利用低共熔溶剂/盐双水相体系萃取锁阳中熊果酸的方法技术

本发明专利技术采用低共熔溶剂/盐双水相体系为提取溶剂，是先对锁阳粉末进行超声萃取，得到含熊果酸的低共熔溶剂相，再采用反胶团溶液进行前萃取，静置分层，上相为含熊果酸的反胶团相；然后在含熊果酸的反胶团相中加入无水乙醇进行后萃取，静置分层，下相为含熊果酸的乙醇相，经减压浓缩，真空干燥，得熊果酸粉末。本发明专利技术采用低共熔溶剂/双水相体系对锁阳粉末进行提取，采用反胶团萃取对低共熔溶剂中的熊果酸中进行分离，具有分相时间短，粘度低，不易乳化等特点，低共熔溶剂和反胶团溶剂均可循环利用，萃取成本较低，熊果酸产品的纯度和得率都较高，是一种绿色、高效、简便的分离方法。

【技术实现步骤摘要】
利用低共熔溶剂/盐双水相体系萃取锁阳中熊果酸的方法
本专利技术涉及一种锁阳中熊果酸的萃取方法，尤其涉及一种利用低共熔溶剂/盐双水相体系萃取锁阳中熊果酸的方法，属于天然产物深加工

技术介绍
熊果酸是ɑ-香树脂烷型五环三萜类化合物，是植物中一类重要的天然产物，具有抗癌、抗菌、抗糖尿病、抗溃疡、增加免疫、降血脂等多种生物学效应。近年来，熊果酸在食品、医药及化妆品领域已越来越受到重视，是功能食品和药物开发的重要来源。锁阳为锁阳科锁寄生植物锁阳的干燥肉质茎，主要分布于我国西北地区，作为中、蒙药中常用药材之一，具有提高免疫、预防疾病和抗癌等多种功效，其中锁阳中重要活性成分之一为熊果酸。危晴等人分别采用85%乙醇超声辅助提取锁阳中熊果酸（湖北农业科学，2014，53（12）：2894-2897）；危晴等人通过优化索氏提取锁阳熊果酸工艺（食品研究与开发，2013，34（7）：85-88）；刘刚等人采用80%乙醇浓度回流提取锁阳熊果酸（吉林农业大学学报，2014，36（6）：723-729）。上述方法均借助于物理方法对熊多酸进行了粗提取。李贵文采用大孔树脂吸附法分离纯化锁阳中熊果酸（中成药，2011，33（9）：1612-1615）。CN201510083055.8公开了一种从锁阳中提取熊果酸的方法，采用乙醇回流提取、减压浓缩后进行模拟移动床色谱分离，获得纯度为96%以上，产率达80%以上的熊果酸。张喜峰等采用乙醇提取锁阳熊果酸基础上，利用离子液体/盐双水相对粗提物中熊果酸进行了萃取分离（精细化工，2014，31（9）：1080-1084）。作为一类新型的取代挥发性有机溶剂的绿色溶剂，离子液体具有传统溶剂所不具有的显著特点，可减少甚至消除溶剂对环境造成的污染。但离子液体对环境和生物存在一定的潜在风险，对植物和动物具有一定毒害作用。而低共熔溶剂的出现，不仅较好的继承了离子液体的优良特性，且克服了其弊端，具有合成简单、成本低、安全、生物相容性好等特点，是一种具备了绿色化学理念的新型溶剂。低共熔溶剂/盐双水相体系是将一定量低共熔溶剂和盐溶液相互混合，当二者达到一定浓度后，由于盐析作用，促使低共熔溶剂和盐形成两相。采用低共熔溶剂/盐双水相体系对植物中有效成分进行萃取时，目标产物和少量杂质分布在一相，而大部分杂质分布在另一相，可达到初步分离纯化目的。反胶团萃取是一种新型的液-液萃取技术，具有条件温和、高选择性、前萃取和后萃取同时进行、易放大、萃取相（反胶团相）可循环利用以及分离和浓缩同步进行等优点，在化学反应、萃取分离、纳米材料的制备等领域具有广阔应用前景。然而，目前关于利用超声辅助低共熔溶剂双水相萃取结合反胶团分离锁阳中熊果酸的研究尚未见报道。
技术实现思路
