基质细胞用于制备微毛囊的用途制造技术

本发明专利技术涉及基质细胞用于获得微毛囊的用途，并且涉及其用于评估化妆品、药物或皮肤病学产品的效果的用途，以及还用于对多毛性减弱状态进行预防或治疗处理的用途。

Use of stromal cells for the preparation of hair follicles

The present invention relates to the use of matrix cells for obtaining hair follicles, and relates to their use for evaluating the effects of cosmetics, drugs or dermatology products, and also for the use of prevention or treatment for the state of the diminished hairy.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】基质细胞用于制备微毛囊的用途本专利技术涉及通过培养和扩增基质细胞来产生微毛囊的方法。本专利技术同样涉及通过以上提及的方法生产的微毛囊，并且涉及其用于治疗脱发的用途，以及用于评估化妆品、药物和皮肤病学产品的效果的用途。脱发由各种因素：基因、激素和环境，通过饮食和通过身体活动来调节。毛发具有重要的美学和身份作用。女性或男性的脱发可能因此导致相当严重的心理痛苦。因此，在人的一生中，拥有健康、强韧和浓密的毛发是大多数女性和男性的追求。已知许多用于治疗脱发的技术，例如细胞疗法、激光疗法、或其他无需手术的植入物。后者立即见效，并且比手术的侵入性小得多。为了获得植入物，通过培养毛球中存在的各种细胞类型来获得人毛囊。毛球是梨形的，并且由以下组成：-作为真皮起源发育的毛乳头，位于毛囊的基部。毛乳头是高度血管化的部位，通过其生长因子和细胞外基质蛋白的储存参与毛发生长的营养和调节。该信息将被传送到在基质中产生的基质细胞，以允许其分化(ReesJL.Geneticsofhairandskincolor[毛发和肤色的遗传学]；Voyage3DauCoeurducheveu[3DvoyagetotheHeartofthehair(对毛发中心的3D航海)]网址-URL：www.hair-science.com)；-基质，其是遮盖真皮乳头的区域，由一簇没有特别分化的基质细胞构成。基质是强烈的有丝分裂活动的所在地。基质细胞，位于毛球中并且在真皮乳头周围形成小细胞簇，主要由角质形成细胞的前体细胞构成，该前体细胞构成发芽层并且迅速增殖以便分化形成毛干，因此基质细胞在毛发周期中起着重要作用。从生长期开始直到所述阶段结束时，这些基质细胞将增殖直到退化期，并然后在静止期消失。(EblingFJ.Thebiologyofhair.[毛发的生物学]DermatolClin.[临床皮肤病]1987年7月；5(3)：467-81.Review[综述]；SaitohM，UzukaM，SakamotoM.Humanhaircycle.[人类毛发循环]JInvestDermatol.[调查性皮肤病杂志]1970年1月，54，第65至81页。细胞分化将允许外上皮鞘(ORS)、内上皮鞘(IRS)、和之后毛干的各种细胞类型的形成。它还是控制毛发形状的该基质。该基质围绕直发的对称轴均匀分布，而对于卷发的一侧基质分布则更多(Voyage3DauCoeurducheveu[3DvoyagetotheHeartofthehair(对毛发中心的3D航海)]网址-URL：www.hair-science.com；MelissopoulosA和LevacherC.Lesannexescutanées[Theskinappendages(皮肤附属器)].在：Lapeau：structureetphysiologie[Theskin：structureandphysiology(皮肤：结构和生理)]，由Lavoisier出版；1998.第57至99页)。基质还包含负责毛发色素沉着的毛囊黑色素细胞。这些基质细胞的增殖和分化由真皮乳头控制(BotchkarevVA，KishimotoJ.Molecularcontrolofepithelial-mesenchymalinteractionsduringhairfolliclecycling.[毛囊周期中上皮-间质相互作用的分子控制]JInvestDermatolSympProc.[调查性皮肤病研讨会论文集]2003年6月；8(1)：46-55.Review[综述])；-外上皮鞘和内上皮鞘，由毛球的上层基质产生，还被称为角质化区域。外上皮鞘构成了毛囊的外包膜：它是表皮的内陷。它特别容纳干细胞，毛囊将由这些干细胞循环再生。内上皮鞘将外上皮鞘与毛干分开。该鞘由组织在角质化同心层中的三种类型的细胞组成，该角质化同心层伴随毛发的生长。