基于紫外诱导的桑叶中生物活性单体成分chalcomoracin及其制备方法和用途技术

本发明专利技术公开了一种基于紫外诱导的桑叶中生物活性单体成分chalcomoracin及其制备方法和用途，所述制备方法包括以下步骤：(1)选取新鲜采摘桑叶，经紫外诱导，干燥，粉碎；(2)粉碎后的干燥桑叶，经脱脂、抽提、浓缩步骤获得总提物浸膏；(3)总提物浸膏再经过硅胶柱分离及Sephadex LH‑20凝胶柱纯化，获得chalcomoracin纯品，采用HPLC分析方法测定，该纯品纯度大于85％。本发明专利技术提供的从紫外诱导后的桑叶中制备chalcomoracin的方法技术路线经济合理，获得的产品质量可控；所述的chalcomoracin具有显著的抗恶性肿瘤以及放疗增敏作用，作用机制新颖独特，可应用于制备新型抗肿瘤药物。

UV active induced bioactive monomer chalcomoracin in mulberry leaves and its preparation and uses

The invention discloses a biological active monomer component chalcomoracin in the mulberry leaf based on ultraviolet induced and its preparation method and use. The preparation method comprises the following steps: (1) selecting fresh mulberry leaves, inducing, drying and crushing by ultraviolet, and (2) the dried mulberry leaves after crushed, obtained by the steps of degreasing, extraction and concentration. Extract extract; (3) the extract of the total extract was separated by silica gel column and purified by Sephadex LH 20 gel column, and the pure chalcomoracin was obtained by HPLC analysis. The purity of the purified product was more than 85%. The method of preparing chalcomoracin from the ultraviolet induced mulberry leaves is economical and reasonable, and the quality of the product is controlled. The chalcomoracin has significant anti malignant tumor and radiation sensitization effect, and the mechanism is novel and unique, which can be applied to the preparation of new antitumor drugs.

