一种白芨组培苗菌根化的方法技术

本发明专利技术公开了一种白芨组培苗菌根化的方法，包括如下步骤：步骤1，利用白芨的菌根真菌JSNLBJ‑001制备液体菌剂；步骤2，在白芨组培苗移栽前的练苗阶段往白芨组培苗的培养基中加入适宜浓度的液体菌剂，进行菌根化培养；步骤3，待组培苗的茎基部长满菌丝并能观察到其根部有菌丝附着后，将白芨菌根化组培苗从组培瓶里取出，并去除其根部和茎基部的培养基，然后将白芨菌根化组培苗移栽到白芨育苗基质中进行驯化。本发明专利技术方法能够为白芨大田栽培提供优质的驯化苗，该方法通过在白芨组培苗移栽前，加入白芨菌根真菌制得的液体菌剂使其组培苗根系菌根化，菌根化的组培苗移栽后，成活率可达99％以上，生长量大，新芽分蘖多且长势旺盛，抗逆性强。

A method of mycorrhizal transformation of tissue culture seedlings of Scutellaria baicalensis

The invention discloses a method for mycorrhizalization of tissue culture seedlings of Scutellaria baicalensis, which comprises the following steps: step 1, preparing liquid fungus agent by using the mycorrhizal fungus JSNLBJ 001 of Scutellaria baicalensis; step 2, adding appropriate concentration of liquid fungus agent into the culture medium of tissue culture seedlings of Scutellaria baicalensis before transplanting, and carrying out mycorrhizal culture; step 3, waiting for the stem base of tissue culture seedlings to be full of mycelium and able to grow. The mycorrhizal tissue culture seedlings of Bletilla baicalensis were removed from the tissue culture bottle after the mycelium attached to the root, and the culture medium of the root and stem base was removed. Then, the Bletilla baicalensis mycorrhizal tissue culture seedlings were transplanted into the Bletilla baicalensis seedling medium for domestication. The method of the invention can provide high quality domesticated seedlings for the field cultivation of Scutellaria baicalensis. The method can Mycorrhize the root system of the tissue culture seedlings by adding liquid fungi prepared by the fungi of Scutellaria baicalensis before transplanting. After transplanting, the survival rate of the mycorrhizated tissue culture seedlings can reach more than 99%, the growth is large, the new buds grow vigorously and have strong resistance to adversity.

