用于诊断皮肤癣菌病的测定法制造技术

本发明专利技术涉及包含用于扩增来自与皮肤、毛发和指甲感染相关的病原体的包含SEQ ID NO22的核酸的正向引物和反向引物的引物对，能够与来自与皮肤、毛发和指甲感染相关的病原体的包含SEQ ID NO22的核酸序列特异性杂交的核酸，包含所述核酸的承载体，包括在样品中检测来自与皮肤、毛发和指甲感染相关的病原体的包含SEQ ID NO22的核酸序列的步骤的步骤的方法，所述引物对、核酸或承载体用于诊断疾病的用途以及用于诊断疾病的包含所述引物对、核酸和/或承载体的试剂盒。

A method for the diagnosis of dermatitis

The present invention relates to a pair of forward and reverse primers containing SEQ ID NO22 for amplifying nucleic acids from pathogens associated with skin, hair and nail infections, and nucleic acids containing SEQ ID NO22 specific hybridization sequences from pathogens associated with skin, hair and nail infections. A carrier containing said nucleic acid, including a method of steps for detecting SEQ ID NO22 containing nucleic acid sequences from pathogens associated with skin, hair and nail infections in a sample, the primer pair, nucleic acid or carrier for diagnostic purposes of disease, and the containing said primer pair, nucleic acid for diagnostic purposes of disease. And / or carrier kit.

