本发明专利技术公开了一种利用钛基介孔硅胶复合材料提取三角帆蚌缩醛磷脂的方法，包括以下步骤：将三角帆蚌粉A1进行粗脂提取；将所得的脂质粗提物B1进行碱性反应，得到碱性反应物C1；制备钛基介孔硅胶复合材料；将钛基介孔硅胶复合材料填装于层析柱，将碱性反应物C1加入层析柱内，使用有机溶剂淋洗层析柱，收集淋洗液，干燥后得到缩醛磷脂。本发明专利技术的提取方法具有缩醛磷脂得率高、产品纯度好，利用废弃资源、利于环保的特点。
Extraction of Acetaldehyde Phospholipid from Hyriopsis cumingii by Titanium-based Mesoporous Silica Gel Composites
The invention discloses a method for extracting acetal phospholipids from Hyriopsis cumingii by using titanium-based mesoporous silica gel composite materials, which includes the following steps: extracting crude lipid from Hyriopsis cumingii powder A1; alkaline reaction of the obtained crude lipid extract B1 to obtain alkaline reactant C1; preparing titanium-based mesoporous silica gel composite materials; filling titanium-based mesoporous silica gel composite materials on chromatographic column and alkaline Compound C1 was added into the column, and the column was eluted with organic solvent. The eluent was collected and dried to obtain acetal phospholipids. The extraction method of the invention has the characteristics of high yield of acetal phospholipid, good product purity, utilization of waste resources and environmental protection.
【技术实现步骤摘要】
利用钛基介孔硅胶复合材料提取三角帆蚌缩醛磷脂的方法
本专利技术涉及三角帆蚌缩醛磷脂提取方法，特别是一种利用钛基介孔硅胶复合材料提取三角帆蚌缩醛磷脂的方法。
技术介绍
三角帆蚌(HyriopsiscumingiiLea)俗称河蚌、珍珠蚌、三角蚌，淡水双壳类软体动物，属双壳纲、蚌科、帆蚌属。其壳大而扁平，壳面黑色或棕褐色，厚而坚硬，长近20厘米，后背缘向上伸出一帆状后翼，使蚌形呈三角状。三角帆蚌是我国特有的物种，有重要的经济价值，在淡水育珠蚌中所产珍珠的珍珠层厚、光泽强、质量极佳。三角帆蚌的肉质粗韧，土腥味重难以食用，往往被作为废弃物丢弃或用于饲料加工，经济附加值低。然后其含有丰富的蛋白质、脂质、维生素和无机矿物元素等，具有较好的加工利用空间。