separating and purifying rhizocarpin in the water extract of Begonia crabapple, in particular, the water extract of Begonia crabapple is concentrated at 75 85 (?) C to obtain extract; when the extract is reduced to room temperature, it is transferred to a cold storage at 0-5 (?) C and crystallized for 20 30 h; after mixing the crystallized extract with ice water, the extract is separated and the mother liquor is filtered; after the mother liquor is filtered, the product containing rhizocarpin is washed with ice water and dried. The crude product of phloretin was dissolved in ethanol at room temperature, filtered, concentrated under vacuum, collected and mixed with hot water to cool down. After the temperature dropped to room temperature, it was transferred to a cold storage at 0-5 C and then crystallized for 20-30 hours to obtain the pure product of phloretin. An economical, stable and reliable method for the separation of phloretin from the water extract of Begonia hupehensis was developed by using common industrial equipment and solvents. The method has the advantages of simple process, safety and reliability, easy implementation, high recovery and low cost.

【技术实现步骤摘要】
一种海棠水提液中根皮苷的分离纯化方法
本专利技术涉及一种湖北海棠水提取液中根皮苷的分离纯化方法及其在工业化生产中的应用
技术介绍
根皮苷最早是从苹果、苹果树皮及叶等提取而得，由苷元根皮素和葡萄糖结合成的黄酮苷类化合物，属于二氢查尔酮苷。目前研究表明，根皮苷对糖尿病及其并发症的防治有独特效果，同时具有良好的抗氧化、抗癌、美白等作用。湖北海棠(Malushupehensis(Pamp.)Rehd.)，产于湖北、湖南、江西、江苏、浙江、安徽、福建、广东、甘肃、陕西、河南、山西、山东、四川、云南、贵州等地。生山坡或山谷丛林中，海拔50-2900米。湖北海棠中含有根皮苷，各部位含量在0.9～13％不等，其中，湖北海棠嫩枝及叶中含量最高，可以作为提取根皮苷的来源(方荣，等，湖北海棠中根皮苷含量测定，食品科技，2008年33卷6期)。前期研究证明以热水为溶剂可有效将根皮苷从湖北海棠嫩枝和嫩叶中提取出来，并已将相关技术申请专利(邓改改，等，湖北海棠叶中根皮苷的提取方法，专利号：ZL201410346970.7)。相比以乙醇为溶剂进行提取，以水为溶剂进行根皮苷的提取具有安全、低成本、工艺简单等特点，适应工业化生产的要求，但水的极性大，提取时溶解的杂质较多，对根皮苷的分离纯化造成一定困难。本专利技术旨在建立一种简单易行的方法从湖北海棠水提取液中分离高纯度根皮苷的方法。
