The invention discloses a method for preparing a series of new agar oligosaccharides with single degree of polymerization by using immobilized enzymes, including the following steps: (1) obtaining agar powder from Vibrio sodium-requiring bacterium HJPHYXJ 1; (2) preparation of immobilized carrier; (3) preparation of immobilized enzymes; (4) preparation of a series of new agar oligosaccharides. The invention adopts immobilized enzyme technology to prepare immobilized agarase and applies it to the preparation of new agar oligosaccharides. Through simple magnetic separation, the reuse of agarase can be realized, and the post-treatment steps can be simplified, thus greatly reducing the production cost of new agar oligosaccharides. In addition, the immobilized carrier used in the invention is simple to prepare, and the immobilization method is simple and effective, which is for the future. The industrialized production of neo-agar oligosaccharides provides theoretical and technical support.
【技术实现步骤摘要】
一种利用固定化酶制备系列单一聚合度的新琼寡糖的方法
本专利技术属于新琼寡糖制备
,具体涉及一种利用固定化酶制备系列单一聚合度的新琼寡糖的方法。
技术介绍
琼脂糖是一种主要来源于江蓠、石花菜、紫菜等红藻细胞壁,由α(1→3)糖苷键连结的β-D-半乳呋喃糖和β(1→4)糖苷键连结的3,6-内醚-α-L-半乳呋喃糖交替连接而成的线性中性多糖。新琼寡糖是由琼脂糖经水解所得到的由琼二糖为重复单元连接而成的聚合度为2-10的低聚糖,以D-半乳糖为还原性末端。新琼寡糖具有多种生理活性,包括降血糖、降血脂、抗炎、抗氧化、益生元、美白护肤等。目前,有关新琼寡糖生理活性的研究大多集中于新琼寡糖混合物,也有少量文献报道新琼四糖和新琼六糖的活性,而对于新琼二糖、八糖和十糖的活性几乎没有文献报道,这可能是因为这些单一聚合度新琼寡糖难以获得,更遑论工业化生产。不同聚合度的新琼寡糖具有不同的生理活性,因此,制备高纯度的单一聚合度新琼寡糖并研究其生理活性,对于新琼寡糖的全面开发应用具有重要的理论价值和现实意义。近年来,有关新琼寡糖的研究和应用逐渐增多,但其制备方法是限制新琼寡糖产业化开发的瓶颈问题。目前,新琼寡糖的制备方法主要有酸解法和酶解法两种,其中酸解法降解速度快,方法简便,但存在环境不友好、反应条件剧烈和产物复杂不可控等缺点,制约了该方法的大规模应用。而酶解法具有环境友好、降解条件温和及产物纯度较高等优点,成为近年来新琼寡糖制备的主要方法。虽然酶解法具有诸多优点,但作为酶解反应的关键催化剂-琼胶酶的活性易受酶解条件的影响且难以重复利用,同时对于产物的分离纯化也会造成一定的影响 ...
【技术保护点】
1.一种利用固定化酶制备系列单一聚合度的新琼寡糖的方法,其特征在于:包括如下步骤:(1)将需钠弧菌HJPHYXJ‑1从斜面培养基转接至种子培养基,振荡培养得种子液,将种子液接种至液体培养基中,接种量为5.5~6.5%,发酵温度34~36℃,搅拌转速90~110rpm,发酵时间45~50h,接着将获得的发酵液离心除去菌体后所得上清液,该上清液经硫酸铵沉淀分离,再透析,冻干得琼胶酶粉末;(2)固定化载体的制备:取氧化石墨烯加入乙醇溶液中,超声分散0.4~0.6h后,加入等摩尔的铁盐和亚铁盐,继续超声分散18~22min后,加入氨水溶液于58~62℃回流温度下反应1~2h后,通过磁分离、水洗、干燥得GO/Fe3O4复合磁性载体;上述铁盐为氯化铁或其水合物、硫酸铁或其水合物及硝酸铁或其水合物中的至少一种,上述亚铁盐为七水合硫酸亚铁或其水合物、氯化亚铁或其水合物及硝酸亚铁或其水合物中的至少一种;(3)固定化酶的制备:将步骤(2)制备的GO/Fe3O4复合磁性载体加入戊二醛水溶液进行交联反应,反应时间为2~10h,反应结束后过滤,以磷酸盐缓冲液清洗滤出物,再配制成浓度为4~6wt%的混悬液,加入步 ...
【技术特征摘要】
2018.09.06 CN 20181103679411.一种利用固定化酶制备系列单一聚合度的新琼寡糖的方法,其特征在于:包括如下步骤:(1)将需钠弧菌HJPHYXJ-1从斜面培养基转接至种子培养基,振荡培养得种子液,将种子液接种至液体培养基中,接种量为5.5~6.5%,发酵温度34~36℃,搅拌转速90~110rpm,发酵时间45~50h,接着将获得的发酵液离心除去菌体后所得上清液,该上清液经硫酸铵沉淀分离,再透析,冻干得琼胶酶粉末;(2)固定化载体的制备:取氧化石墨烯加入乙醇溶液中,超声分散0.4~0.6h后,加入等摩尔的铁盐和亚铁盐,继续超声分散18~22min后,加入氨水溶液于58~62℃回流温度下反应1~2h后,通过磁分离、水洗、干燥得GO/Fe3O4复合磁性载体;上述铁盐为氯化铁或其水合物、硫酸铁或其水合物及硝酸铁或其水合物中的至少一种,上述亚铁盐为七水合硫酸亚铁或其水合物、氯化亚铁或其水合物及硝酸亚铁或其水合物中的至少一种;(3)固定化酶的制备:将步骤(2)制备的GO/Fe3O4复合磁性载体加入戊二醛水溶液进行交联反应,反应时间为2~10h,反应结束后过滤,以磷酸盐缓冲液清洗滤出物,再配制成浓度为4~6wt%的混悬液,加入步骤(1)制得的琼胶酶粉末,其中的GO/Fe3O4复合磁性载体与上述琼胶酶的质量比为24~26∶1孵育2~5h后,经...
【专利技术属性】
技术研发人员:叶静,张娜,肖美添,林福娣,黄雅燕,张学勤,
申请(专利权)人:华侨大学,
类型:发明
国别省市:福建,35
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。