一种包载固相内核的重组脂蛋白及其制备和应用制造技术

本发明专利技术公开了含有固相内核的脂蛋白纳米递药体系及其制备方法和其在制备药物中的应用。本发明专利技术首次采用重组脂蛋白包裹载药的固相内核，解决了药物包载方法受限于药物理化性质的局限性，提高了亲水性药物的负载量和稳定性。该纳米递药系统具有溶酶体逃逸、Ras高表达或激活的肿瘤细胞靶向性以及血脑屏障穿透性等性能。同时，该纳米递药系统制备方法简单，适于大规模生产。

【技术实现步骤摘要】
一种包载固相内核的重组脂蛋白及其制备和应用
本专利技术涉及生物
以及化学制药领域，涉及药物传递系统，具体涉及一种含有固相内核的重组脂蛋白及其制备方法和其在制备药物中的应用。
技术介绍
近年来，关于基因治疗的研究日益受到重视，例如RNAi的研究是近年来发展的一种新型肿瘤治疗策略，由于使用RNAi技术可以特异性剔除或关闭特定基因的表达，所以该技术已被广泛应用于探索基因功能及恶性肿瘤的基因治疗领域。然而，如何高效靶向运输完整的、功能化的基因药物仍是肿瘤等疾病基因治疗应用的主要限速步骤，即如何通过全身系统性给药高效地将基因药物靶向运输到肿瘤组织细胞中去，并有效地释放到细胞特定部位以发挥其功能。包括(DNA)、寡核苷酸(RNA)、microRNA、小干扰核苷酸(siRNA)以及小发夹RNA(shRNA)在内的基因药物在体内循环时，容易被血液、组织或胞浆中的酶降解，生物半衰期较短。同时由于基因药物多为亲水的大分子物质，生理条件下带有较强的负电，故难以穿透细胞膜进入细胞。因而，选择适当的载体，将目的基因导入靶细胞进行有效的表达，是基因治疗成功的关键所在。脂蛋白作为天然纳米载体，生物相容性好且稳定性优良，在递送成像试剂和治疗药物中发挥重要作用。基于仿生学原理构建的脂蛋白纳米粒大部分可规避单核吞噬系统从而在体循环中长时间保持稳定。脂蛋白作为一种广泛应用的纳米载体，已被成功应用于负载亲水性、疏水性药物、蛋白质和核酸。传统脂蛋白对药物的负载方法主要取决于药物分子的物理化学性质。对于疏水性药物，药物主要负载在脂蛋白的疏水内核中，对于亲水性药物，药物主要吸附在脂蛋白的亲水外壳中，由于物理吸附作用极易从载体表面脱落，造成药物泄露。尽管脂蛋白已经成功用于负载各种药物，但是负载量低，负载方法很大程度上受限于药物分子的理化性质。鉴于传统脂蛋白载药存在的问题，如能采用疏水性的固相内核载带药物，将有望改善传统脂蛋白载药受限于药物的理化性质、药物负载量低及易泄露的问题，同时增加药物的稳定性，从而提高药物对疾病的预防、治疗和诊断效果，降低全身性的毒副作用。
技术实现思路
本专利技术的第一个目的在于提供一种含有固相内核的脂蛋白纳米递药系统。本专利技术的第二个目的在于提供一种含有固相内核的脂蛋白纳米递药系统的制备方法。本专利技术的第三个目的在于提供一种含有固相内核的脂蛋白纳米递药系统在制备药物中的应用。为实现以上第一个目的，本专利技术公开以下技术方案：一种含固相核心的重组脂蛋白纳米递药系统，其特征在于，所述纳米递药系统由脂质、载脂蛋白和固相内核组成；所述固相内核由药物分子、不溶性或难溶性无机盐构成，药物分子负载在固相内核中。