血管紧张素Ⅱ磁微粒化学发光法检测试剂盒及检测方法技术

本发明专利技术公开了血管紧张素II磁微粒化学发光法检测试剂盒，包括链霉亲和素磁微粒磁分离试剂、生物素化的血管紧张素II单克隆抗体、碱性磷酸酶标的血管紧张素II衍生物、校准品。该试剂盒具有高灵敏度、专一性、特异性的优点。本发明专利技术还公开了血管紧张素II磁微粒化学发光法检测试剂盒的检测方法，该方法简单、避免了放射性污染，延长了试剂有效期。

Angiotensin II magnetic particle chemiluminescence detection kit and detection method

The invention discloses an angiotensin II magnetic particle chemiluminescence detection kit, which comprises a streptavidin magnetic particle magnetic separation reagent, a biotinylated angiotensin II monoclonal antibody, an alkaline phosphatase-labeled angiotensin II derivative, and a calibrator. The kit has the advantages of high sensitivity, specificity and specificity. The invention also discloses a detection method of an angiotensin II magnetic particle chemiluminescence detection kit, which is simple, avoids radioactive contamination and prolongs the validity period of the reagent.

【技术实现步骤摘要】
血管紧张素II磁微粒化学发光法检测试剂盒及检测方法
本专利技术属于化学诊断试剂
，特别涉及一种磁微粒化学发光法血管紧张素II测定试剂盒及检测方法。
技术介绍
肾素通过剪切肝脏合成的血管紧张素原产生血管紧张素I。血管紧张素I能进一步被血管紧张素转化酶(AngiotensinConVertingEnzyme，ACE)剪切成血管紧张素II(AngiotensinII)。血管紧张素II是血管紧张素中最重要的组成部分。人体的血管平滑机、肾上腺皮质球状带细胞以及脑的一些部位、心脏和肾脏器官的细胞上存在有血管紧张素受体。血管紧张素II与血管紧张素受体结合，引起相应的生理效应。血管紧张素作用于血管平滑肌，可使全身微动脉收缩，动脉血压升高。血管紧张素II是已知最强的缩血管活性物质之一。作用于外周血管，使静脉收缩，回心血量增加，作用于中枢，引起渴觉。血管紧张素II的测定可应用于高血压的治疗和检测中。血管紧张素II是肾素-血管紧张素-醛固酮系统调节血压的一个直接作用物质。同时血管紧张素II也能够作为促生长因子直接促进血管内皮细胞的增生。最近的研究发现，血管紧张素II直接和血管内皮细胞增生，血管狭窄和动脉血管阻力增加有直接关系。因此，血管紧张素II的检测被越来越重视，临床上用于高血压的辅助诊断和治疗效果的检测。目前检测血管紧张素II的检测方法是放射免疫分析技术和化学发光法，其中放射免疫分析技术具有放射性污染、操作步骤多的缺陷，而化学发光法具有灵敏度高、特异性好、操作简单、环境友好的优点，但是化学发光法包括链霉亲和素磁微粒化学发光免疫分析技术和异硫氰酸荧光素磁微粒化学发光免疫分析技术，两者虽均具有灵敏度高、特异性好、操作简单、环境友好的优势，但是异硫氰酸荧光素磁微粒化化学发光免疫分析技术在检测血管紧张素II时其灵敏度和特异性仍需进一步提高。
技术实现思路
鉴于上述现有技术存在的缺陷，本专利技术的目的是提出灵敏度高、特异性好的一种磁微粒化学发光法血管紧张素II测定试剂盒及检测方法。本专利技术的目的将通过以下技术方案得以实现：血管紧张素II磁微粒化学发光法检测试剂盒，包括磁分离试剂、生物素化的血管紧张素II单克隆抗体、碱性磷酸酶标的血管紧张素II衍生物、校准品；所述磁分离试剂为链霉亲和素磁微粒。优选地，所述生物素化的血管紧张素II单克隆抗体的浓度为0.5-2.0ug/ml，所述碱性磷酸酶标的血管紧张素II衍生物的浓度为0.1-1.0ug/ml。优选地所述生物素化的血管紧张素II单克隆抗体由如下步骤制备而成：1)在血管紧张素II单克隆抗体中加入生物素-NHS，充分混匀后室温反应1.5-2.5h，得反应产物；2)使用透析缓冲液通过透析袋透析步骤1)中所述的反应产物，得透析物；3)用抗试剂缓冲液将步骤2)所述的透析物稀释至0.5ug/ml，即得。