可同时检测对硫磷和三唑磷的胶体金试纸条制造技术

本实用新型专利技术涉及一种可同时检测对硫磷和三唑磷的胶体金试纸条。该胶体金试纸条包括：PVC底板、样品结合垫、金标结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫；吸水垫、硝酸纤维素膜、金标结合垫和样品垫由上而下依次交叠粘贴于PVC底板上；其中，硝酸纤维素膜上自下而上设置横向检测线a、检测线b和质控线；所述检测线分别包被有三唑磷抗原和对硫磷抗原，所述质控线包被有羊抗鼠IgG抗体；所述金标垫喷涂有纳米金标记的三唑磷单克隆抗体和对硫磷单克隆抗体。该实用新型专利技术试纸条具有特异性强、灵敏度高、操作简单快速的特点，能同时检测农产品中的三唑磷和对硫磷残留，适用于现场监测和大规模、快速筛查检测。

Colloidal gold strip for simultaneous determination of parathion and three azophos

The utility model relates to a colloidal gold test strip which can simultaneously detect parathion and three azophos. The colloidal gold test strip comprises a PVC substrate, a sample bonding pad, a gold standard bonding pad, a nitrocellulose membrane and a water absorbing pad; a water absorbing pad, a nitrocellulose membrane, a gold standard bonding pad and a sample pad are successively overlapped and pasted on the PVC substrate from top to bottom; and a transverse detection line a, a detection line B and a detection line B are arranged on the nitrocellulose membrane from bottom to top. The quality control line is coated with Triazophos antigen and parathion antigen respectively, the quality control line is coated with sheep anti-mouse IgG antibody, and the gold pad is sprayed with Triazophos monoclonal antibody and parathion monoclonal antibody labeled with nano-gold. The utility model test strip has the characteristics of strong specificity, high sensitivity, simple and fast operation, and can simultaneously detect Triazophos and parathion residues in agricultural products. It is suitable for field monitoring and large-scale and rapid screening detection.