【技术实现步骤摘要】
用于诊断皮肤癣菌病的测定法专利
本专利技术涉及包含用于扩增来自与皮肤、毛发和指甲感染相关的病原体的包含SEQIDNO22的核酸的正向引物和反向引物的引物对，能够与来自与皮肤、毛发和指甲感染相关的病原体的包含SEQIDNO22的核酸序列特异性杂交的核酸，包含所述核酸的承载体，包括在样品中检测来自与皮肤、毛发和指甲感染相关的病原体的包含SEQIDNO22的核酸序列的步骤的方法，所述引物对、核酸或承载体用于诊断疾病的用途以及用于诊断疾病的包含所述引物对、核酸和/或承载体的试剂盒。
技术介绍
人致病性皮肤癣菌是感染人皮肤、指甲和毛发的真菌，其属于毛癣菌属(Trichophyton)、小孢子菌属(Microsporum)和表皮癣菌属(Epidermophyton)这三个属。虽然表皮癣菌属仅由单个物种(species)(絮状表皮癣菌(Epidermophyton.Floccosum))代表，但小孢子菌属和毛癣菌属包含几种不同的物种。最近，以前被分配到皮肤分节真菌属(Arthroderma)的几个物种已被重新归类并分配到毛癣菌属中(Hoog等人，2016)，在本专利申请中将遵循此重新分配。欧洲国家的皮肤癣菌皮肤、毛发和指甲感染的患病率在3％到22％之间。在大多数情况下，局部治疗已足够，但如果感染是由小孢子菌属和毛癣菌属的特定菌株如疣状毛癣菌(Trichophytonverrucosum)和须毛癣菌(Trichophytonmentagrophytes)引起的，则需要长期并且通常昂贵的全身治疗。全身性抗真菌剂与各种副作用相关，例如胃肠副作用，其发生在3-5％口服特比萘芬进行治疗的患者中。此外，骨髓抑制和肝脏副作用可能会出现，尽管不太频繁。因此，在设计治疗方案并开始治疗之前，应确认对特定菌株的皮肤、毛发和指甲感染的诊断。目前对皮肤癣菌的诊断是基于对临床标本中孢子和菌丝的显微鉴定，然后进行真菌的体外培养和形态鉴定。对皮肤、毛发和指甲材料的直接显微检查通常足以用于真菌感染的预先诊断，但不会导致特定物种的诊断。虽然这种技术快速而便宜，但其灵敏度相对较低，并且在所有病例的高达15％中显示出假阴性结果。在大约95％的病例中，应用培养可以在10-15天内鉴定特定的物种。然而，对于一些生长缓慢或不典型的分离株，诊断时间长达3-6周。因此，需要一种简单快速且特异的诊断皮肤癣菌感染的方法。已经引入基于PCR的方法来诊断真菌感染。例如，US2010/0311041公开了用于从真菌中提取核酸的方法，用于检测患者样品中的真菌的PCR方法，和用于检测皮肤癣菌和用于诊断由毛癣菌属、小孢子菌属和表皮癣菌属这三个属引起的感染的PCR试剂盒。然而，现有技术中公开的方法具有缺点。特别是，它们不允许快速和可靠地区分来自毛癣菌属和小孢子菌属的紧密相关的菌株，其包括嗜热性和非嗜热性物种。因此，本专利技术的一个技术问题在于提供用于诊断皮肤、毛发和指甲疾病，优选皮肤、毛发和指甲感染，更优选皮肤、毛发和指甲真菌感染的方法和试剂。本专利技术的另一个技术问题是提供用于鉴定和区分来自毛癣菌属的紧密相关的病原体物种(特别是Trichophytonbenhamiae(黄色)和同心性毛癣菌(Trichophytonconcentricum))的方法和试剂。本专利技术的技术问题通过所附独立和从属权利要求的主题来解决。在第一方面，本专利技术的技术问题通过引物对来解决，所述引物对包含能够扩增来自与皮肤、毛发和指甲感染相关的病原体的核酸的正向引物和反向引物，所述核酸包含SEQIDNO22，优选SEQIDNO1。在第二方面，本专利技术的技术问题通过能够与来自与皮肤、毛发和指甲感染相关的病原体的核酸序列或其互补链或包含所述核酸序列的载体或细胞特异性杂交的核酸来解决，所述核酸序列包含SEQIDNO22，优选SEQIDNO1。在优选的实施方案中，引物对或核酸包含可检测标记，优选选自包含荧光、放射性、胶体金或酶促活性标记的组。在第三方面，本专利技术的技术问题通过如下的核酸来解决，所述核酸包含根据本专利技术的引物对并且在正向引物和反向引物之间包含来自与皮肤、毛发和指甲感染相关的病原体的核酸序列，所述核酸序列在病原体基因组中位于正向引物和反向引物的序列之间，所述核酸优选通过使用根据本专利技术的引物扩增包含所述病原体的样品而获得。在第四方面，本专利技术的技术问题通过包含根据本专利技术的核酸的承载体来解决。在优选的实施方案中，承载体是硅烷涂覆的玻璃、塑料或硅材料微阵列板。在第五方面，本专利技术的技术问题通过包括以下步骤的方法解决，所述方法包括在样品中检测来自与皮肤、毛发和指甲感染相关的病原体的包含SEQIDNO22、优选SEQIDNO1的核酸序列。更优选地，核酸包含选自包含SEQIDNO2、SEQIDNO3、SEQIDNO4、SEQIDNO5、SEQIDNO6、SEQIDNO7、SEQIDNO8和SEQIDNO9的组的序列。在优选的实施方案中，根据本专利技术的方法还包括以下步骤：a)提供来自患者的样品，优选指甲、毛发或皮肤/指甲材料，b)使用所述引物对扩增存在于所述样品中的包含SEQIDNO22，优选SEQIDNO1的任何核酸，从而如果来自与皮肤、毛发和指甲感染相关的病原体的包含SEQIDNO22(或SEQIDNO1)的核酸序列存在于样品中，则产生扩增子。更优选地，核酸包含选自包含SEQIDNO2、SEQIDNO3、SEQIDNO4、SEQIDNO5、SEQIDNO6、SEQIDNO7、SEQIDNO8和SEQIDNO9的组的序列及其变体。在优选的实施方案中，根据本专利技术的方法还包括以下步骤：c)检测扩增子。在优选的实施方案中，通过荧光、放射性、胶体金或化学发光来检测扩增子。在第六方面，本专利技术的技术问题通过根据本专利技术的引物对、核酸或承载体用于诊断疾病，优选与病原体相关的皮肤、毛发和指甲感染的用途来解决。在第七方面，本专利技术的技术问题通过包含根据本专利技术的引物对、核酸和/或承载体的试剂盒来解决，所述试剂盒优选用于诊断疾病，更优选用于诊断与病原体相关的皮肤、毛发和指甲感染。在第八方面，本专利技术的技术问题通过根据本专利技术的引物对、核酸或承载体用于制备试剂盒的用途来解决，所述试剂盒用于诊断疾病，优选与皮肤、毛发和指甲感染相关的病原体，更优选与皮肤、毛发和指甲感染相关的具有包含SEQIDNO22，优选SEQIDNO1的核酸的病原体。在第九方面，本专利技术的技术问题通过将所述引物对、核酸、承载体、用途或试剂盒用于鉴定真菌来解决，所述真菌优选来自毛癣菌属(Trichophyton)，更优选来自包含以下的组：断发毛癣菌(Trichophytontonsurans)，马毛癣菌(Trichophytonequinum)，指间毛癣菌(Trichophytoninterdigitale)，Trichophytonbenhamiae(非洲)，Trichophytonbenhamiae(黄色)，同心性毛癣菌(Trichophytonconcentricum)，意瑞奈斯毛癣菌(Trichophytonerinacei)(非洲)和意瑞奈斯毛癣菌(Trichophytonerinacei)。在优选的实施方案中，病原体来自包含毛癣菌属的组。在优选的实施方案中，病原体来自包含以下的组：断发毛本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种引物对，其包含能够扩增来自与皮肤、毛发和指甲感染相关的病原体的包含SEQ ID NO22的核酸的正向引物和反向引物。