为了解决以上现有技术的缺点和不足之处，本专利技术的目的在于提供一种利用低共熔溶剂/盐双水相体系萃取锁阳中熊果酸的方法。本专利技术萃取锁阳中熊果酸的方法，包括以下工艺步骤：（1）低共熔溶剂/盐双水相体系形成将磷酸盐用蒸馏水溶解后，加入到由季铰盐与氢键供体共熔形成的低共熔溶剂中，混合均匀形成低共熔溶剂/盐双水相体系。所述低共熔溶剂中，季铰盐与氢键供体的摩尔比为1:1~1:3；其中季铰盐为氯化胆碱；氢键供体为葡萄糖、甘油、乙二醇、1,3-丁二醇、尿素中的一种；低共熔溶剂在双水相体系中的最终质量分数为23~42%；所述磷酸盐在双水相体系中的最终质量分数为25%~40%。（2）超声辅助低共熔溶剂/盐双水相萃取将锁阳粉末加入低共熔溶剂/盐双水相体系中，超声萃取；过滤萃取液，滤液静置1~2h，分成上、下两相，上相为含熊果酸的低共熔溶剂相；锁阳粉末与低共熔溶剂/盐双水相体系的固液质量比为1:25~1:100；超声萃取的功率为100~600W，温度为30~50℃，时间为10~40min。（3）二次双水相萃取在步骤（2）所得含熊果酸的低共熔溶剂相中，加入磷酸盐溶液，充分混匀，静置1~2h，分层并收集上相，上相为含熊果酸的低共熔溶剂相，用于反胶团萃取；下相为磷酸盐相；磷酸盐溶液的加入量为：使其在新形成的低共熔溶剂/盐双水相体系中的最终质量分数为25%~40%。（4）反胶团萃取在步骤（3）所得二次双水相萃取上相中加入反胶团溶液充分混合进行前萃取，静置分层，上相为含熊果酸的反胶团相；下相为低共熔溶剂相；再在反胶团相中加入无水乙醇充分混合进行后萃取，静置分层，上相为低共熔溶剂，下相为含熊果酸的乙醇相，经减压浓缩，真空干燥，得熊果酸粉末；所述的反胶团溶液为将表面活性剂分散在有机溶剂中形成的混合液；其中，表面活性剂为SDS(十二烷基磺酸钠)、AOT(琥珀酸二(2-乙基己基)酯磺酸钠)、SDBS（十二烷基苯磺酸钠）；有机溶剂为异辛烷或/和正辛醇。当有机溶剂为异辛烷和正辛醇时，二者的体积比为4:1~2:1。所述的反胶团溶液中，表面活性剂的浓度为20~100mmol/L；二次双水相萃取上相和反胶团溶液的体积比为1:1~1:3；反胶团相和无水乙醇体积比为1:0.5~1:1。（5）低共熔溶剂和反胶团溶液回收合并各步骤的低共熔溶剂相，经冷冻干燥至恒重的粘性液体状态，回收低共熔溶剂；收集反胶团后萃取的上相，回收反胶团溶液。本专利技术相对现有技术具有以下有益效果：1、本专利技术采用低共熔溶剂/盐双水相体系为提取溶剂，是先对锁阳粉末进行超声萃取，得到含熊果酸的低共熔溶剂相，再采用反胶团溶液进行前萃取，静置分层，上相为含熊果酸的反胶团相；然后在含熊果酸的反胶团相中加入无水乙醇进行后萃取，静置分层，下相为含熊果酸的乙醇相，经减压浓缩，真空干燥，得熊果酸粉末；2、本专利技术采用低共熔溶剂/双水相体系，结合传统的超声辅助手段进行提取，采用胶团萃取对低共熔溶剂中的熊果酸中进行分离，有效除去熊果酸中部分杂质，进一步提高了熊果酸产品的纯度和得率；经过二次双水相萃取，进一步除去熊果酸中的杂质，进一步提高了熊果酸产品的纯度和得率；熊果酸的得率可达40mg/g，纯度在97%以上；3、反胶团前萃取和后萃取可同时完成，具有分相时间短，粘度低，不易乳化等特点，是一种高效、简便的分离方法；4、采用的低共熔溶剂具有无毒性、生物降解性、生物相容性好、熔点低等特点，而且原子利用率为100%，是一种更为绿色的萃取分离的方法；5、低共熔溶剂和反胶团溶剂均可循环利用，萃取成本较低，易于放大和工业化生产。附图说明图1为本专利技术利用低共熔溶剂/盐双水相体系萃取锁阳中熊果酸的工艺流程图。具体实施方式下面通过具体实施例对本专利技术熊果酸的萃取方法做进一步说明。实施例1（1）低共熔溶剂/盐双水相体系形成：将K2HPO4加入到一定量的蒸馏水充分溶解后，加入氯化胆碱与尿素（摩尔比1:1）组成的低共熔溶剂，混合后形成双水相体系。双水相体系中，低共熔溶剂的质量百分数为25%，K2HPO4的质量分数为38%。（2）超声辅助萃取：将锁阳粉末按照固液比1:50（g/g）的比例加入到双水相体系中，超声波功率300W，脉冲工作方式为超声2s，间歇2s，30℃超声处理20min。过滤，滤液静置1h，形成两相，上相为含熊果酸的低共熔溶剂相；下相为含杂质的K2HPO4相；（3）二次双水相萃取：在上述含熊果酸的低共熔溶剂相中，再加入K2HPO4溶液，充分混匀，室温下静置1h后分相，上相为含熊果酸的低共熔溶本文档来自技高网...

