A culture method of vascular endothelial stem cells, including the following steps: the first step, the preparation of vascular endothelial stem cells; the second step, the first step of vascular endothelial stem cells to be cultured in the first step: the third step, the second steps to obtain cell planks for proliferation curve experiment; fourth step, the second steps to obtain cell collection The flow test was used to identify the stem cells. Vascular endothelial stem cells were prepared by the digestion method, and three kinds of gas (oxygen, nitrogen, carbon dioxide) culture system were established to develop and amplify vascular endothelial stem cells. The technology has the advantages of high efficiency, economy and convenience. It can promote the proliferation rate and state of vascular endothelial stem cells better than that of conventional carbon dioxide culture.
【技术实现步骤摘要】
一种血管内皮干细胞的培养方法
本专利技术属于生物
,涉及一种血管内皮干细胞的培养方法。
技术介绍
血管内皮干细胞(endothelialstemcells,ESC)是一类具有强大促进血管生成功能的干细胞。大量实验显示,血管内皮干细胞具有极低的免疫原性,同种异体ESC在人体内不诱导针对其干细胞的免疫应答;ESC还能在体内抑制炎性细胞因子如TNF-ɑ、IFN-Y的产生,同时促进抗炎性因子如IL-4的产生,以及促进T调节细胞(Tregulatorycells)的产生等。并且ESC可以诱导分化成各种细胞组织包括血管、神经、肌肉、骨骼和多种内脏器官等。现有的培养技术,ESC细胞培养所使用的培养基成分较多,且价格昂贵,且体外培养10代以上,细胞容易出现衰老、退化现象,增殖效率降低,且在培养基中添加较多的细胞生长因子,会促进干细胞分化,对于维持其干性与稳定性不利,影响干细胞储存与研究质量。同时,氧气的浓度对于细胞的培养起着至关重要的作用,氧气浓度是决定细胞命运的一个关键因素,并可调节应激反应标志物的表达。有实验发现,氧气浓度的改变对细胞的生长状态也将发生改变。机体内的干细胞总是集中于氧气相对少的地方。
技术实现思路
为解决现有技术存在的问题,本专利技术的目的在于提供一种血管内皮干细胞的培养方法,该方法尤其适用于脐带血管内皮干细胞的培养。为实现上述目的及其他相关目的,本专利技术提供一种血管内皮干细胞的培养方法,包括以下步骤:第一步、制备血管内皮干细胞;a、选取优质脐带,检测传染病源,传染五项指标均为阴性,则此脐带可进行下一步实验;b、分离血管内皮干细胞,包括以下步骤:① ...
【技术保护点】
1.一种血管内皮干细胞的培养方法,其特征在于:包括以下步骤:第一步、制备血管内皮干细胞;a、选取优质脐带,检测传染病源,传染五项指标均为阴性,则此脐带可进行下一步实验;b、分离血管内皮干细胞,包括以下步骤:①带无菌手套,取出脐带,在止血钳内侧用碘酒和酒精棉球消毒后,用无菌剪刀将两端脐带剪除;②在脐带的一端找到静脉,插入脐带静脉插管,用两根粗丝线扎牢,并冲洗静脉腔,至将脐血洗净;③赶出所述静脉腔内的残余液体,将脐带的另一端用止血钳夹闭,用10ml注射器连接针头,注入37℃预热的0.1%胶原酶约6‑8ml,放入37℃Cord Buffer中保温6‑10min;④吸出静脉腔内胶原酶所消化的细胞悬液,加入预加有20ml cord Buffer的离心管中,再冲洗静脉腔,一并加入离心管中;⑤离心,1500rpm,10min,弃上清液,收集细胞;c、配制培养液;d、培养液重悬细胞;第二步、将第一步中分离的血管内皮干细胞进行培养:a、培养血管内皮干细胞;通过充入氮气,调整O2浓度为5%、20%,CO2浓度设置为5%,将重悬的细胞进行培养;每隔3天换液,直至细胞长至80‑90%;b、细胞消化传代;步骤b ...
【技术特征摘要】
1.一种血管内皮干细胞的培养方法,其特征在于:包括以下步骤:第一步、制备血管内皮干细胞;a、选取优质脐带,检测传染病源,传染五项指标均为阴性,则此脐带可进行下一步实验;b、分离血管内皮干细胞,包括以下步骤:①带无菌手套,取出脐带,在止血钳内侧用碘酒和酒精棉球消毒后,用无菌剪刀将两端脐带剪除;②在脐带的一端找到静脉,插入脐带静脉插管,用两根粗丝线扎牢,并冲洗静脉腔,至将脐血洗净;③赶出所述静脉腔内的残余液体,将脐带的另一端用止血钳夹闭,用10ml注射器连接针头,注入37℃预热的0.1%胶原酶约6-8ml,放入37℃CordBuffer中保温6-10min;④吸出静脉腔内胶原酶所消化的细胞悬液,加入预加有20mlcordBuffer的离心管中,再冲洗静脉腔,一并加入离心管中;⑤离心,1500rpm,10min,弃上清液,收集细胞;c、配制培养液;d、培养液重悬细胞;第二步、将第一步中分离的血管内皮干细胞进行培养:a、培养血管内皮干细胞;通过充入氮气,调整O2浓度为5%、20%,CO2浓度设置为5%,将重悬的细胞进行培养;每隔3天换液,直至细胞长至80-90%;b、细胞消化传代;步骤b所得细胞,PBS洗涤两遍后,加入...
【专利技术属性】
技术研发人员:吴金芸,叶华衍,
申请(专利权)人:伯仕利生物科技发展盐城有限公司,
类型:发明
国别省市:江苏,32
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