芹菜素‑8‑C‑β‑D‑木糖苷及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种式(I)所示的黄酮碳苷类化合物芹菜素‑8‑C‑β‑D‑木糖苷及其制备方法，本发明专利技术所述黄酮苷类化合物：芹菜素‑8‑C‑β‑D‑木糖苷的提取、分离、纯化方法简单，抑制肿瘤细胞活性明确，具有潜在的开发为抗肿瘤药物的价值，该化合物化学结构经过波谱学数据得到确认。

【技术实现步骤摘要】
芹菜素-8-C-β-D-木糖苷及其制备方法和应用(一)
本专利技术涉及一种具有抗肿瘤作用的新的黄酮碳苷类化合物芹菜素-8-C-β-D-木糖苷及其制备方法和应用。(二)
技术介绍
黄毛豆腐柴(PremnafulvaCraib)，系被子植物门双子叶植物纲管状花目马鞭草科豆腐柴属(Premna)植物，又名臭黄荆、观音柴、土霸王、战骨、穿云箭、凉粉柴等。豆腐柴属植物全世界约有200种，主要分布在亚洲与非洲的热带，少数种类向北延至亚热带，向南至大洋洲，向东至太平洋的中部岛屿。我国现知有44种5变种，主产我国南部，尤集中在云南地区，少数种类延伸至华中、华东、陕西、甘肃、西藏等地区。有关黄毛豆腐柴的药理作用和药用价值，以其根、茎研究报道较多。黄毛豆腐柴具有活血散淤、强筋健骨、祛风止痛之功效，广西民间壮族常用于治疗腰腿痛、跌打扭伤、风湿性关节炎和类风湿性关节炎、肝区疼痛等。黄毛豆腐柴的提取液(商品名健骨注射液)具有抗炎消肿、镇痛作用，用于治疗肥大性脊椎炎(即腰椎骨质增生症)。因此对该类植物进行系统、科学的研究，探明其有效成分及作用机理，找出具有生物活性的天然产物，丰富天然产物化学结构类型，为开发新药及扩大药源提供更多的科学依据，使该植物的价值发挥更大的经济效益和社会效益等具有重大意义。本专利技术以黄毛豆腐柴为研究对象，进行提取、分离、纯化、结构鉴定得到芹菜素-8-C-β-D-木糖苷，属于黄酮碳苷类化合物，该化合物具有一定程度的抗肿瘤活性。(三)
技术实现思路
本专利技术旨在提供一种具有抗肿瘤作用的芹菜素-8-C-β-D-木糖苷及其制备方法和应用。为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：一种具有抗肿瘤作用的黄酮碳苷类化合物芹菜素-8-C-β-D-木糖苷，其结构式如式(I)所示：一种式(I)所示的芹菜素-8-C-β-D-木糖苷的制备方法，所述的制备方法按如下步骤进行：(1)甲醇浸提：将黄毛豆腐柴(PremnafulvaCraib)干燥粉碎，加入甲醇浸提提取后滤除不溶物，所得滤液减压浓缩得到甲醇浸膏。(2)乙酸乙酯萃取：将步骤(1)所得甲醇浸膏分散于水中，再用乙酸乙酯萃取，所得萃取液减压蒸干得到乙酸乙酯浸膏和水相浸膏；(3)一次柱层析：用D101型大孔树脂对步骤(2)所得水相浸膏进行柱层析分离，以25％乙醇、50％乙醇、75％乙醇、90％乙醇为洗脱剂A，进行梯度洗脱，收集含目标化合物的洗脱液A，将所得洗脱液A减压浓缩、挥干得一次柱层析产品；(4)二次柱层析：用200～300目柱层析硅胶继续对步骤(3)所得一次柱层析产品进行柱层析分离，以二氯甲烷/甲醇体积比1/0～1/1的混合液为洗脱剂B，进行梯度洗脱，收集含目标化合物的洗脱液B，将所得洗脱液B减压蒸除溶剂得到二次柱层析产品；(5)三次柱层析：用200～300目柱层析硅胶进一步对步骤(4)中所得二次柱层析产品进行柱层析分离，以二氯甲烷/甲醇体积比40/1～2/1的混合液为洗脱剂C，进行梯度洗脱，收集含目标化合物的洗脱液C，将所得洗脱液C减压蒸除溶剂得到三次柱层析产品；(6)收集含目标化合物：将步骤(5)所得三次柱层析产品用甲醇进行清洗，所得固体产物经干燥后得到所述式(I)所示的芹菜素-8-C-β-D-木糖苷。进一步，步骤(1)中，所述甲醇浸提的操作方法为：将干燥粉碎后的黄毛豆腐柴与甲醇混合，在20～30℃下浸提5～10天，过滤得到甲醇提取液，将所得滤渣重复浸提2～4次，合并每次所得甲醇提取液，减压蒸干，得到甲醇浸膏；所述的甲醇加入量以所述的黄毛豆腐柴的质量计为3～5mL/g。进一步，步骤(2)中，所述乙酸乙酯萃取的操作方法为：将步骤(1)所得甲醇浸膏分散于5～10倍质量的水中，得到悬浮液用等体积的乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯相，减压回收溶剂，得到乙酸乙酯浸膏和水相浸膏。