作为一个优选方案，所述不溶性或难溶性无机盐为可生物降解的磷酸钙沉淀、碳酸钙沉淀、硫酸钙沉淀、氟化钙沉淀、硅酸钙沉淀、海藻酸钙沉淀、硫酸镁沉淀、磷酸镁沉淀、碳酸镁沉淀、氟化镁沉淀、硅酸镁沉淀、硫酸钡沉淀、磷酸钡沉淀、碳酸钡沉淀、氟化钡沉淀、硅酸钡沉淀的一种或多种，尤其优选磷酸钙或碳酸钙沉淀。作为一个优选方案，所述脂质是蛋磷脂、豆磷脂、磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇、磷脂酸、心磷脂、溶血磷脂、鞘氨醇、神经酰胺、鞘磷脂、脑苷脂、神经节苷脂、胆固醇、胆固醇酯、甘油酯及其衍生物中的一种或多种。作为一个优选方案，所述载脂蛋白是ApoE及其模拟肽，ApoA-I、ApoA-II、ApoA-IV及其模拟肽，ApoC-I、ApoC-II、ApoC-III及其模拟肽中的一种或多种。作为一个优选方案，所述含有固相内核的脂蛋白纳米递药系统的粒径为10-1000nm。优选地，所述粒径为10-100nm。作为一个优选方案，所述药物分子为小分子化学药物、小分子多肽以及基因药物中的一种或多种。作为一个优选方案，所述基因药物为siRNA、shRNA、microRNA、mRNA、长链非编码RNA、DNA和反义寡核苷酸的一种或多种。作为一个优选方案，药物质量占处方含量0.001-80％，脂质质量占处方含量的20-95％，载脂蛋白质量占处方含量的5-80％。为实现本专利技术第二个目的，本专利技术公开以下技术方案：一种含有固相内核的脂蛋白纳米递药系统的制备方法，其特征在于通过以下步骤获得：a)采用反相微乳法制备负载药物分子的固相内核；b)由脂质和疏水的固相核心制备得到含固相内核的普通脂质体；c)通过在上述b)制备的含固相内核的普通脂质体溶液中加入载脂蛋白，制备得到含有固相内核的脂蛋白纳米递药系统。作为一个优选方案，所述制备含固相内核的普通脂质体或含固相内核的脂蛋白纳米递药系统的方法为薄膜水化法、反相微乳法、注入法、复乳法、熔融法、冷冻干燥法、逆向蒸发法、高压乳匀法、超声法或Ca2+融合法。为实现本专利技术第三个目的，本专利技术公开以下技术方案：含有固相内核的脂蛋白纳米递药系统在制备药物中的应用。作为一个优选方案，所述的药物为预防或治疗肿瘤的药物。所述的肿瘤为Ras激活或高表达的肿瘤，比如脑胶质瘤、胰腺癌、结直肠癌、胃癌、食管癌、肺癌、乳腺癌、宫颈癌、黑色素瘤以及白血病等。作为一个优选方案，所述的药物为预防或治疗中枢神经系统疾病的药物。本专利技术的特点是模拟天然脂蛋白，构建含固相内核的重组脂蛋白纳米药物传递系统，借助固相内核载带不同理化性质的药物，提高药物稳定，同时借助具有肿瘤营养作用的蛋白或多肽，作为营养物质被Ras激活肿瘤细胞特异性大量摄取，实现Ras激活靶向药物递送。本专利技术的优点在于：1)本专利技术首次提出采用重组脂蛋白包裹载药的固相内核，解决了药物包载方法受限于药物理化性质的局限性，实现脂蛋白核心载带亲水性药物，提高脂蛋白对亲水性药物的负载量及稳定性。2)含固相内核可使重组脂蛋白更为稳定，不易聚集。3)可以生物降解的磷酸钙、碳酸钙等固相核心遇酸敏感，可在微环境为酸性的内涵体中降解释放治疗药物如siRNA至靶细胞胞浆发挥作用。同时磷酸钙固相核心可以使重组脂蛋白载带任何一种可被磷酸钙、碳酸钙等能形成生物共沉淀的药物或其前体或其衍生物。