【技术实现步骤摘要】
一种白芨组培苗菌根化的方法
本专利技术涉及一种白芨组培苗菌根化的方法，属于种苗培育

技术介绍
在自然条件下，兰科植物必须与菌根真菌建立共生关系，形成菌根后，才能完成其正常的生长发育，菌根的形成对兰花来说是必不可少的，菌根真菌向兰科植物提供碳水化合物及其它可能的次生代谢产物，如维生素和激素等物质，因此，从某种意义上讲兰科植物是寄生在真菌上的。白芨为多年生草本兰科植物，其根系结构为典型的菌根结构，其种子无胚乳，在自然条件下需要与之相适应的真菌共生才能萌发，由于组培快繁技术的兴起，解决了种子萌发的难题，现白芨种苗组培快繁已成为其栽培用苗的主要途径之一，但组培苗由于其根系没有相应的菌根真菌与之共生，致使其在驯化移栽过程中，种苗成活率、发芽率低，抗逆性差，因此，一种能够为白芨大田栽培提供优质驯化苗的白芨组培苗的组培方法的开发很有必要。
技术实现思路
专利技术目的：本专利技术所要解决的技术问题是提供一种白芨组培苗菌根化的方法，该方法通过在白芨组培苗移栽前，利用一株白芨菌根真菌制备成液体菌剂，施用于白芨组培苗培养基中，使白芨组培苗菌根化，白芨组培苗菌根化再进行移栽驯化，菌根化的组培苗在驯化移栽过程中，具有种苗成活率高、发芽率高和抗逆性好的优点。为解决上述技术问题，本专利技术所采用的技术手段为：一种白芨组培苗菌根化的方法，包括如下步骤：步骤1，利用白芨的菌根真菌JSNLBJ-001制备液体菌剂；步骤2，在白芨组培苗移栽前的练苗阶段往白芨组培苗的培养基中加入适宜浓度的液体菌剂，进行菌根化培养；步骤3，待组培苗的茎基部长满菌丝并能观察到其根部有菌丝附着后，将白芨菌根化组培苗从组培瓶里取出，并去除其根部和茎基部的培养基，然后将白芨菌根化组培苗移栽到白芨育苗基质中进行驯化。其中，步骤1中，菌根真菌为淡紫紫孢菌(Purpureocilliumlilacinum)，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物，保藏编号为CGMCCNO：13690。其中，步骤1中，液体菌剂的制作方法为：将菌根真菌JSNLBJ-001菌株自低温保藏的斜面试管菌种活化后，接种于PDA培养皿中，于24～30℃恒温培养5～10d，然后在菌落边缘打孔成菌饼，将菌饼接入液体培养基中，液体震荡培养7～10d，培养温度26～28℃，转速120～160rpm；待球状菌丝长满液体培养基后，将其放入搅拌机中打碎成悬浮状的液体菌剂。其中，本专利技术方法中用于菌根化的白芨组培苗，为可出组培瓶移栽的成品组培苗。其中，所述液体培养基的组成为：燕麦20～30g/L+葡萄糖25～30g/L+二水氯化钙2.5g/L+马铃薯80～120g/L，培养基pH值为5.8～6.5；其中，马铃薯为其浸出液。液体培养基配制后分装到真菌用三角瓶或培养瓶中，分装量为80～100mL/瓶，然后放入高压灭菌锅内高压灭菌，冷却后接入菌饼。其中，步骤2中，所述液体菌剂添加量为10～15mL/瓶。其中，步骤2中，液体菌剂接入白芨组培苗后，在温室大棚内敞开瓶盖放置培养10～15d，待菌丝长满组培苗茎基部，观察到白芨组培苗根部有菌丝附着后，进行出苗移栽。其中，步骤3中，白芨育苗基质组成为：珍珠岩20～30份，稻壳30～40份，泥炭土100～150份，腐殖土50～80份，磷酸钙15～30份；将上述基质组分按配方体积比混合后，进行白芨菌根化组培苗的移栽。其中，步骤2中，在白芨组培苗移出组培瓶前，将组培苗从培养室移至温室大棚中，组培苗移至温室大棚中时，需在温室大棚上方放置遮阴网进行遮阴，遮阴率为50～80％，避免光照太强灼伤组培苗，大棚内温度控制在25～30℃。有益效果：本专利技术方法能够为白芨大田栽培提供优质的驯化苗，该方法通过在白芨组培苗移栽前，加入白芨菌根真菌制得的液体菌剂使其组培苗根系菌根化，菌根化的组培苗移栽后，成活率可达99％以上，生长量大，新芽分蘖多且长势旺盛，抗逆性强。与不接菌根真菌的白芨组培苗相比，白芨组培苗菌根化后其发芽率、成活率和抗逆性都有显著提高。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术技术方案作进一步说明。实施例1菌株的分离与鉴定菌株JSNLBJ-001是2015年5月在江苏省句容市江苏茅山道地药材有限公司白芨种植区内生长状况较好的植株上分离获得的。分离方法为：取野生新鲜的白芨根，将根段表面的基质土壤用流动的自来水冲洗干净后，在超净工作台上用滤纸吸干表面的水分。再用灭菌的去离子水冲洗干净，然后分次浸入质量浓度为75％酒精45s，质量浓度为2％次氯酸钠溶液浸泡消毒5min。消毒完成后，用灭菌的去离子水冲洗5～6次以彻底去除次氯酸钠，再用灭菌的滤纸吸干根表面的残留水滴，然后用灭菌的解剖刀将根段切成0.5mm左右的组织段。将组织段转移到加有硫酸链霉素(100μg/mL)的PDA培养基平板上，每个平板上接种5个组织段，每种培养基接15个平板。将分离获得的内生真菌进行回接试验，得到本专利技术所用菌株，将该菌株定名为JSNLBJ-001，该菌株能明显促进白芨幼苗的生长，提高幼苗的成活率。菌株JSNLBJ-001的菌落特征如下：形态学特征观察表明：在PDA培养基上培养7d，菌落直径3.5cm，生长较慢。菌落墨绿色，毛毡状，革质，边缘整齐，有1mm左右透明外圈。扩增ITS区全序列并进行测序，PCR扩增得到的16sRNA全序列如下所示。PCR扩增得到的全序列(SEQIDNO.1)：CTAAGAAAGTTGGGCGTTTTACGGCGTGACCGCCTCCGCGCTCCGGTGCGAGGTGTGTGCTACTACGCAGGGGAGGCTGCGGCGGGGTCGCCACTGCATTTCGGGGGCGGCTGGTGTGCCGTCCCCCAACACCGAGGCCCCCGGGGGGGCTCGAGGGTTGAAATGACGCTCGAACAGGCATGCCCGCCAGAATGCTGGCGGGCGCAATGTGCGTTCAAAGATTCGATGATTCACTGAATTCTGCAATTCACATTACTTATCGCATTTCGCTGCGTTCTTCATCGATGCCAGAACCAAGAGATCCGTTGTTGAAAGTTTTGATTCATTTGTTTTTGCTTGTGCAACTCAGAGAAGAAATTCCGCCCGCTGGGCGTAATGCAAGAGAGTTTGGGGTCCCTGCGGCGGGCGCCTGGGTCCGGCGCCGGCGCGGGGGCAGGCGGCCGGGGCGTTCCCGCCGAGGCAACTGAGGTAAGGTTCACAGTGGGTTTGGGAGTTGTATAACTCGGTAATGATCCCTCCGCAGGTCACCCCTACGGAA经形态学及分子生物学鉴定表明，该菌株为淡紫紫孢菌(Purpureocilliumlilacinum)，其分类地位为子囊菌门粪壳菌纲肉座菌目蛇形虫草科紫孢属，菌株号为JSNLBJ-001，现已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNO：13690，保藏日期为2017年3月10日，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，邮编100101。本专利技术方法中所使用的白芨菌根真菌JSNLBJ-001已在公开号为CN107629966A的专利中有详细本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种白芨组培苗菌根化的方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1，利用白芨的菌根真菌JSNLBJ‑001制备液体菌剂；步骤2，在白芨组培苗移栽前的练苗阶段往白芨组培苗的培养基中加入适宜浓度的液体菌剂，进行菌根化培养；步骤3，待组培苗的茎基部长满菌丝并能观察到其根部有菌丝附着后，将白芨菌根化组培苗从组培瓶里取出，并去除其根部和茎基部的培养基，然后将白芨菌根化组培苗移栽到白芨育苗基质中进行驯化。