缩醛磷脂(plasmalogen)是一种含醚的磷脂，其特征是在sn-1位置的醚键和sn-2位置的酯键，其中sn-1位置通常连接着C16:0；C18:0或C18:1的脂肪醇，sn-2位置多连接着多聚不饱和脂肪酸(PUFAs)，头部多连接着乙醇胺基或胆碱基。研究发现，贝类的肌肉和内脏中均含有缩醛磷脂。由于sn-1位存在烯醚键的特殊结构，缩醛磷脂相比于普通磷脂具有更多更全面的生理生化活性。随着分子生物学的不断发展，在对各种人类疾病的发病机制和磷脂组学的研究中，缩醛磷脂的各种生物活性也不断被发现和证实。有研究表明，缩醛磷脂作为一种特殊的磷脂分子，在代谢过程中，表现出了多种不同的生理功能，缩醛磷脂的代谢异常，将会引发一系列的疾病。半个世纪来，缩醛磷脂不断被证实与阿尔兹海默症具有直接联系。经过大量的实验证明，缩醛磷脂可以：使神经细胞新生、神经元突出，神经细胞强化作用、保护脑细胞，抗氧化、预防神经细胞凋亡、减少神经炎症、代谢β淀粉样蛋白积累、提升记忆力和学习力、改善阿尔兹海默症。因此，研究三角帆蚌中的缩醛磷脂，对研发新型药物和保健功能食品，提高三角帆蚌附加值具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种利用钛基介孔硅胶复合材料提取三角帆蚌缩醛磷脂的方法；本专利技术的提取方法具有缩醛磷脂得率高、产品纯度好(91.6％)，利用废弃资源、利于环保的特点。为了解决上述技术问题，本专利技术提供一种利用钛基介孔硅胶复合材料提取三角帆蚌缩醛磷脂的方法，包括以下步骤：A、三角帆蚌预处理：将三角帆蚌洗净去壳、去除囊腺、取肌肉组织清洗后制成糜状(使用斩拌机)，干燥后制粉，得三角帆蚌粉A1；B、粗脂提取：在三角帆蚌粉A1中加入有机溶剂Ⅰ后充分混合均匀，搅拌(200±40rpm)提取2±0.5h；然后加入水，震荡(剧烈震荡)后离心(以9000rpm离心20min)，取下清液(待溶液分层后移取下清液)；将下清液干燥(减压干燥)，得到脂质粗提物B1；向脂质粗提物B1中加入冷丙酮(预冷为0℃的丙酮)，所得沉淀为磷脂粗体物B2；备注：磷脂不溶于丙酮，且丙酮温度越低，磷脂溶解度越差；因此加入冷丙酮后磷脂析出；C、碱性反应：向步骤B所得的磷脂粗体物B2加入有机溶剂II，使磷脂粗体物B2溶解(充分溶解)，随后加入含有碱性物质的有机溶剂III，室温反应30±10min；在反应所得物中加入萃取液IV，震荡(剧烈震荡)后离心(以9000rpm离心20min)，将下清液干燥(减压干燥)，然后使用有机溶剂II复溶，得到碱性反应物C1；D、制备钛基介孔硅胶复合材料：分别取溴代十六烷基吡啶、尿素，加入水后混合均匀，继续加入环己烷、异丙醇混合均匀；在搅拌条件下(200±40rpm)滴加(滴加时间为4～6分钟)正硅酸四乙酯，得到混合物D1；溴代十六烷基吡啶：尿素：水：环己烷：异丙醇：正硅酸四乙酯＝6g：3g：130～170mL：130～170mL：4～6mL：14～16mL的用量比(优选6g：3g：150mL：150mL：5mL：15mL的用量比)；将混合物D1回流(约70℃)反应24±2h；反应结束后过滤，所得滤饼先用乙醇、水润洗，干燥后置于马弗炉500±50℃煅烧4±0.5h，得到介孔硅胶D2；向乙醇中加入钛酸四叔丁酯，混合后加热至60±10℃，保温条件下再加入所述介孔硅胶D2后混合均匀、搅拌至干(乙醇被挥发)，然后静置于100±10℃反应12±2h，得到反应产物D3；所述介孔硅胶D2：乙醇：钛酸四叔丁酯＝7.5～8.5g：120～160mL：33～37g的用量比(优选8g：140mL：35g的用量比)；向水热反应釜中加入反应产物D3和水，于60±10℃反应6±1h，反应结束后过滤，所得滤饼置于马弗炉