The invention relates to a method for preparing IKU2 gene of Paeonia purpurea, belonging to the field of biotechnology. The preparation methods of the gene are as follows: (1) extraction of total RNA from Paeonia purpurea seeds, (2) synthesis of the first strand of DNA, (3) amplification of the conservative region of IKU2 gene, (4) recovery and purification of the amplified products of PCR, (5) preparation of the target fragment and the cloning vector pMD 19 T, (6) preparation of the competent cells of Escherichia coli DH5alpha strain, (7) transformation of the connecting products, (8) extraction of recombinant plasmids, (9) sequencing. \u3002 The IKU2 gene regulating seed size is screened from the transcriptome libraries of Paeonia purpurea seeds at different developmental stages, which provides molecular basis for improving seed yield of Paeonia purpurea by genetic engineering technology.
【技术实现步骤摘要】
紫斑牡丹IKU2基因制备方法
本专利技术属于生物工程
，本专利技术具体涉及紫斑牡丹IKU2基因制备方法。
技术介绍
牡丹为芍药科(Paeoniaceae)芍药属(Oaeonia)的多年生落叶小灌木。开发利用木本油料可以有效的缓解我国食用油不足的现状，2011年3月，国家卫生部监督局根据《食品安全法》的规定及新资源食品评审专家委员会审核，公开批准牡丹籽油为新资源食品，牡丹籽油被定为新型健康木本食用油。目前中国大面积示范种植的油用牡丹品种主要有适合南方气候的凤丹(P.ostii)和适合北方气候的紫斑牡丹(P.suffruticosaAndr.var.papaveracea)。但其较小的种子(横径0.88±0.04cm、纵径1.00±0.07cm)则制约了牡丹的高效开发和利用。紫斑牡丹具有极高的观赏价值和药用价值,它含有以高比例的不饱和脂肪酸(92％以上)和α-亚麻酸(43％以上)为特征的黑色椭圆形种子，种子油对癌症、心血管疾病、炎症和自身免疫疾病等具有明显疗效。近年来，由于牡丹籽油的价值和需求越来越大，因此解析牡丹种子大小机制和油脂合成调控机制具有重要的理论和应...
【技术保护点】
1.紫斑牡丹IKU2基因制备方法，其特征在于，具体步骤如下：步骤1、紫斑牡丹种子总RNA的提取；步骤2、cDNA第一链的合成；步骤3、紫斑牡丹IKU2基因保守区的扩增；步骤4、PCR扩增产物的回收纯化；步骤5、连接目的片段与克隆载体pMD 19‑T；步骤6、大肠杆菌DH5α菌株感受态细胞的制备；步骤7、连接产物的转化；步骤8、重组质粒的提取；步骤9、测序；将PCR检测后的质粒送往测序，对测序结果进行分析。
【技术特征摘要】
1.紫斑牡丹IKU2基因制备方法，其特征在于，具体步骤如下：步骤1、紫斑牡丹种子总RNA的提取；步骤2、cDNA第一链的合成；步骤3、紫斑牡丹IKU2基因保守区的扩增；步骤4、PCR扩增产物的回收纯化；步骤5、连接目的片段与克隆载体pMD19-T；步骤6、大肠杆菌DH5α菌株感受态细胞的制备；步骤7、连接产物的转化；步骤8、重组质粒的提取；步骤9、测序；将PCR检测后的质粒送往测序，对测序结果进行分析。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在所述的步骤2中，以提取的RNA作为模板进行反转录反应，然后合成cDNA。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在所述的步骤3中，根据油用牡丹IKU2基因的保守区域设计特异性引物，正向引物序列FP:ATTGGTGAACCTCTCCCTTTAC反向引物序列RP:CTCTGAAGCGTCGATGTAATCA，以cDNA作为模板进行PCR扩增。4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在所述的步骤4中，将步骤3中PCR反应产物进行1.0％琼脂糖凝胶电泳检测，在凝胶成像仪上观察，在紫外灯下切下含有目的DNA的琼脂糖凝胶，用干净纸巾吸尽凝胶表面液体，切除不含目的DNA部分的凝胶，减小凝胶体积，提高DNA回收率，对所切目的DNA凝胶部分进行回收纯化。5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在所述的步骤5中，利用pMD19-T载体与目的片段连接。6.根据权利要求1所...
【专利技术属性】
技术研发人员：丁健，韩平，阮成江，闫蕊，刘凌悦，吴波，董旭，
申请(专利权)人：大连民族大学，
类型：发明
国别省市：辽宁,21
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