【技术实现步骤摘要】
基于紫外诱导的桑叶中生物活性单体成分chalcomoracin及其制备方法和用途
本专利技术属于生物医药领域,具体涉及一种基于紫外诱导的桑叶中单体成分chalcomoracin(CMR)的制备方法和应用。
技术介绍
桑(MorusalbaL.)是桑科桑属落叶乔木或灌木，其叶、嫩枝、根皮、果穗均可入药。桑叶为桑科植物桑的经霜干燥树叶，桑叶性味苦、感、寒，归肺、肝经，具有疏风散热，清肝明目的功效，可用于治疗风热表征温病初起，燥热咳嗽，目赤肿痛，目暗昏花等症。此外，桑叶因叶大，肉厚多汁，也是家蚕主要的食物来源。桑喜温暖湿润气候，耐寒，耐干旱，在全国各地均有种植，以浙江、江苏、四川等地居多。桑叶中含有多种次生代谢产物，是一种重要的药用植物，具有抗菌、抗炎作用，抗病毒、抗肿瘤作用等。专利技术人对桑叶进行长期研发，发现桑叶在响应紫外诱导之后，次生代谢产物发生明显改变(Gu,XiDa,etal."UV-BinducedchangesinthesecondarymetabolitesofMorusalbaL.Leaves."Molecules，2010(15):2980-93.)，并发现喂养诱导桑叶的家蚕，能够显著降低其感染家蚕核型多角体病毒(BmNPV)之后的死亡率(朱玮等，一种防治家蚕BmNPV病的诱导桑叶及其用途，201710252959.8，公开号CN107114561A)。然而，目前的现有技术中，基于紫外诱导的CMR的制备工艺以及用途尚未明确，有待于进一步研究。
技术实现思路
本专利技术的目的在于解决现有技术中于紫外诱导的CMR的制备工艺尚未明确的技术问题，并提供一种基于紫外诱导的桑叶中生物活性单体成分chalcomoracin(CMR)的制备方法。基于前期研究，申请人发现桑叶中CMR具有抗肿瘤功效，作为一种天然单体成分具有开发利用潜力，因而对其制备工艺进行深入研究，从而完成了本专利技术。本专利技术所采用的具体技术方案如下：基于紫外诱导的桑叶中生物活性单体成分chalcomoracin的制备方法，其步骤如下：1)将新鲜桑叶在紫外光下诱导照射，照射后的桑叶阴干或烘干；2)将干燥后的桑叶粉碎，加入低极性溶媒浸泡1～36小时进行脱脂，过滤，取滤渣备用；3)在所述滤渣中加入中等极性溶媒提取，提取液过滤，合并，回收提取溶媒，得到总提物浸膏；4)取步骤3)中总提物浸膏，加入溶媒溶解，再加入1～10倍总提物浸膏重量的柱填料拌样，将溶媒挥干，得到拌样样品；另取10～100倍拌样样品重量的硅胶，装入色谱柱，保持径高比为1:3～30，进行梯度洗脱，收集不同流份，薄层检识，合并含有CMR的流份，并回收洗脱溶媒，得到浓缩物；5)取步骤4)中浓缩物，溶于二氯甲烷和甲醇混合溶媒中，二氯甲烷和甲醇的混合比例为体积比99:1～1:99，经SephadexLH-20凝胶色谱柱进行纯化，收集不同流份，薄层检识，合并含有CMR的流份，回收溶媒，得到CMR纯品。作为优选，将新鲜桑叶在紫外光下诱导照射的方法具体为：将新鲜采摘的桑叶经紫外光照射，紫外光为UVA波段、UVB波段、UVC波段的一种或多种组合，紫外光照射强度为10～1000W，紫外光照时间为0.05～3h，照射过程中保持湿度在10％～100％；所述的新鲜桑叶优选为4～10月份采摘的新鲜桑叶。该诱导方法具体可参照申请号为201710252959.8的专利技术专利。作为优选，所述的低极性溶媒为石油醚、环己烷、苯等脂溶性溶媒中的任意一种或多种按照任意比例混合，优选60-90℃沸程的石油醚为溶媒。作为优选，所述的中等极性溶媒为乙酸乙酯、氯仿、二氯甲烷、四氯化碳中的一种或多种按照任意比例混合，优选乙酸乙酯作为溶媒。作为优选，所述的3)中，提取方式为浸泡、回流或超声提取方式中的任意一种，优选浸泡方式；加入的中等极性溶媒倍数为滤渣质量的1～20倍，提取时间为1～36小时，提取次数为1～10次。作为优选，所述的步骤4)中，向总提物浸膏中加入的溶媒为甲醇或乙醇；所述的柱填料为硅胶或硅藻土；梯度洗脱采用的混合溶剂系统为二氯甲烷-甲醇、氯仿-甲醇或四氯化碳-甲醇。作为优选，所述的步骤4)和5)中，薄层色谱条件为：正向硅胶G预制板：展开剂为99:1～80:20的二氯甲烷-甲醇或氯仿-甲醇或四氯化碳-甲醇。本专利技术的另一目的在于提供一种由上述任一制备方法制得的生物活性单体成分CMR。本专利技术的另一目的在于提供一种上述生物活性单体成分CMR用于制备抗肿瘤药物或放疗增敏药物的用途。本专利技术提供的从紫外诱导后的桑叶中制备chalcomoracin的方法技术路线经济合理，获得的产品质量可控。本专利技术方法制备的chalcomoracin纯品，采用HPLC分析方法测定，该纯品纯度大于85％。本专利技术对分离得到的CMR的体内外抗肿瘤活性以及放疗增敏进行了考察。实验结果证明，CMR可有效抑制人前列腺癌细胞、人乳腺癌细胞、人肺癌细胞、人结直肠癌细胞、人胃癌细胞和人肝癌细胞体外增殖；CMR腹腔注射给药(30mg/kg，55mg/kg)对雌性裸鼠异种移植乳腺癌的生长具有显著的抑制作用。因此本专利技术中的chalcomoracin具有显著的抗恶性肿瘤以及放疗增敏作用，作用机制新颖独特，可应用于制备新型抗肿瘤药物。附图说明图1为实施实例1中紫外诱导桑叶提取物的液相色谱图。图中，色谱峰X为chalcomoracin。具体实施方式本专利技术所述的紫外诱导桑叶提取物chalcomoracin按以下实施例所表示的方法制造，所涉及到的方法是本领域的技术人员能够掌握和运用的技术手段。但以下实施例不得理解为任何意义上的对本领域专利技术权利要求的限制。下面结合具体实施例对本专利技术做进一步阐述，以便本领域技术人员可以更好地理解本专利技术的实质。实施例1：紫外诱导桑叶提取物chalcomoracin的制备将新鲜采摘的桑叶洗净后在紫外光下(UV-B波段)照射15分钟，照射后的桑叶于60℃烘干。烘干的桑叶粉碎后，加入20倍体积的石油醚，浸泡24小时，过滤，滤渣用5倍体积的乙酸乙酯浸泡24小时，提取次数为2次，过滤，合并提取液，回收乙酸乙酯，得到总提物浸膏。取总提取物浸膏，加入乙醇溶解，再加入2倍于总提取物浸膏重量的200目硅胶，将溶剂挥干得到拌样样品，取20倍于拌样样品重量的200目硅胶，装入色谱柱，保持径高比为1:10，以二氯甲烷-甲醇混合溶剂系统进行梯度洗脱(99:1-70:30)，收集不同流份，薄层检识，合并二氯甲烷-甲醇溶剂99:1-95:5之间的流份为CMR流份，并回收溶剂，得到浓缩物。将浓缩物溶于二氯甲烷和甲醇混合溶剂(95:5)中，经SephadexLH-20凝胶色谱柱进行纯化，收集不同流份，薄层检识，合并含有CMR的流份，回收溶剂，得到CMR纯品。CMR的核磁数据结果如下：1HNMR(500MHz,methanold4):δH8.42(1H,d,J＝9.3Hz,H-14"),7.34(1H,d,J＝8.1Hz,H-4),7.00(1H,d,J＝8.0Hz,H-20"),6.92(2H,br.s,H-3,7),6.77(1H,m,H-5),6.76(2H,br.s,H-2',6'),6.50(1H,d,J＝2.lHz,H-17"),6.42(1H,d,J＝9.3Hz,H-13"),6.32(本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于紫外诱导的桑叶中生物活性单体成分chalcomoracin的制备方法，其特征在于，步骤如下：1)将新鲜桑叶在紫外光下诱导照射，照射后的桑叶阴干或烘干；2)将干燥后的桑叶粉碎，加入低极性溶媒浸泡1～36小时进行脱脂，过滤，取滤渣备用；3)在所述滤渣中加入中等极性溶媒提取，提取液过滤，合并，回收提取溶媒，得到总提物浸膏；4)取步骤3)中总提物浸膏，加入溶媒溶解，再加入1～10倍总提物浸膏重量的柱填料拌样，将溶媒挥干，得到拌样样品；另取10～100倍拌样样品重量的硅胶，装入色谱柱，保持径高比为1:3～30，进行梯度洗脱，收集不同流份，薄层检识，合并含有chalcomoracin的流份，并回收洗脱溶媒，得到浓缩物；5)取步骤4)中浓缩物，溶于二氯甲烷和甲醇混合溶媒中，二氯甲烷和甲醇的混合比例为体积比99:1～1:99，经Sephadex LH‑20凝胶色谱柱进行纯化，收集不同流份，薄层检识，合并含有chalcomoracin的流份，回收溶媒，得到chalcomoracin纯品。