【技术实现步骤摘要】
可同时检测对硫磷和三唑磷的胶体金试纸条
本专利技术涉及农药残留免疫分析
，特别是一种以纳米胶体金颗粒标记抗体的可实现同时检测对硫磷、三唑磷的快速检测试纸条。
技术介绍
三唑磷、对硫磷均为高效、广谱的有机磷类杀虫、杀螨剂，具有触杀、胃毒、熏蒸等作用，对粮、棉、果、蔬菜等主要农作物上的许多重要害虫都有良好的防治效果。然而，随着有机磷农药的大面积推广及应用，其生态安全风险以及对人类和其他非靶标生物的安全隐患也备受关注，特别是与食品安全相关的急性毒性和残留毒性问题。近年来一些剧毒、高毒的农药品种，如甲胺磷、甲基对硫磷、对硫磷等农药，相继被禁止在蔬菜和水果上使用。因此研发有机磷农药残留的快速检测方法与技术具有重要的现实意义。检测有机磷农药残留的方法主要有气相色谱法(GC)、高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱质谱联用法（GC/MS）、液相色谱质谱联用技术（LC/MS）和酶联免疫吸附法(ELISA)等。这些方法较为准确、灵敏，但需要复杂的操作过程与技术培训，只有在专业实验室，专门从事仪器分析的人员才能进行检测，不能满足现场的快速、高通量检测，特别是在对大量样品进行低成本快速筛选时，优势不足。胶体金免疫层析技术是20世纪80-90年代发展起来的一种将免疫技术和色谱层析技术相结合的快速免疫分析方法。其原理是以条状纤维层析材料为固相，借助毛细作用使样品溶液在层析条上泳动，同时使样品中的待测物与层析材料上针对待测物的受体(如抗体或抗原)发生高特异、高亲和性的免疫反应，层析过程中免疫复合物被富集或截留在层析材料的一定区域（检测带），通过直接目测的胶体金标记物而得到直观的实验结果。现有免疫检测试纸条多为单条检测线，单个检测对象，检测对象单一，当参照国家标准需要对多个农药残留对进行监测时，需要分别研发相应的检测试纸条分别进行检测，无法满足对农产品中有机磷农药多残留检测的需求，因此迫切需要一种能快速、同步检测多种农药的快速检测技术产品。
技术实现思路
本技术的目的在于研发一种能够同时检测对硫磷和三唑磷的胶体金试纸条与方法，适用于蔬菜、水果等农产品中对硫磷和三唑磷农药残留的现场、同时快速检测与筛查。为实现上述目的,本技术采用以下技术方案：一种可同时检测对硫磷和三唑磷的胶体金试纸条，包括底板，样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜（NC膜）和吸水垫；其中，硝酸纤维素膜位于底板的中段，金标垫覆盖在硝酸纤维素膜的端部及对应的底板上，样品垫由底板的一端向中段延伸，其端部覆盖在金标垫的端部，吸水垫由底板的另一端向中段延伸，其端部覆盖在硝酸纤维素膜的另一端部；金标垫端部与吸水垫端部之间的硝酸纤维素膜上依次设有与底板端面平行的质控线、检测线a（T1）、检测线b（T2）；所述金标垫是在玻璃纤维膜材料上设有含有胶体金（胶体金颗粒直径为17-20nm）标记的对硫磷单克隆抗体和胶体金（胶体金颗粒直径为17-20nm）标记的三唑磷单克隆抗体的涂层；临近金标垫的检测线a上设有三唑磷抗原线状涂层，检测线b上设有对硫磷抗原线状涂层，临近吸水垫的质控线上设有羊抗鼠IgG抗体线状涂层；所述底板为聚氯乙烯材料，样品垫和金标结合垫为玻璃纤维膜，吸水垫为滤纸材质。进一步，本申请所提供的可同时检测对硫磷、三唑磷的胶体金试纸条，所述的对硫磷抗原是对硫磷半抗原与鸡卵清白蛋白的偶联物，所述的三唑磷抗原是三唑磷半抗原与鸡卵清白蛋白的偶联物。进一步，本申请所提供的可同时检测对硫磷、三唑磷胶体金试纸条中，金标垫长8mm，宽3.5mm；硝酸纤维素膜长25mm，宽3.5mm；吸水垫长17mm，宽3.5mm；金标垫、硝酸纤维素膜、吸水垫各交叠区域的长度均为1mm。本申请中，检测线a与检测线b之间的距离为3.5mm，检测线b与质控线之间的距离为4mm；检测线a和检测线b相距较近，而与质控线相距较远，避免了可能对质控线造成的污染与干扰。检测线a和检测线b之间的距离又避免了所检测的两种有机磷农药之间的相互干扰。