优选地，步骤1)中所述生物素化的血管紧张素II单克隆抗体的分子量为30000，所述生物素-NHS的分子量为587；所述生物素化的血管紧张素II单克隆抗体与所述生物素-NHS的摩尔比为1∶18-22；所述生物素-NHS为由DMSO溶解至浓度为5mg/ml的生物素-NHS。优选地，步骤2)中所述透析缓冲液为pH＝7.5的0.15MPBS缓冲液，所述透析袋的截留分子量为500-1000；步骤3)中所述的抗试剂缓冲液由三(羟甲基)氨基甲烷、氯化钠、叠氮钠、牛血清白蛋白、牛血清、马血清组成。优选地，所述碱性磷酸酶标的血管紧张素II衍生物的制备方法如下：1)将血管紧张素II衍生物用0.1MPBS进行透析，然后用2IT进行活化；2)将碱磷酶用SMCC进行活化；3)将活化后的血管紧张素II衍生物和碱性磷酸酶进行混合，2-8°反应18小时，得反应物；4)将反应物用层析柱进行纯化，通过图谱收集I峰和II峰；5)用抗试剂缓冲液将步骤4)制备的血管紧张素II衍生物-碱性磷酸酶稀释，即得。优选地，所述校准品由如下步骤制备而成：将血管紧张素II纯品用血管紧张素II校准品缓冲液进行稀释浓度分别为0pg/ml、25pg/ml、100pg/ml、250pg/ml、500pg/ml和1000pg/ml的血管紧张素II溶液，即得。优选地，所述血管紧张素II校准品缓冲液由pH＝7.4的0.05MTris缓冲液、0.5％牛血清白蛋白、0.2％防腐剂组成。一种试剂盒的检测方法，包括如下步骤：先将校准品或样本、生物素化的血管紧张素II单克隆抗体、碱性磷酸酶标的血管紧张素II衍生物混合，孵育15-30min；再加入链霉亲和素磁珠，孵育5-10min；磁分离1-2min，去上清；洗液洗涤3次；加底物，测值。优选地，所述校准品或样本的加样量为30μl、生物素化的血管紧张素II单克隆抗体加样量为30μl、碱性磷酸酶标的血管紧张素II衍生物的加样量为30μl；所述链霉亲和素磁珠的加样量为30μl；所述洗液的加样量为300μl；所述底物的加样量为200μl。与现有技术相比，本专利技术提供的一种磁微粒化学发光法血管紧张素II测定试剂盒及制备方法，达到的技术效果是：1)本专利技术试剂盒的制备方法简单方便，试剂盒的检测灵敏度较高，具有良好的应用前景；2)本专利技术试剂盒用于检测时，整个反应体系避免了放射性污染，延长了试剂有效期，简化了实验操作流程。3)由于亲和素与生物素间的结合具有极高的亲和力其反应呈高度专一性，因此，在提高灵敏度的同时，并不增加非特异性干扰，而且结合特性不会因反应试剂的高度稀释而受影响，使其在实际应用中可最大限度地降低反应试剂的非特异作用。附图说明图1为本专利技术试验例1中实施例2生物素化的血管紧张素II单克隆抗体-链霉亲和素磁珠检测法的曲线拟合图；图2为本专利技术试验例1中对比例1血管紧张素II单克隆抗体包被的羧基化的磁微粒检测法的曲线拟合图。以下便结合实施例，对本专利技术的具体实施方式作进一步的详述，以使技术方案更易于理解、掌握。具体实施方式下面通过具体实施例对本专利技术进行说明，但本专利技术并不局限于此。下述实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得，下面实施例并非用以限制本专利技术的专利范围，凡未脱离本专利技术所为的等效实施或变更，均应包含于本专利保护范围中。实施例1血管紧张素II磁微粒化学发光法检测试剂盒本实施例的试剂盒包括链霉亲和素磁微粒的磁分离试剂、生物素化的血管紧张素II单克隆抗体、碱性磷酸酶标的血管紧张素II衍生物、校准品。本实施例中使用的血管紧张素II抗体为单克隆抗体，抗体为鼠抗，校准品和样品中包含待检抗原。1、生物素化的血管紧张素II单克隆抗体制备步骤如下：1)量取1mg血管紧张素II单克隆抗体；2以血管紧张素II单克隆抗体分子量(30000)和生物素-NHS分子量(587)进行计算，按照摩尔比1∶20的投料量称量生物素-NHS；3)称取0.4mg左右的生物素-NHS，并用DMSO进行溶解至终浓度为5mg/ml；4)在1mg血管紧张素II单克隆抗体中加入DMSO溶解的生物素-NHS，充分混匀后室温反应2h；5)用截留分子量为500的透析袋透析步骤4)中的反应产物，透析缓冲液为pH＝7.5的0.15MPBS缓冲液；6)用抗试剂缓冲液将混合物稀释至0.5ug/ml作为工作液使用。其中，抗试剂缓冲液由三(本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.血管紧张素II磁微粒化学发光法检测试剂盒，其特征在于，包括磁分离试剂、生物素化的血管紧张素II单克隆抗体、碱性磷酸酶标的血管紧张素II衍生物、校准品；所述磁分离试剂为链霉亲和素磁微粒。