【技术特征摘要】
1.一种基于紫外诱导的桑叶中生物活性单体成分chalcomoracin的制备方法，其特征在于，步骤如下：1)将新鲜桑叶在紫外光下诱导照射，照射后的桑叶阴干或烘干；2)将干燥后的桑叶粉碎，加入低极性溶媒浸泡1～36小时进行脱脂，过滤，取滤渣备用；3)在所述滤渣中加入中等极性溶媒提取，提取液过滤，合并，回收提取溶媒，得到总提物浸膏；4)取步骤3)中总提物浸膏，加入溶媒溶解，再加入1～10倍总提物浸膏重量的柱填料拌样，将溶媒挥干，得到拌样样品；另取10～100倍拌样样品重量的硅胶，装入色谱柱，保持径高比为1:3～30，进行梯度洗脱，收集不同流份，薄层检识，合并含有chalcomoracin的流份，并回收洗脱溶媒，得到浓缩物；5)取步骤4)中浓缩物，溶于二氯甲烷和甲醇混合溶媒中，二氯甲烷和甲醇的混合比例为体积比99:1～1:99，经SephadexLH-20凝胶色谱柱进行纯化，收集不同流份，薄层检识，合并含有chalcomoracin的流份，回收溶媒，得到chalcomoracin纯品。2.如权利要求1所述的基于紫外诱导的桑叶中生物活性单体成分chalcomoracin的制备方法，其特征在于，将新鲜桑叶在紫外光下诱导照射的方法具体为：将新鲜采摘的桑叶经紫外光照射，紫外光为UVA波段、UVB波段、UVC波段的一种或多种组合，紫外光照射强度为10～1000W，紫外光照时间为0.05～3h，照射过程中保持湿度在10％～100％；所述的新鲜桑叶优选为4～10月份采摘的新鲜桑叶。3.如权利要求1所述的基于紫外诱导的桑叶中生物活性单体成分chalcomoracin的制备方法，其特征在于，所述的低极性溶媒...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱玮，韩昊特，张琳，胡瑾，虞娇娇，杨丙贤，管祺杰，田景奎，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33