【技术特征摘要】
2017.03.30 EP 17000524.31.一种引物对，其包含能够扩增来自与皮肤、毛发和指甲感染相关的病原体的包含SEQIDNO22的核酸的正向引物和反向引物。2.一种核酸，所述核酸能够与来自与皮肤、毛发和指甲感染相关的病原体的包含SEQIDNO22的核酸序列或其互补链或包含所述核酸序列的载体或细胞特异性杂交。3.一种核酸，其包含权利要求1的引物对，并且在正向引物和反向引物之间包含来自与皮肤、毛发和指甲感染相关的病原体的核酸序列，所述核酸序列在病原体基因组中位于正向引物和反向引物的序列之间，所述核酸优选通过使用权利要求1的引物扩增包含所述病原体的样品而获得。4.权利要求1的引物对或权利要求2或3中任一项的核酸，其包含可检测标记，优选选自包含荧光、放射性、胶体金或酶促活性标记的组。5.一种承载体，其包含权利要求2或4中任一项的核酸。6.权利要求5的承载体，其中所述承载体是硅烷涂覆的玻璃、塑料或硅材料微阵列板。7.一种方法，其包括在样品中检测来自与皮肤、毛发和指甲感染相关的病原体的包含SEQIDNO22的核酸序列的步骤。8.权利要求7的方法，其包括以下步骤a)提供来自患者的样品，优选指甲、毛发或皮肤材料，b)使用权利要求1或4中任一项的引物对扩增样品中存在的任何包含SEQIDNO22的核酸，从而如果来自与皮肤、毛发和指甲感染相关的病原体的包含SEQIDNO22的核酸序列存在于样品中则产生扩增子。9.权利要求8的方法，其还包括以下步骤c)检测扩增子。10.权利要求9的方法，其中通过荧光、放射性、胶体金或化学发光来检测扩增子。11.权利要求1或4中任一项的引物对、权利要求2的核酸或权利要求5至6中任一项的承载体用于诊断疾病，优选与病原体相关的皮肤、毛发和指甲感染的用途。12.一种试剂盒，其包含权利要求1...

【专利技术属性】
技术研发人员：M·哈德尔，Y·格拉瑟，C·库普施，M·卡瓦拉，
申请(专利权)人：欧蒙医学诊断技术有限公司，
类型：发明
国别省市：德国,DE