【技术特征摘要】
1.血管紧张素II磁微粒化学发光法检测试剂盒，其特征在于，包括磁分离试剂、生物素化的血管紧张素II单克隆抗体、碱性磷酸酶标的血管紧张素II衍生物、校准品；所述磁分离试剂为链霉亲和素磁微粒。2.根据权利要求1所述的血管紧张素II磁微粒化学发光法检测试剂盒，其特征在于，所述生物素化的血管紧张素II单克隆抗体的浓度为0.5-2.0ug/ml，所述碱性磷酸酶标的血管紧张素II衍生物的浓度为0.1-1.0ug/ml。3.根据权利要求2所述的血管紧张素II磁微粒化学发光法检测试剂盒，其特征在于，所述生物素化的血管紧张素II单克隆抗体由如下步骤制备而成：1)在血管紧张素II单克隆抗体中加入生物素-NHS，充分混匀后室温反应1.5-2.5h，得反应产物；2)使用透析缓冲液通过透析袋透析步骤1)中所述的反应产物，得透析物；3)用抗试剂缓冲液将步骤2)所述的透析物稀释至0.5ug/ml，即得。4.根据权利要求3所述的血管紧张素II磁微粒化学发光法检测试剂盒，其特征在于，步骤1)中所述生物素化的血管紧张素II单克隆抗体的分子量为30000，所述生物素-NHS的分子量为587；所述生物素化的血管紧张素II单克隆抗体与所述生物素-NHS的摩尔比为1∶18-22；所述生物素-NHS为由DMSO溶解至浓度为5mg/ml的生物素-NHS。5.根据权利要求3所述的血管紧张素II磁微粒化学发光法检测试剂盒，其特征在于，步骤2)中所述透析缓冲液为pH＝7.5的0.15MPBS缓冲液，所述透析袋的截留分子量为500-1000；步骤3)中所述的抗试剂缓冲液由三(羟甲基)氨基甲烷、氯化钠、叠氮钠、牛血清白蛋白、牛血清、马血清组成。6.根据权利要求2所述的血管紧张素II磁微粒化学发光法检测试剂盒，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：李婷婷，刘振世，
申请(专利权)人：泰州泽成生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32