亨利氏层(Henlé′slayer)、赫胥黎氏层(Huxley’slayer)、以及由扁平细胞形成的指向毛发基质的角质层是不同的；-毛干，部分可见的是毛发。毛干的结构从外到内由三个不同的层组成。角质层、皮质、和髓质全部构成了所有的角质化细胞。或多或少接近人类毛囊的毛囊已经开发出来若干年了。例如，可以提及通过培养毛球的各种细胞而获得的毛囊，在以下文献中进行了描述：EP2274419，EP2447357。尽管如此，这些模型都不包含基质细胞，它们是形成毛干所必需的细胞，以足够的数量代表人微毛囊的大部分特征。令人惊讶的是，本申请人已经证明，在Y27632存在下培养基质的细胞允许这些细胞相当大的增殖，并将其分化成对K85K35标记呈阳性的角质形成细胞，其达到汇合同时形成规则簇。这些放置在3D培养中的细胞使得有可能出乎意料地获得显示出体内微毛囊的大部分特征的微毛囊，特别包括角质形成细胞和黑色素细胞。形成该毛囊的细胞表现出表达k85k35标记的特征。因此，根据本专利技术的方法证明是有利的，这归因于它使得通过使用单一细胞类型能够获得微毛囊的事实，基质细胞的类型提供用于形成微毛囊所需的所有细胞类型。因此，根据其第一个主题，本专利技术涉及基质细胞用于制备微毛囊的用途。使用基质细胞制备微毛囊术语“基质细胞”旨在意指位于毛球中的细胞，并且这些细胞形成真皮乳头附近的小细胞簇(EblingFJ.Thebiologyofhair.[毛发的生物学]DermatolClin.[皮肤病临床学]1987年7月；5(3)：467-81.Review[综述]；SaitohM，UzukaM，SakamotoM.Humanhaircycle.[毛发周期]JInvestDermatol.[调查性皮肤病杂志]1970年1月；54(1)：65-81)。这些细胞的样品可以被采集，并且它们可以被扩增并存储在组织库中以用于随后使用的目的。为了保持基质组织的完整性，可以根据以下方法对这些细胞进行取样：将毛囊置于含有补充有2％抗生素和非必需氨基酸的最小培养基的有盖培养皿中。毛球区域在真皮乳头顶部被切割，并且因此将毛球上皮与真皮乳头和结缔组织鞘分开。基质细胞提供了制备微毛囊所需的全部细胞，并且因此使用基质细胞制备微毛囊不需要其他细胞类型，并且可以在不提供任何外源细胞的情况下进行。为了获得足够量的用于获得微毛囊的基质细胞，本申请人已经开发了一种扩增这些细胞的方法，使得它们在聚集时分化成在汇合时形成簇的K85K35角质形成细胞。因此，本申请人已经开发了用于制备微毛囊的方法，该方法包括至少一个步骤：在有效量的ROCK抑制剂的存在下扩增基质细胞，持续足够的一段时间以允许所述细胞分化成对K85K35标记呈阳性的角质形成细胞。用于制备微毛囊的此方法特征在于该方法包括以下步骤：a-从头皮样品中分离毛囊；b-在浸入培养基的所述支持物上切割真皮乳头上方的毛球区域；c-从结缔组织鞘和从真皮乳头中分离处于细胞团块形式的基质细胞；d-在Green7F培养基中，在3T3i成纤维细胞的饲养层上沉积细胞团块，用丝裂霉素阻断；e-在ROCK抑制剂的存在下，在所述支持物的表面上扩增基质细胞；f-回收K85K35角质形成细胞；g-在3D培养中培养步骤f)中获得的角质形成细胞。显微解剖在毛发生长期可以仅从毛发中对基质本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.位于毛球中的基质细胞用于制备微毛囊的用途。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.09.29 FR 15591861.位于毛球中的基质细胞用于制备微毛囊的用途。2.一种用于制备微毛囊的“体外”方法，所述方法包括至少一个步骤：在有效量的ROCK抑制剂的存在下培养所述位于毛球中的基质细胞，持续足够的一段时间以允许所述细胞分化成对K85K35标记呈阳性的角质形成细胞。3.根据权利要求2所述的方法，其中所述ROCK抑制剂是Y27632。4.根据权利要求2和3所述的方法，其中所述ROCK抑制剂的有效量是从1μM至100μM。5.根据权利要求2至4所述的方法，其中所述ROCK抑制剂的有效量是从5μM至25μM。6.根据权利要求2至5所述的方法，其中所述ROCK抑制剂的有效量是10μM。7.根据权利要求2至6中任一项所述的方法，其中将所述基质细胞在所述ROCK抑制剂的存在下培养持续至少2天，并且优选地持续至少3天。8.根据权利要求2至7所述的方法，其特征在于对K85K35标记呈阳性的角质形成细胞达到汇合同时形成规则簇。9.根据权利要求2至8所述的方法，其特征在于所述方法包括以下步骤：a-分离支持物上的囊；b-在浸入培养基中的所述支持物上，切割真皮乳头上方的球区域；c-在所述支持物上回收处于细胞团块形式的基质细胞；d-在ROCK抑制剂的存在下扩增所述基质细胞；e-回收对K35K85标记呈...

【专利技术属性】
技术研发人员：K巴卡，C科林詹戈，
申请(专利权)人：莱雅公司，
类型：发明
国别省市：法国,FR