【技术实现步骤摘要】
烟草悬浮细胞的培养方法
本专利技术属于植物
,涉及烟草细胞悬浮培养体系。
技术介绍
烟草是管花目茄科烟草属的一年或有限多年生草本植物,是一种重要的经济作物,在社会经济领域和自然科学研究领域扮演着重要的角色,同时又是一种科学研究的模式植物,在植物细胞工程研究领域占有重要地位。目前烟草细胞培养的研究和报道不少,但悬浮细胞液中多为几个细胞粘黏的小细胞团,不利于后续细胞代谢和细胞生物学研究。影响烟草悬浮培养细胞分散性的因素很多,研究发现主要与添加激素的浓度、生长速度和细胞滤筛孔径密切相关。针对烟草悬浮细胞培养的研究还不够完善,因此本专利技术提供一种烟草悬浮细胞培养的方法,能够在短时间内获得大量烟草悬浮细胞,且细胞间很少粘黏,通过细胞培养技术手段解决烟草细胞资源的需求。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供烟草悬浮细胞的培养方法,本专利技术的有益效果是能够在短时间内获得大量且分散性较好的烟草悬浮细胞,可为烟草细胞的代谢组学或细胞生物学研究提供充足的原料。本专利技术所采用的技术方案是按照以下步骤进行:步骤1:无菌苗及愈伤组织的获得;(1)将烟草种子依次用清水冲洗,用乙醇浸泡,无菌水冲洗,H2O2浸泡,无菌水冲洗,播种于MS固体培养基中;(2)将无菌幼苗转接到MS固体培养基中培养,获得无菌组培苗;(3)将无菌幼苗叶片剪成小块,平铺于愈伤组织诱导培养基中,温室内暗培养,长出乳白色愈伤组织;步骤2:愈伤组织的继代培养;取长势较好,无褐化的愈伤组织转接到新的相同培养基中,2周转接一次,保证愈伤组织的营养含量及无菌环境,继代3代后,得到分散性较好且松脆的愈伤组织;步骤3:悬 ...
【技术保护点】
1.烟草悬浮细胞的培养方法,其特征在于按照以下步骤进行:步骤1:无菌苗及愈伤组织的获得;(1)将烟草种子依次用清水冲洗,用乙醇浸泡,无菌水冲洗,H2O2浸泡,无菌水冲洗,播种于MS固体培养基中;(2)将无菌幼苗转接到MS固体培养基中培养,获得无菌组培苗;(3)将无菌幼苗叶片剪成小块,平铺于愈伤组织诱导培养基中,温室内暗培养,长出乳白色愈伤组织;步骤2:愈伤组织的继代培养;取长势较好,无褐化的愈伤组织转接到新的相同培养基中,2周转接一次,保证愈伤组织的营养含量及无菌环境,继代3代后,得到分散性较好且松脆的愈伤组织;步骤3:悬浮细胞体系的建立;取愈伤组织碾碎,接种到悬浮细胞液体培养基,保证装悬浮细胞液体培养基的容器的溶氧和通气充分;步骤4:悬浮细胞的再培养;将上层的悬浮细胞液转移到无菌空三角瓶中继续振荡培养,3天后采用同样的方法再转接一次,7‑8天后采用同样的方法再转接一次,将悬浮细胞经筛网过滤后接种到新鲜培养基中继续振荡培养,用同样的方法连续培养3代后,可获得稳定且分散性较好的悬浮细胞,建立稳定的烟草细胞悬浮培养体系。
【技术特征摘要】
1.烟草悬浮细胞的培养方法,其特征在于按照以下步骤进行:步骤1:无菌苗及愈伤组织的获得;(1)将烟草种子依次用清水冲洗,用乙醇浸泡,无菌水冲洗,H2O2浸泡,无菌水冲洗,播种于MS固体培养基中;(2)将无菌幼苗转接到MS固体培养基中培养,获得无菌组培苗;(3)将无菌幼苗叶片剪成小块,平铺于愈伤组织诱导培养基中,温室内暗培养,长出乳白色愈伤组织;步骤2:愈伤组织的继代培养;取长势较好,无褐化的愈伤组织转接到新的相同培养基中,2周转接一次,保证愈伤组织的营养含量及无菌环境,继代3代后,得到分散性较好且松脆的愈伤组织;步骤3:悬浮细胞体系的建立;取愈伤组织碾碎,接种到悬浮细胞液体培养基,保证装悬浮细胞液体培养基的容器的溶氧和通气充分;步骤4:悬浮细胞的再培养;将上层的悬浮细胞液转移到无菌空三角瓶中继续振荡培养,3天后采用同样的方法再转接一次,7-8天后采用同样的方法再转接一次,将悬浮细胞经筛网过滤后接种到新鲜培养基中继续振荡培养,用同样的方法连续培养3代后,可获得稳定且分散性较好的悬浮细胞,建立稳定的烟草细胞悬浮培养体系。2.按照权利要求1所述烟草悬浮细胞的培养方法,其特征在于:所述步骤(1)中(1)将烟草种子用清水冲洗数次,用75%乙醇浸泡30秒,无菌水冲洗3次,15%H2O2浸泡15min,无菌水冲洗5次,播种于MS培养基中,所有操作均在超净工作台中操作;(2)将无菌幼苗转接到MS固体...
【专利技术属性】
技术研发人员:陈爱国,王树声,刘光亮,张彦,许娜,
申请(专利权)人:中国农业科学院烟草研究所,
类型:发明
国别省市:山东,37
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