一种氟啶草酮残留量的HPLC-MS/MS测定方法技术

本发明专利技术公开了一种氟啶草酮残留量的HPLC‑MS/MS测定方法，属于农药残留量的测定技术领域，具体方案为：(1)提取：样品粉碎，加入溶剂，涡旋提取，离心；(2)净化：取上清净化得到样品液；(3)制作标准曲线；(4)测定、计算样品中氟啶草酮残量。本发明专利技术利用分散固相萃取技术，建立了简便、快速并能有效避免样品中基质干扰的样品前处理方法，将此前处理方法结合HPLC‑MS/MS应用于棉籽、棉花植株和土壤中氟啶草酮定性确证和定量检测，平均回收率为74.0％～108.8％，平均相对标准偏差(RSD)为0.9％～7.1％，检出限低于1.5μg/kg，具有操作简便、快速、准确、灵敏度高及重复性好的优点。

【技术实现步骤摘要】
一种氟啶草酮残留量的HPLC-MS/MS测定方法
本专利技术属于农药残留量的测定
，具体涉及一种除草剂氟啶草酮残留量的液质联用检测方法。
技术介绍
氟啶草酮(Fluridone),是一种吡咯烷酮类除草剂，可用于防除大多数水中或水面杂草，也可作为芽前选择性除草剂，用于防除棉花一年生窄叶、阔叶杂草及某些多年杂草。化学名称为：1-甲基-3-苯基-5-(3-三氟甲基苯基)-4-吡啶酮，英文化学名称为：l-methyl-3-phenyl-5-[3-(trifluoromethyl)-phenyl]-4pyridinone。CAS登录号为59756-60-4，分子量为329.3，外观为白色至淡黄色固体，折射率1.567，闪点222.6℃，熔点154-155℃，密度1.274g/cm3，沸点444.4℃(760mmHg)结构式为：氟啶草酮在国外应用较为广泛，有关其在环境、农产品、动植物中残留情况已有较多研究。美国已制定氟啶草酮在奶、蛋、棉籽等30多种农产品中残留限量，而中国尚未制定氟啶草酮的残留限量。目前，中国正在进行氟啶草酮防治棉田杂草的正式登记。这将为氟啶草酮在棉花上安全使用提供技术支持，进而为将来制定氟啶草酮在棉籽中的最大残留限量提供数据保障。目前公开的现有技术中，检测氟啶草酮的分析方法主要为气相色谱配电子捕获检测器(GC-ECD)。由于氟啶草酮沸点高，难气化，无法直接检测，需要将其衍生为溴化物进行检测。但该方法操作繁琐，灵敏度较低。
技术实现思路
为解决上述现有技术中检测氟啶草酮的分析方法存在的问题，本专利技术提供了一种相对于现有技术简便快捷，灵敏度高，能够同时准确测定棉花各基质中氟啶草酮的方法，具体的，是一种氟啶草酮残留量的HPLC-MS/MS测定方法，主要用于测定棉籽、棉花植株和土壤中氟啶草酮残留量。为实现以上目的，本专利技术所采用的技术方案是：一种氟啶草酮残留量的HPLC-MS/MS测定方法，包括如下步骤：(1)提取：样品粉碎，加入乙腈和去离子水，涡旋提取；然后加入氯化钠，剧烈涡旋后离心；(2)净化：取步骤(1)所得上清经C18填料净化或过有机系滤膜中的一种或两种方法净化后，得到样品液；(3)制作标准曲线：首先，配置至少3个浓度的氟啶草酮标准工作液，对标准工作液进行HPLC-MS/MS测定，以标准工作液的氟啶草酮色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准曲线；(4)测定、计算样品中氟啶草酮残量：对步骤(2)所得样品液进行HPLC-MS/MS测定，测得样品液中氟啶草酮的色谱峰面积，代入步骤(3)所得标准曲线，计算得到样品液中氟啶草酮浓度及含量，然后根据样品液所代表试样的质量计算得到样品中氟啶草酮残量；所述HPLC-MS/MS条件参数与步骤(3)所述HPLC-MS/MS相同。