本申请提供的一种可同时检测对硫磷和三唑磷的胶体金试纸条的检测原理为竞争抑制法（如附图2、3所示）：将样品提取液滴加到样品垫，样品在毛细管作用下沿着试纸条方向（自样品垫端向吸水垫端）泳动，泳动到金标垫时，固态化的金标单抗迅速溶解释放，随样品一起沿着试纸条泳动至检测线，当样品中含有对硫磷或三唑磷农药时，则其会与相应的胶体金标记的单克隆抗体发生反应，形成免疫复合物，抑制了胶体金标记的单克隆抗体与相应检测线（T1或T2）包被的抗原的结合，使相应的检测线截获的金标抗体的量减少，T线颜色变浅或消失；当待测样品中的对硫磷或三唑磷农药的量超过该试纸条的最低检测限时（对硫磷的最低检测限是0.1µg/mL;三唑磷的最低检测限是0.05µg/mL），则相应的检测线将不显色或完全消失，金标单抗与包被于质控线上的羊抗鼠IgG截获，形成肉眼可见的红色条带，结果为阳性；反之，若待测样品中不含有对硫磷或三唑磷农药，或含有小于该试纸最低检测限的农药时，胶体金标记的单克隆抗体与包被于NC膜上的对应的抗原发生特异性免疫反应而被截获，在检测线位置（T1或T2）形成肉眼可见的红色条带，即阴性结果，过量的金标单抗与包被于质控线上的羊抗鼠IgG截获，形成红色条带。当质控线没有颜色时，无论检测线是否有颜色，均视为无效结果。本申请提供的一种可同时检测对硫磷和三唑磷的胶体金试纸条,无需专业操作人员及任何辅助类仪器,根据反应所显现的条带几分钟内即可判定结果,操作简便、快速、结果直观准确、成本低,可实现现场检测。与现有技术相比，具有以下优点：（1）多残留检测。本技术免疫层析试纸条具有两条检测线，能够在同一条试纸条上同时检测农产品中对硫磷和三唑磷的残留，与传统的单一检测试纸条及多联试纸条结构不同。（2）操作简便快捷。本技术免疫层析试纸条前处理简单，结果容易判定，检测时长10-15min，可满足现场快速检测的要求；（3）成本低，易操作。本技术免疫层析试纸条成本低廉，生产工艺简单，流程成熟，并且检测过程不需要任何实验设备，无需专业培训即可进行检测。（4）适用范围广。本技术免疫层析试纸条适用于各种农产品和水果中对硫磷和三唑磷农药残留的快速检测。附图说明图1为对硫磷、三唑磷免疫层析试纸条的侧面结构示意图；其中1为样品垫，2为金标垫，3为检测线a，4为检测线b，5为质控线，6为吸水垫，7为硝酸纤维素膜，8为PVC底板。图2为对硫磷、三唑磷免疫层析试纸条检测原理图。图3为对硫磷、三唑磷免疫层析试纸条检测结果判定示意图。图4为对硫磷、三唑磷免疫层析试纸条对加标样品的检测结果示意图。图5为对硫磷、三唑磷免疫层析试纸条的特异性检测结果示意图。具体实施方式本实施例给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本专利技术的保护范围不限于下述的实施例。实施例1制备对硫磷、三唑磷免疫层析试纸条如图1所示，一种可同时检测对硫磷和三唑磷的胶体金试纸条，包括底板8，样品垫1、金标垫2、硝酸纤维素膜（NC膜）7和吸水垫6；其中，硝酸纤维素膜7位于底板8的中段，金标垫2覆盖在硝酸纤维素膜7的端部及对应的底板8上，样品垫1由底板8的一端向中段延伸，其端部覆盖在金标垫2的端部，吸水垫6由底板8的另一端向中段延伸，其端部覆盖在硝酸纤维素膜7的另一端部；金标垫2端部与吸水垫本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种可同时检测对硫磷和三唑磷的胶体金试纸条，包括底板，样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，其特征在于，硝酸纤维素膜位于底板的中段，金标垫覆盖在硝酸纤维素膜的端部及对应的底板上，样品垫由底板的一端向中段延伸，其端部覆盖在金标垫的端部，吸水垫由底板的另一端向中段延伸，其端部覆盖在硝酸纤维素膜的另一端部；金标垫端部与吸水垫端部之间外露的硝酸纤维素膜上依次设有与底板端面平行的质控线、检测线b和检测线a；所述金标垫是在玻璃纤维膜材料上设有含有胶体金标记的对硫磷单克隆抗体和胶体金标记的三唑磷单克隆抗体的涂层；临近金标垫的检测线a上设有三唑磷抗原涂层，检测线b上设有对硫磷抗原涂层，临近吸水垫的质控线上设有羊抗鼠IgG抗体涂层。

【技术特征摘要】
1.一种可同时检测对硫磷和三唑磷的胶体金试纸条，包括底板，样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，其特征在于，硝酸纤维素膜位于底板的中段，金标垫覆盖在硝酸纤维素膜的端部及对应的底板上，样品垫由底板的一端向中段延伸，其端部覆盖在金标垫的端部，吸水垫由底板的另一端向中段延伸，其端部覆盖在硝酸纤维素膜的另一端部；金标垫端部与吸水垫端部之间外露的硝酸纤维素膜上依次设有与底板端面平行的质控线、检测线b和检测线a；所述金标垫是在玻璃纤维膜材料上设有含有胶体金标记的对硫磷单克隆抗体和胶体金标记的三唑磷单克隆抗体的涂层；临近金标垫的检测线a上设有三唑磷抗原涂层，检测线...

【专利技术属性】
技术研发人员：张存政，刘贝贝，龚航，刘媛，谢雅晶，
申请(专利权)人：南京皞德博源生物科技有限公司，
类型：新型
国别省市：江苏,32