一种H-FABP和cTnI二联高效检测试纸制造技术

本发明专利技术公开了一种H‑FABP和cTnI二联高效检测试纸，其特征在于：包括设在固定板上依次相连的样品垫(1)、金标垫(2)、硝酸纤维素膜(3)和吸收垫(4)；在硝酸纤维素膜(3)上设有检测线抗体(5)和质控线抗体(6)；在金标垫(2)上设有金标抗体，所述的样品垫(1)为玻璃纤维棉制成的垫，所述的金标垫(2)为羧化纤维素膜制成的垫，所述的金标抗体为显色抗体，检测线抗体为捕捉抗体，显色抗体与捕捉抗体为2株可互相配对形成夹心的抗人H‑FABP单克隆抗体，所述的金标抗体用40nm纳米金壳标记，所述金标垫上设有功能层。本发明专利技术通过特定功能层的金标垫和浸泡工艺，能够使得检测时样品之间避免相互干扰，能够大大提高检测精度。

【技术实现步骤摘要】
一种H-FABP和cTnI二联高效检测试纸
本专利技术属于生物技术应用领域，具体涉及一种心型脂肪酸结合蛋白H-FABP(Heart-typeFattyAcidBindingProtein，H-FABP)和心肌钙蛋白I(cardiactroponinI,cTnI)cTnI二联高效检测试纸。
技术介绍
H-FABP存在于心肌细胞胞浆内，含量丰富。心肌受损早期，心肌细胞膜完整性被破坏，H-FABP进入血液。H-FABP在心肌受损后1-2h即可在血液中检测到。由于H-FABP心肌特异性高于目前临床常用的肌红蛋白，因此H-FABP可成为一种重要的检测急性心肌组织损伤的早期特异性标志物。目前，生化标志物的检测已广泛应用于急性心肌梗死、不稳定型心绞痛、急性心衰、心肌炎、心脏手术损伤评估、窒息新生儿心肌损伤等心肌损伤疾病的诊断、危险度分层和预后评判。美国每年因怀疑性冠状动脉综合征急诊就医病人达8000万，其中45％左右与心脏相关，15％诊断为急性冠脉综合征。我国急性冠状动脉综合征的发病率约50/10万，每年死于急性心肌梗死的人数超过100万。因此，H-FABP检测的应用具有重要的社会和经济效益。当心肌细胞因缺血缺氧等因素遭破坏时，游离型cTnI和cTnT可首先迅速从细胞中释放入血，随后结合于心肌结构蛋白中的结合型cTnI和cTnT逐渐分解，缓慢释放入循环血中，从而解释了以心肌细胞受损为表现的疾病，如急性心肌梗死(AMI)，cTnI和cTnT在循环血中较早出现并能持续较长时间的原因。所以H-FABP和cTnI对于心肌健康来讲是非常重要的健康指标参数。现有技术不能同时高效检测两种物质，检测时物质相互干扰，反而使金标垫的检测灵敏度降低。
技术实现思路
专利技术目的：针对现有技术中存在的不足，本专利技术的目的是提供一种H-FABP和cTnI二联高效检测试纸，使其具有操作简便、灵敏度＜5ng/mL、结果稳定等优点。
技术实现思路
：本专利技术提供了一种H-FABP和cTnI二联高效检测试纸，包括设在固定板上依次相连的样品垫(1)、金标垫(2)、硝酸纤维素膜(3)和吸收垫(4)；在硝酸纤维素膜(3)上设有检测线抗体(5)和质控线抗体(6)；在金标垫(2)上设有金标抗体，所述的样品垫(1)为玻璃纤维棉制成的垫，所述的金标垫(2)为羧化纤维素膜制成的垫，所述的金标抗体为显色抗体，检测线抗体为捕捉抗体，显色抗体与捕捉抗体为3株可互相配对形成夹心的抗人H-FABP和cTnI单克隆抗体所述的金标抗体用40nm纳米金壳标记，所述金标垫上设有功能层，所述金标垫通过碳酸氢钠、牛血清白蛋白、酷蛋白以及聚氧烯月桂醚混合液浸泡。进一步地，所述功能层以质量分数计由18％纯硝酸银、70％明胶、8％的司本80以及4％的环糊精组成。进一步地，所述金标垫由80％碳酸氢钠溶液、8％牛血清白蛋白、8％酷蛋白以及4％聚氧烯月桂醚混合液浸泡。上述的H-FABP和cTnI二联高效检测试纸的制备方法，包括以下步骤：(1)采用以柠檬酸三钠为稳定剂和还原剂，制备出单分散的银纳米颗粒作为牺牲模板，通过置换反应获得胶体级、高分散的40nm金纳米壳；(2)调节纳米金壳溶液pH8.0～8.5，加入显色抗体与纳米金壳溶液反应，离心得沉淀，重悬沉淀，得金标抗体溶液；(3)将羧化纤维素膜预处理后，烘干，通过真空环境中通过红外喷涂设备分别将配制好的18％纯硝酸银、70％高分子保护剂、8％的司本80以及4％的环糊精喷涂至羧化纤维素膜好形成金标垫，然后用金标抗体溶液喷印；(4)金标垫的浸泡：金标垫由80％碳酸氢钠溶液、8％牛血清白蛋白、8％酷蛋白以及4％聚氧烯月桂醚混合液浸泡，然后烘干。(5)用捕捉抗体在已活化硝酸纤维素膜上喷划检测线，真空干燥；然后用羊抗鼠IgG在已活化硝酸纤维膜上喷划质控线，真空干燥；(6)按样品垫、金标垫、硝酸纤维膜、吸收垫顺序粘贴在单面压敏胶的塑料板上，切割，装入塑料卡，包装。有益效果：本专利技术的H-FABP和cTnI二联高效检测试纸，通过特制的含有特定功能层的金标垫和浸泡工艺，使得金标释放速度放缓，得到缓冲，从而使样本中被分析物与金标抗体的浓度比值增大，从而提高了试纸条检测的灵敏度。