一种测序文库构建的方法、建库试剂及其应用技术

本申请公开了一种测序文库构建的方法、建库试剂及其应用。本申请的测序文库构建方法，包括采用简并引物对富集的靶标基因进行恒温扩增，然后对恒温扩增产物进行末端修复、加“A”碱基、加接头，纯化获得测序文库；简并引物的5’端具有标签序列，3’端为随机序列。本申请的测序文库构建方法，通过简并引物对靶标基因进行恒温扩增，得到适合于测序的片段化DNA，省略了打断步骤，避免了由此造成的标签序列丢失和测序无用数据。本申请的测序文库构建方法简化了建库流程、缩短了建库周期、降低了建库成本、提高了数据利用率，为高通量测序提供了一种新的建库方案。

A Method for Constructing Sequencing Library, Reagent for Constructing Library and Its Application

This application discloses a method for constructing a sequencing library, a library building reagent and its application. The construction method of sequencing Library in this application includes constant temperature amplification of enriched target genes with degenerate primers, terminal repair of the products, addition of \A\ base and joints, and purification to obtain sequencing library. The 5'end of degenerate primers has a tag sequence and the 3' end is a random sequence. The construction method of sequencing Library in this application obtains fragmented DNA suitable for sequencing by constant temperature amplification of target gene with degenerate primers, omitting interruption steps, avoiding the loss of tag sequence and useless sequencing data. The method of constructing sequencing library simplifies the process of building database, shortens the period of building database, reduces the cost of building database, and improves the utilization rate of data. It provides a new method of building database for high throughput sequencing.

【技术实现步骤摘要】
一种测序文库构建的方法、建库试剂及其应用
本申请涉及测序文库构建领域，特别是涉及一种测序文库构建的方法、建库试剂及其应用。
技术介绍
地中海贫血是由基因缺陷引起的，血红蛋白中一种或者一种以上珠蛋白合成异常，导致的贫血或病理状态，其基因突变类型多样，包括多种缺失型及点突变型。地中海贫血的检测方法包括sanger测序、qPCR、NGS、探针捕获测序、基因芯片分型等。使用高通量测序检测地贫突变具有成本低、通量高、准确度高的特点。现有技术中，基于IlluminaHiseq2500测序平台构建地中海贫血文库的方法主要包括以下步骤：(1)使用带有特定标签序列的特异性引物扩增人血红蛋白基因，其目的是获得富集的测序靶标基因；(2)混合PCR产物并纯化打断，其目的是将富集的靶标基因打断成适合于测序的长度；(3)将打断的DNA进行末端修复；(4)在已修复的DNA片段的3’端加上一个“A”碱基，并纯化；(5)用DNA连接酶将特异性接头连接至DNA片段的两端，纯化；步骤(3)至步骤(5)的目的是在打断的片段两端添加测序接头，以方便测序；(6)对加接头的DNA序列进行琼脂糖胶电泳，切胶回收一定大小的片段，纯化本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种测序文库构建的方法，其特征在于：包括采用简并引物对富集的靶标基因进行恒温扩增，然后对恒温扩增产物进行末端修复、加“A”碱基、加接头，纯化获得测序文库；所述简并引物的5’端具有标签序列，3’端为随机序列。

【技术特征摘要】
1.一种测序文库构建的方法，其特征在于：包括采用简并引物对富集的靶标基因进行恒温扩增，然后对恒温扩增产物进行末端修复、加“A”碱基、加接头，纯化获得测序文库；所述简并引物的5’端具有标签序列，3’端为随机序列。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述简并引物中，标签序列可重复的选自SeqIDNo.1至SeqIDNo.16所示序列的至少一个。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述靶标基因采用PCR扩增进行富集，PCR扩增产物采用磁珠纯化后，用于恒温扩增；所述恒温扩增产物在进行末端修复之前还包括对恒温扩增产物进行磁珠纯化；并且，在添加接头后，纯化获得测序文库，同样采用的磁珠纯化。4.一种用于测序文库构建的建库试剂，其特征在于：包括至少一组简并引物，所述简并引物具有式一所示通式，式一5’-(N)x-NNNNNN-3’，式一中，5’端的(N)x表示序列长度为x的标签序列，x的值为6-10bp，3’端的NNNNNN表示6bp的随机序列。5.根据权利要求4所述的建库试剂，其特征在于：所述(N)x可重复的选自SeqIDNo.1至SeqIDNo.16所示序列的至少一个。6.根据权利要求4所述的建库试剂，其特征在于：还包括一组特异性引物，所述特异性引物由第一引物对、第二引物对和第三引物对中的至少一对组成；第一引物对的上下游引物分别为SeqIDNo.17和SeqIDNo.18所示序列，第二引物对的上下游引物分别为SeqIDNo.19和SeqIDNo.20所示序列，第三引物对的上下游引物分别为SeqIDNo.21和SeqIDNo.22所示序列；SeqIDNo.17：5’-AGCATAAACCCTGGCGCGC-3’SeqIDNo.18：...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈俊清，张聪，唐玉婧，方俊彬，杨晓琴，钟宏斌，刘娜，
申请(专利权)人：深圳华大基因股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44