步骤(1)所述样品为棉籽、棉花植株或土壤；所述样品粉碎后粒径为100μm；样品与乙腈的质量体积比为1:(1-2)(g/mL)(当样品为棉籽或棉花植株时，此比例为1:2，当样品为土壤时，此比例为1:1)；所述乙腈与去离子水的体积比为2:1；所述涡旋提取时间为10min；所述氯化钠，用量与乙腈的质量体积比为2:5(g/mL)；所述剧烈涡旋，时间为1min；所述离心，转速为4000r/min，时间为5min。步骤(1)所述涡旋与剧烈涡旋分别代表选择代表仪器自带工作档位中的小功率档位和大功率档位，当使用的涡旋仪器有多个档位时，涡旋指选择的档位功率低于剧烈涡旋。步骤(2)所述有机滤膜孔径为0.22μm。步骤(3)所述标准工作液的配制方法为：将不含氟啶草酮的与步骤(1)所述样品同种类的基质作为空白样品，替代步骤(1)所述样品，按步骤(1)、(2)处理，得到空白样品液，加入含有氟啶草酮标准品的标准溶液，涡旋混匀，配制成至少3个浓度的氟啶草酮标准工作液。所述含有氟啶草酮标准品的标准溶液，配制方法为：准确称取50±0.1mg标准品于50mL容量瓶中，用乙腈溶解，定容1000.0μg/mL标准储备液；移取1.0mL标准储备液置于100mL容量瓶中，用乙腈定容得到10.0μg/mL标准中间液；将10μg/mL标准溶液稀释配成10、5、0.5、0.1、0.05μg/mL标准溶液步骤(3)、(4)所述HPLC-MS/MS中高效液相色谱条件为：色谱柱：EclipsePlusC18RRHD(50mm×2.1mm，1.8μm)，柱温：室温；流动相：0.1％(V/V)甲酸水溶液与乙腈体积比1:4，流速：0.3mL/min。步骤(3)、(4)所述HPLC-MS/MS中质谱条件为：毛细管电压：4kV，干燥气温度：300，℃干燥气流量：11L/min，雾化气压力：15psi，反应气：N2，采集方式：多反应监测模式，定量、定性离子对：m/z330>330，碰撞能量(CE)：40V。若步骤(4)中测定样品液的氟啶草酮色谱峰与步骤(3)中测定标准工作液的氟啶草酮色谱峰保留时间相一致，并且在扣除背景后的二者的质谱图中，所选择的离子均出现，则样品中含有氟啶草酮；若上述两个条件不能同时满足，则样品中不含有氟啶草酮。有益效果本专利技术利用分散固相萃取技术，建立了简便、快速并能有效避免样品中基质干扰的样品前处理方法，将此前处理方法结合HPLC-MS/MS应用于棉籽、棉花植株和土壤中氟啶草酮定性确证和定量检测，平均回收率为74.0％～108.8％，平均相对标准偏差(RSD)为0.9％～7.1％，检出限为1.5μg/kg，具有操作简便、快速、准确、灵敏度高及重复性好的优点。附图说明图1氟啶草酮(5μg/mL)标准溶液的HPLC-MS/MS选择离子色谱图。图2棉籽空白样品液添加氟啶草酮(5μg/mL)的HPLC-MS/MS选择离子色谱图。图3为不含氟啶草酮的棉籽空白样品液的HPLC-MS/MS选择离子色谱图。图4棉籽空白样品液添加氟啶草酮(10μg/mL)的HPLC-MS/MS选择离子色谱图。图5土壤基质空白样品液添加氟啶草酮(5μg/mL)的HPLC-MS/MS选择离子色谱图。图6为不含氟啶草酮的土壤空白样品液的HPLC-MS/MS选择离子色谱图。图7土壤空白样品液添加氟啶草酮(10μg/mL)的HPLC-MS/MS选择离子色谱图。图8棉花植株空白样品液添加氟啶草酮(5μg/mL)的HPLC-MS/MS选择离子色谱图。图9为不含氟啶草酮的棉花植株空白样品液的HPLC-MS/MS选择离子色谱图。图10棉花植株空白样品液添加氟啶草酮(10μg/mL)的HPLC-MS/MS选择离子色谱图。