一种蛋鸭小卵泡膜细胞的分离提取方法技术

本发明专利技术公开了一种蛋鸭小卵泡膜细胞的分离提取方法，包括以下步骤：选取一只产蛋期蛋鸭，解剖剪取卵巢组织，分离出卵泡；剥离小卵泡外的结缔组织层，固定住卵泡后将小卵泡剪破，将卵泡膜翻转，卵泡膜内层朝上，刮除卵黄和颗粒细胞层；在卵泡膜层中加入Ⅱ型胶原蛋白酶消化液，进行消化处理；再次刮除上述的组织内外两面细胞，吹打、冲洗组织层；将冲洗干净的组织层置于新配置的Ⅱ型胶原蛋白酶消化液中，进行消化处理；将组织剪成碎片，进行消化处理；将混悬液用细胞网筛过滤，收集滤液，加入胎牛血清终止消化，离心收集细胞沉淀，制备得到蛋鸭小卵泡膜细胞。

A method for isolation and isolation of small follicle cells from laying ducks

The invention discloses a method of separating and extracting the egg ducks' small follicle membrane cells, including the following steps: selecting an egg ducks at an egg production stage, dissecting the ovarian tissue, separating the follicles, stripping the connective tissue layer outside the small follicle, cutting the follicle after the follicle fixed, and turning the follicular membrane upside down, the follicular membrane upwards and scraped. The egg yolk and granular cell layer; the digestive juice of type II collagen enzyme was added to the follicle membrane and digested; once again the two sides of the tissue inside and outside the tissue were removed and the tissue layer was blown and washed; the clean tissue layer was placed in the new type of type II collagen enzyme digestion solution and digested; the tissue was cut into the tissue. The fragments were digested, and the suspension was filtered by the cell screen, the filtrate was collected, the fetal bovine serum was added to terminate the digestion, and the cells were collected by centrifugation to prepare the egg ducks' small follicle membrane cells.

【技术实现步骤摘要】
一种蛋鸭小卵泡膜细胞的分离提取方法
本专利技术属于家禽育种
，具体地说，涉及一种蛋鸭小卵泡膜细胞的分离提取方法。
技术介绍
家禽卵泡膜细胞是卵泡的重要组成部分，围绕在颗粒层外周的一层扁平细胞，其在卵泡发育过程中起着至关重要的作用。目前卵泡相关研究中，人们更多的关注是颗粒细胞而忽略了卵泡膜细胞。卵泡膜细胞体外培养技术是研究卵泡膜在卵泡发育中作用机制的关键。现研究报道中，鲜有关于水禽小卵泡的卵泡膜细胞体外培养报道，这样，无法全面了解蛋鸭小卵泡卵泡膜细胞在卵泡发育中的生理过程。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术提供了一种蛋鸭小卵泡膜细胞的分离提取方法，该方法细胞纯度高，活力好，分离密度高。为了解决上述技术问题，本专利技术公开了一种蛋鸭小卵泡膜细胞的分离提取方法，包括以下步骤：步骤1、选取一只产蛋期蛋鸭，解剖剪取卵巢组织，分离出3-6mm小卵泡，将小卵泡置于盛有灭菌PBS的培养皿中；步骤2、用眼科镊剥离小卵泡外的结缔组织层，固定住卵泡后用眼科剪将小卵泡剪破，将卵泡膜翻转，卵泡膜内层朝上，用眼科镊刮除卵黄和颗粒细胞层；步骤3、在卵泡膜层中加入Ⅱ型胶原蛋白酶消化液，置于干净的培养皿中，并放置本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种蛋鸭小卵泡膜细胞的分离提取方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、选取一只产蛋期蛋鸭，解剖剪取卵巢组织，分离出3‑6mm小卵泡，将小卵泡置于盛有灭菌PBS的培养皿中；步骤2、用眼科镊剥离小卵泡外的结缔组织层，固定住卵泡后用眼科剪将小卵泡剪破，将卵泡膜翻转，卵泡膜内层朝上，用眼科镊刮除卵黄和颗粒细胞层；步骤3、在卵泡膜层中加入Ⅱ型胶原蛋白酶消化液，置于干净的培养皿中，并放置在培养箱中进行消化处理；步骤4、用镊子再次刮除步骤3中的组织内外两面细胞，吹打、冲洗组织层；步骤5、将步骤4中冲洗干净的组织层置于新配置的Ⅱ型胶原蛋白酶消化液中，进行消化处理；步骤6、将步骤5制备得到的组织剪成碎片，加...

【技术特征摘要】
1.一种蛋鸭小卵泡膜细胞的分离提取方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、选取一只产蛋期蛋鸭，解剖剪取卵巢组织，分离出3-6mm小卵泡，将小卵泡置于盛有灭菌PBS的培养皿中；步骤2、用眼科镊剥离小卵泡外的结缔组织层，固定住卵泡后用眼科剪将小卵泡剪破，将卵泡膜翻转，卵泡膜内层朝上，用眼科镊刮除卵黄和颗粒细胞层；步骤3、在卵泡膜层中加入Ⅱ型胶原蛋白酶消化液，置于干净的培养皿中，并放置在培养箱中进行消化处理；步骤4、用镊子再次刮除步骤3中的组织内外两面细胞，吹打、冲洗组织层；步骤5、将步骤4中冲洗干净的组织层置于新配置的Ⅱ型胶原蛋白酶消化液中，进行消化处理；步骤6、将步骤5制备得到的组织剪成碎片，加入新配置的Ⅱ型胶原蛋白酶消化液进行消化处理；步骤7、将混悬液用细胞网筛过滤，收集滤液，加入胎牛血清终止消化，离心收集细胞沉淀，制备得到蛋鸭小卵泡膜细胞。2.根据...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗茜，陈伟，
申请(专利权)人：广东省农业科学院动物科学研究所，
类型：发明
国别省市：广东,44