500±50℃煅烧5±0.5h，得到钛基介孔硅胶复合材料；所述反应产物D3：水＝1g/20±5mL；E、缩醛磷脂分离纯化：将钛基介孔硅胶复合材料填装于层析柱(30mm×300mm的层析柱)，将步骤C所得的碱性反应物C1加入层析柱内，先使用有机溶剂V淋洗层析柱10±2min，再使用有机溶剂VI淋洗层析柱30±5min，收集有机溶剂VI对应的淋洗液，干燥(减压干燥)后得到缩醛磷脂；所述有机溶剂V为乙腈：水：甲酸：甲酸铵＝950mL：50mL：1mL：125mg的用量比混合而成；所述有机溶剂VI为乙腈：水：甲酸：甲酸铵＝700mL：300mL：1mL：750mg的用量比混合而成；所述淋洗的流速为5mL/min。备注：步骤B的三角帆蚌粉A1的量为10g时，配用的钛基介孔硅胶复合材料为50±10g。作为本专利技术的利用钛基介孔硅胶复合材料提取三角帆蚌缩醛磷脂的方法的改进，所述步骤B中：有机溶剂Ⅰ为1,2二氯乙烷：甲醇＝1：2体积比的混合液，三角帆蚌粉A1与有机溶剂Ⅰ的料液比为1g/25±5mL；所述水的用量为有机溶剂Ⅰ的0.6±0.1体积倍；所述冷丙酮温度为0℃，用量为有机溶剂Ⅰ的0.2±0.05体积倍。作为本专利技术的利用钛基介孔硅胶复合材料提取三角帆蚌缩醛磷脂的方法的进一步改进，所述步骤C中：有机溶剂II为1,2二氯乙烷：甲醇＝1：1体积比的混合液，溶解时，步骤B中的三角帆蚌粉A1与有机溶剂II的料液比为1g/30±5mL；含有碱性物质的有机溶剂III为氢氧化钠甲醇水溶液，其中氢氧化钠：甲醇：水＝14g：960mL：40mL，步骤B中的三角帆蚌粉A1与含有碱性物质的有机溶剂III的料液比为1g/5±1mL；萃取液IV为1,2二氯乙烷：水＝5：3体积比的混合液，步骤B中的三角帆蚌粉A1与萃取液IV的料液比为1g/50±5mL；复溶时，步骤B中的三角帆蚌粉A1与有机溶剂II的料液比为1g/1±0.1mL。本专利技术以三角帆蚌为原料，通过脂质粗提取、碱性反应、钛基介孔硅胶复合材料分离等一系列技术手段，制备高含量的缩醛磷脂。其中碱性反应能有效分解磷脂酯键，保留具有烯醚键的缩醛磷脂。钛基介孔硅胶复合材料中的钛基对磷脂的磷酸基团具有较好的选择性，同时介孔硅胶比普通硅胶具有更大的表面积，从而显著提高钛基的负载量，使得钛基介孔硅胶复合材料对缩醛磷脂具有显著的分离效果，缩醛磷脂纯度可以达到91.6％，提取率高(缩醛磷脂98mg(以10g三角帆蚌粉A1计))。本专利技术中的利用钛基介孔硅胶复合材料提取三角帆蚌缩醛磷脂的方法具有产品品质好、产品附加值高，利用废弃资源、利于环保的特点。本专利技术提供了利用钛基介孔硅胶复合材料提取三角帆蚌缩醛磷脂的方法。附图说明下面结合附本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.利用钛基介孔硅胶复合材料提取三角帆蚌缩醛磷脂的方法，其特征在于包括以下步骤：A、三角帆蚌预处理：将三角帆蚌洗净去壳、去除囊腺、取肌肉组织清洗后制成糜状，干燥后制粉，得三角帆蚌粉A1；B、粗脂提取：在三角帆蚌粉A1中加入有机溶剂Ⅰ后充分混合均匀，搅拌提取2±0.5h；然后加入水，震荡后离心，取下清液；将下清液干燥，得到脂质粗提物B1；向脂质粗提物B1中加入冷丙酮，所得沉淀为磷脂粗体物B2；C、碱性反应：向步骤B所得的磷脂粗体物B2加入有机溶剂II，使磷脂粗体物B2溶解；随后加入含有碱性物质的有机溶剂III，室温反应30±10min；在反应所得物中加入萃取液IV，震荡后离心，将下清液干燥，然后使用有机溶剂II复溶，得到碱性反应物C1；D、制备钛基介孔硅胶复合材料：分别取溴代十六烷基吡啶、尿