4)含有固相内核的脂蛋白纳米递药系统可被Ras高活性的肿瘤细胞特异性大量摄取，实现载带药物对Ras高活性肿瘤细胞的靶向递送。5)含有固相内核的脂蛋白纳米递药系统能够高效透过血脑屏障，可用于治疗中枢神经系统疾病。附图说明图1为透射电镜观察(A)不含固相内核的重组脂蛋白(圆盘状)、(B)含磷酸钙固相内核的重组脂蛋白(球形)，标尺：20nm。图2为载NCsiRNA磷酸钙固相内核包裹于重组脂蛋白或者普通脂质体中，激光粒度仪检测其粒径(A)及其与10％FBS共孵，考察磷酸钙固相内核重组脂蛋白包载NCsiRNA的稳定性(B)。图3为胶质瘤C6细胞对含磷酸钙固相内核的重组脂蛋白和不含载脂蛋白的普通脂质体的细胞摄取情况，***p<0.001表明含磷酸钙固相内核的重组脂蛋白的细胞摄取量与不含载脂蛋白的普通脂质体存在显著性差异。图4为胶质瘤C6细胞与原代星形胶质细胞对含磷酸钙固相内核的重组脂蛋白的细胞摄取情况，***p<0.001表明胶质瘤C6细胞对含磷酸钙固相内核的重组脂蛋白的摄取能力显著高于原代星形胶质细胞，标尺：50μm。图5为载FAM-siRNA的磷酸钙固相内核包裹于重组脂蛋白，并与胶质瘤C6细胞共孵育，观察溶酶体逃逸本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种含有固相内核的脂蛋白纳米递药系统，其特征在于，所述纳米递药系统由脂质、载脂蛋白和固相内核组成；所述固相内核由药物分子、不溶性或难溶性无机盐构成，药物分子负载在固相内核中。

【技术特征摘要】
1.一种含有固相内核的脂蛋白纳米递药系统，其特征在于，所述纳米递药系统由脂质、载脂蛋白和固相内核组成；所述固相内核由药物分子、不溶性或难溶性无机盐构成，药物分子负载在固相内核中。2.根据权利要求1所述的一种含有固相内核的脂蛋白纳米递药系统，其特征在于，所述不溶性或难溶性无机盐为可生物降解的磷酸钙沉淀、碳酸钙沉淀、硫酸钙沉淀、氟化钙沉淀、硅酸钙沉淀、海藻酸钙沉淀、硫酸镁沉淀、磷酸镁沉淀、碳酸镁沉淀、氟化镁沉淀、硅酸镁沉淀、硫酸钡沉淀、磷酸钡沉淀、碳酸钡沉淀、氟化钡沉淀、硅酸钡沉淀的一种或多种。3.根据权利要求1所述的一种含有固相内核的脂蛋白纳米递药系统，其特征在于，所述不溶性或难溶性无机盐为磷酸钙或碳酸钙沉淀。4.根据权利要求1所述的一种含有固相内核的脂蛋白纳米递药系统，其特征在于，所述脂质是蛋磷脂、豆磷脂、磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇、磷脂酸、心磷脂、溶血磷脂、鞘氨醇、神经酰胺、鞘磷脂、脑苷脂、神经节苷脂、胆固醇、胆固醇酯、甘油酯及其衍生物中的一种或多种。5.根据权利要求1所述的一种含有固相内核的脂蛋白纳米递药系统，其特征在于，所述载脂蛋白是ApoE及其模拟肽，ApoA-I、ApoA-II、ApoA-IV及其模拟肽，ApoC-I、ApoC-II、ApoC-III及其模拟肽中的一种或多种。6.根据权利要求1所述的一种含有固相内核的脂蛋白纳米递药系统，其特征在于，所述药物分子为小分子化学药物、小分子多肽以及基因药物中的...

【专利技术属性】
技术研发人员：高小玲，黄佳琳，江淦，宋清香，陈红专，
申请(专利权)人：上海交通大学医学院，
类型：发明
国别省市：上海,31