技术实现思路
针对湖北海棠水提取液中杂质多，粘度大，不易分离的不足之处，本专利技术的目的在于提供一种工业级的湖北海棠水提取液中根皮苷的分离纯化方法，它具有工艺简单、安全可靠，易于实施，回收率高、成本低廉等特点。为了实现上述目的，本专利技术是通过如下的技术方案来实现：一种湖北海棠水提取液根中皮苷的分离提纯方法，它包括如下内容：1.一种海棠水提液中根皮苷的分离纯化方法，包括如下步骤：(1)减压浓缩：将海棠水提取液在75-85℃下浓缩得浸膏，收集浸膏，静置降温；(2)低温结晶：待浸膏降至室温后，转入0～5℃的冷库静置结晶20-30h，得到结晶后的浸膏；(3)离心分离：将结晶后的浸膏与冰水混匀，倒入平板式离心机进行固液分离，滤除母液；(4)冰水洗涤：待母液全部滤出以后，再加入冰水对步骤(3)分离的根皮苷清洗，甩干后得到含根皮苷的产品；(5)粗品烘干：将含根皮苷的产品经烘干，粉碎，混合，得到根皮苷含量在65％～85％的粗品，湖北海棠提取液中根皮苷的回收率在85％～95％；(6)粗品提纯：将根皮苷粗品在常温下，采用乙醇溶解，过滤，减压浓缩，收膏，加入热水混匀后静置降温，待温度降到常温以后转入0～5℃的冷库静置，结晶20-30h后离心过滤，收集根皮苷湿品，烘干，粉碎，得到根皮苷含量在95％～99％的高纯度产品。所述的步骤(1)中，将海棠水提取液在80℃下浓缩至比重达到1.05-1.30后收集清膏。所述的步骤(3)中，清膏与冰水的体积比为1：0.9-1.2。所述的步骤(4)中，冰水与步骤(3)中的清膏的体积比为1：0.9-1.2。所述的步骤(5)中烘干是在-0.09MPa，55-65℃条件下进行烘干，干燥至根皮苷内水分含量低于6.0％。所述的步骤(6)中根皮苷粗品在常温下，采用质量浓度为95％及以上的乙醇进行溶解，其中质量浓度为95％及以上的乙醇与根皮苷粗品的质量比为9-12：1。所述的步骤(6)中减压浓缩是在45-50℃下浓缩至比重达到1.4-1.6后收膏。所述的步骤(6)中收膏后，加入90-98℃的热水混匀后静置降至室温，然后转入4℃的冷库静置，低温结晶24小时，得到根皮苷湿品。所述的步骤(6)中所述的烘干是在-0.09MPa，45-50℃条件下进行烘干，干燥至根皮苷内水分含量低于6.0％。本专利技术的有益效果：利用常用的工业设备和溶剂开发出一种经济适用、稳定可靠的用于湖北海棠水提取液中根皮苷的分离方法，并具有工艺简单、安全可靠，易于实施，回收率高、成本低廉等特点。具体实施方式下面通过实施例对本专利技术作进一步说明，但并不因此将本专利技术限制在所述的实施例中。实施例1将湖北海棠水提取液进行减压浓缩，温度控制在80℃以下，浓缩至比重达到1.15(80℃)以后，收膏，将清膏装入35L左右的敞口塑料桶中，静置降温。待湖北海棠清膏温度降至室温以后，转入0～5℃的冷库静置，低温结晶24小时，搬动时切忌剧烈晃动。将充分结晶后的浸膏与等体积的0℃冰水混匀，倒入平板式离心机进行固液分离，滤除母液。待母液全部滤出以后，再加入与原浸膏等体积的0℃冰水对离心机内根皮苷粗品进行清洗，甩干以后收集滤布内根皮苷粗品。将根皮苷铺在不锈钢托盘内，置于真空干燥箱内，在-0.09MPa，60℃条件下进行烘干，干燥至根皮苷内水分含量低于6.0％，粉碎，混合，可得根皮苷含量在65％～85％的粗品，湖北海棠提取液中根皮苷的回收率在85％～95％之间。将根皮苷粗品用10倍量95％食用乙醇在常温下充分搅拌、溶解，250目滤过，取滤液在50℃以下减压浓缩，回收食用乙醇，浓缩至比重达到1.5(50℃)，收膏，加入浸膏5倍重量的95℃热水充分混匀，装桶，静置降温，待温度降到常温以后转入0～5℃的冷库静置，低温结晶24小时，离心过滤，收集根皮苷湿品，置于真空干燥箱内，在-0.09MPa，50℃条件下进行烘干，干燥至根皮苷内水分含量低于6.0％，粉碎，混合，可得根皮苷含量在95％～99％的高纯度产品。根皮苷在不同温度下的水溶液中的溶解性研究根皮苷样品，天然产物研究与利用湖北省重点实验室(三峡大学)自制，经检测根皮苷含量为98.13％。