此外，通过特定功能层的金标垫和浸泡工艺，能够使得检测时样品之间避免相互干扰，能够大大提高检测精度。附图说明图1是试纸条的结构示意图。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术做进一步的说明。如图1所示，一种H-FABP和cTnI二联高效检测试纸，包括设在固定板上依次相连的样品垫(1)、金标垫(2)、硝酸纤维素膜(3)和吸收垫(4)；在硝酸纤维素膜(3)上设有检测线抗体(5)和质控线抗体(6)；在金标垫(2)上设有金标抗体，所述的样品垫(1)为玻璃纤维棉制成的垫，所述的金标垫(2)为羧化纤维素膜制成的垫，所述的金标抗体为显色抗体，检测线抗体为捕捉抗体，显色抗体与捕捉抗体为3株可互相配对形成夹心的抗人H-FABP和cTnI单克隆抗体所述的金标抗体用40nm纳米金壳标记，所述金标垫上设有功能层，所述金标垫通过碳酸氢钠、牛血清白蛋白、酷蛋白以及聚氧烯月桂醚混合液浸泡。所述功能层以质量分数计由18％纯硝酸银、70％明胶、8％的司本80以及4％的环糊精组成，所述金标垫由80％碳酸氢钠溶液、8％牛血清白蛋白、8％酷蛋白以及4％聚氧烯月桂醚混合液浸泡。上述测试纸的制备方法如下：(1)纳米金壳溶液的制备：以柠檬酸三钠为稳定剂和还原剂，制备单分散的银纳米颗粒作为“种子”：在70℃的水浴下将80mL去离子水加热至恒温，加入20mL1％(wt)的柠檬酸三钠溶液，搅拌均匀，加入1.7mL10mg/mL的AgNO3溶液，剧烈搅拌下加入2mL1％NaHB4溶液，然后持续加热和搅拌1h，室温冷却后定容至100mL。银纳米颗粒的“种子”生长：向80mL去离子水中加入2mL1％柠檬酸钠溶液并加热到沸腾状态，然后加入一定体积的银种子溶液，在剧烈搅拌过程中，加入1.7mL10mg/mL的AgNO3溶液，继续保持搅拌和加热30min，室温冷却后定容到100mL。以银纳米颗粒为牺牲模板，通过置换反应制备胶体级、高单分散的金纳米壳：取30mL银纳米颗粒溶液，在12500g下离心20min，倒出上清液，再以去离子水定容到100mL。将此100mL的银纳米颗粒溶液加热到沸腾状态，在剧烈搅拌下加入2mMHAuCl4溶液2mL，反应液颜色逐渐由黄色转变为墨绿色，室温冷却。(2)显色抗体的金标记：调节纳米金壳溶液pH8.0～8.5，加入显色抗体与纳米金壳溶液反应，离心得沉淀，重悬沉淀，得金标抗体溶液。(3)金标垫制备及喷垫：将羧化纤维素膜预处理后，烘干，通过真空环境中通过红外喷涂设备分别将配制好的18％纯硝酸银、70％高分子保护剂、8％的司本80以及4％的环糊精喷涂至羧化纤维素膜好形成金标垫，然后用金标抗体溶液喷印。(4)金标垫的浸泡：金标垫由80％碳酸氢钠溶液、8％牛血清白蛋白、8％酷蛋白以及4％聚氧烯月桂醚混合液浸泡，然后烘干。(5)检测线制备：取1株抗人H-FABP单克隆抗体BT01做检测线抗体，以缓冲液(10％海藻糖，6％甲醇)稀释为1mg/mL；用划膜仪将抗体划在硝酸纤维素膜上，浓度为1ul/cm形成检测线，真空干燥。(6)质控线制备：羊抗鼠IgG用缓冲液本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种H‑FABP和cTnI二联高效检测试纸，其特征在于：包括设在固定板上依次相连的样品垫(1)、金标垫(2)、硝酸纤维素膜(3)和吸收垫(4)；在硝酸纤维素膜(3)上设有检测线抗体(5)和质控线抗体(6)；在金标垫(2)上设有金标抗体，所述的样品垫(1)为玻璃纤维棉制成的垫，所述的金标垫(2)为羧化纤维素膜制成的垫，所述的金标抗体为显色抗体，检测线抗体为捕捉抗体，显色抗体与捕捉抗体为3株可互相配对形成夹心的抗人H‑FABP和cTnI单克隆抗体所述的金标抗体用40nm纳米金壳标记，所述金标垫上设有功能层，所述金标垫通过碳酸氢钠、牛血清白蛋白、酷蛋白以及聚氧烯月桂醚混合液浸泡。

【技术特征摘要】
1.一种H-FABP和cTnI二联高效检测试纸，其特征在于：包括设在固定板上依次相连的样品垫(1)、金标垫(2)、硝酸纤维素膜(3)和吸收垫(4)；在硝酸纤维素膜(3)上设有检测线抗体(5)和质控线抗体(6)；在金标垫(2)上设有金标抗体，所述的样品垫(1)为玻璃纤维棉制成的垫，所述的金标垫(2)为羧化纤维素膜制成的垫，所述的金标抗体为显色抗体，检测线抗体为捕捉抗体，显色抗体与捕捉抗体为3株可互相配对形成夹心的抗人H-FABP和cTnI单克隆抗体所述的金标抗...

【专利技术属性】
技术研发人员：张雷，
申请(专利权)人：南京博天科智生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32