图11棉籽空白样品液为基础的氟啶草酮的标准曲线。图12棉花植株空白样品液为基础的氟啶草酮的标准曲线。图13土壤空白样品液为基础的氟啶草酮的标准曲线。具体实施方式现以以下实施实例来说明本专利技术，但并不是限制本专利技术的范围。实施例中使用的仪器与试剂高效液相色谱质谱联用仪(Agilent1290Ⅱ-6460)，Agilent公司；多功能食品加工机(XBLL-25A)，上海帅佳电子科技有限公司；电子天平(JA21002)，上海精密科学仪器有限公司；离心机(TDL-5-A)，上海安亭科学仪器厂。氯化钠(分析纯，国药集团化学试剂有限公司)；乙腈(色谱纯，瑞典欧森巴克环境化学公司)标准品：氟啶草酮标准品：纯度99.5本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种氟啶草酮残留量的HPLC‑MS/MS测定方法，其特征在于：包括如下步骤：(1)提取：样品粉碎，加入乙腈和去离子水，涡旋提取；然后加入氯化钠，剧烈涡旋后离心；(2)净化：取步骤(1)所得上清经C18填料净化或过有机系滤膜中的一种或两种方法净化后，得到样品液；(3)制作标准曲线：首先，配置至少3个浓度的氟啶草酮标准工作液，对标准工作液进行HPLC‑MS/MS测定，以标准工作液的氟啶草酮色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准曲线；(4)测定、计算样品中氟啶草酮残量：对步骤(2)所得样品液进行HPLC‑MS/MS测定，测得样品液中氟啶草酮的色谱峰面积，代入步骤(3)所得标准曲线，计算得到样品液中氟啶草酮浓度及含量，然后根据样品液所代表试样的质量计算得到样品中氟啶草酮残量；所述HPLC‑MS/MS条件参数与步骤(3)所述HPLC‑MS/MS相同。

【技术特征摘要】
1.一种氟啶草酮残留量的HPLC-MS/MS测定方法，其特征在于：包括如下步骤：(1)提取：样品粉碎，加入乙腈和去离子水，涡旋提取；然后加入氯化钠，剧烈涡旋后离心；(2)净化：取步骤(1)所得上清经C18填料净化或过有机系滤膜中的一种或两种方法净化后，得到样品液；(3)制作标准曲线：首先，配置至少3个浓度的氟啶草酮标准工作液，对标准工作液进行HPLC-MS/MS测定，以标准工作液的氟啶草酮色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准曲线；(4)测定、计算样品中氟啶草酮残量：对步骤(2)所得样品液进行HPLC-MS/MS测定，测得样品液中氟啶草酮的色谱峰面积，代入步骤(3)所得标准曲线，计算得到样品液中氟啶草酮浓度及含量，然后根据样品液所代表试样的质量计算得到样品中氟啶草酮残量；所述HPLC-MS/MS条件参数与步骤(3)所述HPLC-MS/MS相同。2.根据权利要求1所述测定方法，其特征在于：若步骤(4)中测定样品液的氟啶草酮色谱峰与步骤(3)中测定标准工作液的氟啶草酮色谱峰保留时间相一致，并且在扣除背景后的二者的质谱图中，所选择的离子均出现，则样品中含有氟啶草酮；若上述两个条件不能同时满足，则样品中不含有氟啶草酮。3.根据权利要求1所述测定方法，其特征在于：步骤(3)、(4)所述HPLC-MS/MS中高效液相色谱条件为：色谱柱：EclipsePlusC18RRHD(50mm×2.1mm，1.8μm)，柱温：室温；流动相：0.1％(V/V)甲酸水溶液与乙腈...

【专利技术属性】
技术研发人员：冯义志，梁林，张爱娟，潘金菊，齐晓雪，任玉鹏，金杰，李文平，马新刚，韩济峰，
申请(专利权)人：山东省农药科学研究院，
类型：发明
国别省市：山东,37