The invention belongs to the field of DNA extraction method, in particular to a kit for extracting genomic DNA of hydroponic plants and a method for extracting genomic DNA. The kit comprises sample buffer, DNA extract, chloroform with a volume ratio of 24:1: isoamyl alcohol mixture, isopropanol, ethanol solution with a volume fraction of 70%-75%, ddH_2 and cellulase. The sample buffer is 100-150 g/L glucose solution. The method comprises the steps of material pretreatment, extraction, protein removal, precipitation, cleaning and dissolution. The kit and method of the present invention avoid using liquid nitrogen in the process of DNA extraction, improve the convenience of using the reagent, reduce the risk of liquid nitrogen frostbite operator's hand, and take a short time.
【技术实现步骤摘要】
一种提取水培植物基因组DNA的试剂盒及提取方法
本专利技术属于DNA提取方法领域,具体涉及一种提取水培植物基因组DNA的试剂盒及提取方法。
技术介绍
DNA是动植物遗传物质,其在研究物种进化,生理功能方面具有重要作用。CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)法是传统且较为常见的植物DNA提取方法。CTAB法提取DNA的原理如下:利用CTAB在高离子强度的缓冲液中与蛋白质和大多数酸性多聚糖以外的多聚糖形成复合物,但不沉淀核酸的特性,用离心获得含DNA的上清液,用氯仿和异戊醇混合液使蛋白质变性、分层,同时除去脂类的方法,达到提取和纯化DNA的目的。传统的CTAB方法虽然适用于大部分动植物以及微生物DNA的提取,但因其耗时长,所以现有技术针对不同的样品做了不同的改进。以“改进的CTAB提取植物DNA方法,李荣华,实验室研究与探索,2009年”记载的方法为例,该文献记载的方案针对的是植物叶片样本DNA的提取,经过改进后,CTAB法提取DNA主要包括(1)液氮研磨样品步骤,耗时15min左右,(2)DNA提取液提取步骤,耗时45min左右,DNA提取液是CTAB、NaCl、EDTA、Tris-HCl、β-巯基乙醇、水的混合物,(3)除蛋白步骤,耗时20min左右,(4)异丙醇沉淀步骤,耗时1h以上,(5)乙醇溶液清洗、干燥步骤,耗时30min左右。该方法总计耗时2小时50分钟以上。上述改进的CTAB方法缩短了提取时间,可以使学生在较短的时间内直接观察到DNA的丝状沉淀,也可以在琼脂糖电泳中确定出提取的DNA分子的大小。但是,由于上述方法采用的液氮研磨,液氮温度非常低,液氮的 ...
【技术保护点】
1.一种提取水培植物基因组DNA的试剂盒,其特征在于,包括样品缓冲液、DNA提取液、体积比24:1的氯仿:异戊醇混合液、异丙醇、体积分数70%~75%的乙醇溶液、ddH2O、纤维素酶;所述样品缓冲液为100~150g/L的葡萄糖溶液;所述DNA提取液的配方如下:CTAB 2g、NaCl 1.4mol、0.5mol/L pH8.0的EDTA溶液4mL、1mol/L pH8.0的Tris‑HCl溶液10mL、β‑巯基乙醇2.5mL,双蒸水定容至100mL。
【技术特征摘要】
1.一种提取水培植物基因组DNA的试剂盒,其特征在于,包括样品缓冲液、DNA提取液、体积比24:1的氯仿:异戊醇混合液、异丙醇、体积分数70%~75%的乙醇溶液、ddH2O、纤维素酶;所述样品缓冲液为100~150g/L的葡萄糖溶液;所述DNA提取液的配方如下:CTAB2g、NaCl1.4mol、0.5mol/LpH8.0的EDTA溶液4mL、1mol/LpH8.0的Tris-HCl溶液10mL、β-巯基乙醇2.5mL,双蒸水定容至100mL。2.根据权利要求1所述的提取水培植物基因组DNA的试剂盒,其特征在于,所述样品缓冲液为100g/L的葡萄糖溶液或者150g/L的葡萄糖溶液。3.一种利用权利要求1所述的试剂盒提取水培植物基因组DNA的方法,其特征在于,包括以下步骤:S1,样品预处理:将采集的水培植物组织与样品缓冲液混合,研磨5~10min,加入样品75mg/mL的纤维素酶溶液,置于37℃15min,得到破壁溶液;S2,提取:向破壁溶液中加入1~2倍体积的DNA提取液,混匀,65℃水浴加热20~40...
【专利技术属性】
技术研发人员:王学敏,张锦锦,崔苗苗,温红雨,
申请(专利权)人:中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,
类型:发明
国别省市:北京,11
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