素，加入水后混合均匀，继续加入环己烷、异丙醇混合均匀；在搅拌条件下滴加正硅酸四乙酯，得到混合物D1；溴代十六烷基吡啶：尿素：水：环己烷：异丙醇：正硅酸四乙酯＝6g：3g：130～170mL：130～170mL：4～6mL：14～16mL的用量比；将混合物D1回流反应24±2h；反应结束后过滤，所得滤饼先用乙醇、水润洗，干燥后于500±50℃煅烧4±0.5h，得到介孔硅胶D2；向乙醇中加入钛酸四叔丁酯，混合后加热至60±10℃，保温条件下再加入所述介孔硅胶D2后混合均匀、搅拌至干，然后静置于100±10℃反应12±2h，得到反应产物D3；所述介孔硅胶D2：乙醇：钛酸四叔丁酯＝7.5～8.5g：120～160mL：33～37g的用量比；向水热反应釜中加入反应产物D3和水，于60±10℃反应6±1h，反应结束后过滤，所得滤饼于500±50℃煅烧5±0.5h，得到钛基介孔硅胶复合材料；所述反应产物D3：水＝1g/20±5mL；E、缩醛磷脂分离纯化：将钛基介孔硅胶复合材料填装于层析柱，将步骤C所得的碱性反应物C1加入层析柱内，先使用有机溶剂V淋洗层析柱10±2min，再使用有机溶剂VI淋洗层析柱30±5min，收集有机溶剂VI对应的淋洗液，干燥后得到缩醛磷脂；所述有机溶剂V为乙腈：水：甲酸：甲酸铵＝950mL：50mL：1mL：125mg的用量比混合而成；所述有机溶剂VI为乙腈：水：甲酸：甲酸铵＝700mL：300mL：1mL：750mg的用量比混合而成；所述淋洗的流速为5mL/min。...
【技术特征摘要】
1.利用钛基介孔硅胶复合材料提取三角帆蚌缩醛磷脂的方法，其特征在于包括以下步骤：A、三角帆蚌预处理：将三角帆蚌洗净去壳、去除囊腺、取肌肉组织清洗后制成糜状，干燥后制粉，得三角帆蚌粉A1；B、粗脂提取：在三角帆蚌粉A1中加入有机溶剂Ⅰ后充分混合均匀，搅拌提取2±0.5h；然后加入水，震荡后离心，取下清液；将下清液干燥，得到脂质粗提物B1；向脂质粗提物B1中加入冷丙酮，所得沉淀为磷脂粗体物B2；C、碱性反应：向步骤B所得的磷脂粗体物B2加入有机溶剂II，使磷脂粗体物B2溶解；随后加入含有碱性物质的有机溶剂III，室温反应30±10min；在反应所得物中加入萃取液IV，震荡后离心，将下清液干燥，然后使用有机溶剂II复溶，得到碱性反应物C1；D、制备钛基介孔硅胶复合材料：分别取溴代十六烷基吡啶、尿素，加入水后混合均匀，继续加入环己烷、异丙醇混合均匀；在搅拌条件下滴加正硅酸四乙酯，得到混合物D1；溴代十六烷基吡啶：尿素：水：环己烷：异丙醇：正硅酸四乙酯＝6g：3g：130～170mL：130～170mL：4～6mL：14～16mL的用量比；将混合物D1回流反应24±2h；反应结束后过滤，所得滤饼先用乙醇、水润洗，干燥后于500±50℃煅烧4±0.5h，得到介孔硅胶D2；向乙醇中加入钛酸四叔丁酯，混合后加热至60±10℃，保温条件下再加入所述介孔硅胶D2后混合均匀、搅拌至干，然后静置于100±10℃反应12±2h，得到反应产物D3；所述介孔硅胶D2：乙醇：钛酸四叔丁酯＝7.5～8.5g：120～160mL：33～37g的用量比；向水热反应釜中加入反应产物D3和水，于60±10℃反应6±1h，反应结束后过滤，所得滤饼于500±50℃煅烧5±0.5h，得到钛基...
【专利技术属性】
技术研发人员：沈清，
申请(专利权)人：浙江工商大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33
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