仪器Ultimate3000高效液相色谱仪，戴安(上海)分析仪器有限公司；SB-100旋转蒸发仪，日本EYELA公司；分析电子天平，上海越平科学仪器有限公司；C18色谱柱(250×4.6mm)，北京迪马科技有限公司；数显恒温水浴锅，江苏常州智博仪器制造有限公司；转换型冷冻冷藏箱，江苏白雪股份有限公司。标准品与试剂根皮苷标准品(ANPEL公司，LotNo：94990025)；乙腈(色谱纯，Tedia公司，美国)。样品制备方法准确称取6份2.00g根皮苷样品分别置于10ml具塞玻璃试管中，每支试管加入5ml蒸馏水，置于恒温水浴锅中90℃水浴加热，每小时超声处理5分钟，如此反复处理5h，待试管中根皮苷不再溶解，将该6份样品分别置于4℃、15℃、30℃、50℃、70℃、90℃的恒温水浴环境中静置24h，取上层清液作为样品进行根皮苷含量测定。检测方法色谱条件：色谱柱为C18色谱柱(250mm×4.6mm)，流动相为27％的乙腈-水(体积比)，进样量为10μl，流速为1.0ml/min，柱温为25℃，检测波长为285nm。对照品溶液的制备：精密称取对照品根皮苷10mg，置10ml容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀得1mg/ml对照品溶液，再稀释成各种浓度，即得。准确吸取样品10μl注入液相色谱测得相应色谱峰面积，再依据标准品峰面积计算样品中根皮苷含量。实验结果根皮苷在不同温度的水溶液中含量数据见表1.表1根皮苷在不同温度的水溶液中含量水溶液温度水溶液中根皮苷含量4℃0.05％15℃0.08％30℃0.17％50℃0.54％70℃2.51％90℃24.48％表1数据显示在4℃时，根皮苷水溶液中的根皮苷含量为0.05％，7本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种海棠水提液中根皮苷的分离纯化方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）减压浓缩：将海棠水提取液在75‑85℃下浓缩得浸膏，收集浸膏，静置降温；（2）低温结晶：待浸膏降至室温后，转入0～5℃的冷库静置结晶20‑30h，得到结晶后的浸膏；（3）离心分离：将结晶后的浸膏与冰水混匀，倒入平板式离心机进行固液分离，滤除母液；（4）冰水洗涤：待母液全部滤出以后，再加入冰水对步骤（3）分离的根皮苷清洗，甩干后得到含根皮苷的产品；（5）粗品烘干：将含根皮苷的产品经烘干，粉碎，混合，得到根皮苷粗品；（6）粗品提纯：将根皮苷粗品在常温下，采用乙醇溶解，过滤，减压浓缩，收膏，加入热水混匀后静置降温，待温度降到常温以后转入0～5℃的冷库静置，结晶20‑30h后离心过滤，收集根皮苷湿品，烘干，粉碎，得到根皮苷纯品。

【技术特征摘要】
1.一种海棠水提液中根皮苷的分离纯化方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）减压浓缩：将海棠水提取液在75-85℃下浓缩得浸膏，收集浸膏，静置降温；（2）低温结晶：待浸膏降至室温后，转入0～5℃的冷库静置结晶20-30h，得到结晶后的浸膏；（3）离心分离：将结晶后的浸膏与冰水混匀，倒入平板式离心机进行固液分离，滤除母液；（4）冰水洗涤：待母液全部滤出以后，再加入冰水对步骤（3）分离的根皮苷清洗，甩干后得到含根皮苷的产品；（5）粗品烘干：将含根皮苷的产品经烘干，粉碎，混合，得到根皮苷粗品；（6）粗品提纯：将根皮苷粗品在常温下，采用乙醇溶解，过滤，减压浓缩，收膏，加入热水混匀后静置降温，待温度降到常温以后转入0～5℃的冷库静置，结晶20-30h后离心过滤，收集根皮苷湿品，烘干，粉碎，得到根皮苷纯品。2.根据权利要求1所述的海棠水提液中根皮苷的分离纯化方法，其特征在于，步骤（1）中，将海棠水提取液在80℃下浓缩至比重达到1.05-1.30后收集清膏。3.根据权利要求1所述的海棠水提液中根皮苷的分离纯化方法，其特征在于，步骤（3）中，清膏与冰水的体积比为1：0.9-1.2。4.根据权利要求1所述的海棠水...

【专利技术属性】
技术研发人员：邓改改，李国荣，冯天艳，刘坪，杨迎，曹红烨，汪鋆植，
申请(专利权)人：三峡大学，
类型：发明
国别省市：湖北,42