【技术保护点】
利用低共熔溶剂/盐双水相体系萃取锁阳中熊果酸的方法，包括以下工艺步骤：（1）低共熔溶剂/磷酸盐双水相体系形成：将磷酸盐用蒸馏水溶解后，加入到由季铰盐与氢键供体共熔形成的低共熔溶剂中，混合均匀形成低共熔溶剂/磷酸盐双水相体系；（2）超声辅助低共熔溶剂/盐双水相萃取：将锁阳粉末加入低共熔溶剂/盐双水相体系中，超声萃取；萃取结束后过滤，滤液静置，分成上、下两相，上相为含熊果酸的低共熔溶剂相；（3）二次双水相萃取在步骤（2）所得含熊果酸的低共熔溶剂相中，加入磷酸盐溶液，充分混匀，静置1~2h，分层并收集上相，上相为含熊果酸的低共熔溶剂相，用于反胶团萃取，下相为磷酸盐相；（4）反胶团萃取在步骤（3）所得二次双水相萃取上相中加入反胶团溶液充分混合进行前萃取，静置分层，上相为含熊果酸的反胶团相，下相为低共熔溶剂相；再在反胶团相中加入无水乙醇充分混和进行后萃取，静置分层，上相为低共熔溶剂相，下相为含熊果酸的乙醇相，经减压浓缩，真空干燥，得熊果酸粉末；（5）低共熔溶剂和反胶团溶液回收合并各步骤的低共熔溶剂相，经冷冻干燥至恒重的粘性液体状态，回收低共熔溶剂；收集反胶团后萃取的上相，回收反胶团溶液。

【技术特征摘要】
1.利用低共熔溶剂/盐双水相体系萃取锁阳中熊果酸的方法，包括以下工艺步骤：（1）低共熔溶剂/磷酸盐双水相体系形成：将磷酸盐用蒸馏水溶解后，加入到由季铰盐与氢键供体共熔形成的低共熔溶剂中，混合均匀形成低共熔溶剂/磷酸盐双水相体系；（2）超声辅助低共熔溶剂/盐双水相萃取：将锁阳粉末加入低共熔溶剂/盐双水相体系中，超声萃取；萃取结束后过滤，滤液静置，分成上、下两相，上相为含熊果酸的低共熔溶剂相；（3）二次双水相萃取在步骤（2）所得含熊果酸的低共熔溶剂相中，加入磷酸盐溶液，充分混匀，静置1~2h，分层并收集上相，上相为含熊果酸的低共熔溶剂相，用于反胶团萃取，下相为磷酸盐相；（4）反胶团萃取在步骤（3）所得二次双水相萃取上相中加入反胶团溶液充分混合进行前萃取，静置分层，上相为含熊果酸的反胶团相，下相为低共熔溶剂相；再在反胶团相中加入无水乙醇充分混和进行后萃取，静置分层，上相为低共熔溶剂相，下相为含熊果酸的乙醇相，经减压浓缩，真空干燥，得熊果酸粉末；（5）低共熔溶剂和反胶团溶液回收合并各步骤的低共熔溶剂相，经冷冻干燥至恒重的粘性液体状态，回收低共熔溶剂；收集反胶团后萃取的上相，回收反胶团溶液。2.如权利要求1所述利用低共熔溶剂/盐双水相体系萃取锁阳中熊果酸的方法，其特征在于：步骤（1）所述低共熔溶剂中，季铰盐与氢键供体的摩尔比为1:1~1:3；其中季铰盐为氯化胆碱；氢键供体为葡萄糖、甘油、乙二醇、1,3-丁二醇、尿素中的一种；低共熔溶剂在双水相体系中的最终质量分数为23~42%。3.如权利要求1所述利用低共熔溶剂/盐双水相体系萃取锁阳中熊果酸的方法，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：张继，张喜峰，滕桂香，
申请(专利权)人：西北师范大学，
类型：发明
国别省市：甘肃,62