【技术特征摘要】
1.一种白芨组培苗菌根化的方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1，利用白芨的菌根真菌JSNLBJ-001制备液体菌剂；步骤2，在白芨组培苗移栽前的练苗阶段往白芨组培苗的培养基中加入适宜浓度的液体菌剂，进行菌根化培养；步骤3，待组培苗的茎基部长满菌丝并能观察到其根部有菌丝附着后，将白芨菌根化组培苗从组培瓶里取出，并去除其根部和茎基部的培养基，然后将白芨菌根化组培苗移栽到白芨育苗基质中进行驯化。2.根据权利要求1所述的白芨组培苗菌根化的方法，其特征在于：步骤1中，菌根真菌为淡紫紫孢菌(Purpureocilliumlilacinum)，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物，保藏编号为CGMCCNO：13690。3.根据权利要求1所述的白芨组培苗菌根化的方法，其特征在于：步骤1中，液体菌剂的制作方法为：将菌根真菌JSNLBJ-001菌株自低温保藏的斜面试管菌种活化后，接种于PDA培养皿中，于24～30℃恒温培养5～10d，然后在菌落边缘打孔成菌饼，并将菌饼接入液体培养基中，液体震荡培养7～10d，培养温度26～28℃，转速120～160rpm；待球状菌丝长满液体培养基后，将其放入搅拌机中打碎成...

【专利技术属性】
技术研发人员：席刚俊，酒亚东，李傲伟，顾陈恩，孙明宇，陈雪萍，
申请(专利权)人：江苏农林职业技术学院，
类型：发明
国别省市：江苏,32