进一步，步骤(3)中，所述的一次柱层析的操作方法为：用D101型大孔树脂对步骤(2)所得水相浸膏进行柱层析分离，分别以25％乙醇、50％乙醇、75％乙醇、90％乙醇为洗脱剂A，进行梯度洗脱，收集含目标化合物的洗脱液A，将所得洗脱液A减压浓缩、挥干得一次柱层析产品。进一步，步骤(4)中，所述梯度洗脱的操作方法为：采用干法上样，以二氯甲烷/甲醇体积比1/0、50/1、30/1、20/1、15/1、10/1、8/1、6/1、4/1、2/1、1/1的混合液为洗脱剂B，进行梯度洗脱，每梯度洗脱1.5个柱体积，收集含目标化合物的洗脱液B，将所得洗脱液B减压蒸除溶剂得二次柱层析产品。进一步，步骤(5)中，所述梯度洗脱的操作方法为：采用干法上样，以二氯甲烷/甲醇体积比40/1、20/1、15/1、10/1、8/1、6/1、4/1、2/1的混合液为洗脱剂C，进行梯度洗脱，收集含目标化合物的洗脱液C，将所得洗脱液C减压蒸除溶剂得三次柱层析产品。进一步，步骤(6)中，所述收集含目标化合物的操作方法为：取出步骤(5)所得三次柱层析产品于离心管中，加入甲醇溶剂，超声、离心，去除上清液，重复洗涤3次，所得固体产物经干燥得到固体产物沉淀物；所述甲醇的加入量以所述三次柱层析产品的体积计为5-10mL/g。再进一步，步骤(6)中，所述的超声频率为40KHz，超声时间为10s。本专利技术所述步骤(3)、(4)、(5)的柱层析过程中，可通过薄层层析(TLC)检测收集含目标化合物(芹菜素-8-C-β-D-木糖苷)的洗脱液。本专利技术所述黄酮碳苷类化合物芹菜素-8-C-β-D-木糖苷在制备抗肿瘤活性药物中具有应用前景。经实验证明，黄酮苷类化合物芹菜素-8-C-β-D-木糖苷与DDP对照组相比较，高浓度时对人原髓细胞白血病HL-60细胞、人乳腺癌Bcap37细胞、人肝癌SMMC7721细胞以及小鼠白血病P388细胞均具有体外增殖抑制作用，且对人原髓细胞白血病HL-60细胞抑制作用最强，这提示该化合物具有潜在的抗肿瘤活性。与现有技术相比，本专利技术的有益效果在于：本专利技术所述黄酮碳苷类化合物芹菜素-8-C-β-D-木糖苷的提取、分离、纯化方法简单，抑制肿瘤细胞活性明确，具有潜在的开发为抗肿瘤药物的价值，该化合物化学结构经过波谱学数据得到确认。(四)附图说明图1为实施例5中DDP、黄酮碳苷类化合物芹菜素-8-C-β-D-木糖苷(I)对四种癌细胞的半致死浓度(IC50)。(五)具体实施方式下面通过具体实施例对本专利技术作进一步的说明，但本专利技术的保护范围并不仅限于此。本专利技术所述黄毛豆腐柴2015年9月购自广西玉林中药材市场。本专利技术所述的制备方法所用仪器如表1所示。实施例1：芹菜素-8-C-β-D-木糖苷的制备(1)甲醇浸提：将干燥粉碎的1000g黄毛豆腐柴加入4L甲醇在常温(20～30℃)下浸提一个星期，过滤、减压浓缩得到甲醇浸膏，滤渣重复浸提4次，第4次滤渣用75％甲醇(甲醇：水4:1)4L进行浸提，合并每次减压浓缩所得的甲醇浸膏，之后滤除不溶物，滤液减压浓缩得到甲醇浸膏60g。(2)乙酸乙酯萃取：将步骤(1)所得甲醇浸膏60g分散于500ml的水中，得到悬浮液，加入等体积的乙酸乙酯低速搅拌15min使其混合均匀，静置过夜使其液面分层，将上层乙酸乙酯萃取液取出，经减压浓缩得乙酸乙酯相浸膏；剩下水相再加入等体积的乙酸乙酯萃取，如此平行3次，合并乙酸乙酯相减压浓缩、挥干得乙酸乙酯本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种新的黄酮碳苷类化合物芹菜素‑8‑C‑β‑D‑木糖苷，其结构式如式(I)所示：

【技术特征摘要】
1.一种新的黄酮碳苷类化合物芹菜素-8-C-β-D-木糖苷，其结构式如式(I)所示：2.一种如权利要求1所述的式(I)所示芹菜素-8-C-β-D-木糖苷的制备方法，其特征在于，所述的制备方法按如下步骤进行：(1)甲醇浸提：将黄毛豆腐柴干燥粉碎，加入甲醇浸提提取后滤除不溶物，所得滤液减压浓缩得到甲醇浸膏。(2)乙酸乙酯萃取：将步骤(1)所得甲醇浸膏分散于水中，再用乙酸乙酯萃取，所得萃取液减压蒸干得到乙酸乙酯浸膏和水相浸膏；(3)一次柱层析：用D101型大孔树脂对步骤(2)所得水相浸膏进行柱层析分离，以25％乙醇、50％乙醇、75％乙醇、90％乙醇为洗脱剂A，进行梯度洗脱，收集含目标化合物的洗脱液A，将所得洗脱液A减压浓缩、挥干得一次柱层析产品；(4)二次柱层析：用200～300目柱层析硅胶继续对步骤(3)所得一次柱层析产品进行柱层析分离，以二氯甲烷/甲醇体积比1/0～1/1的混合液为洗脱剂B，进行梯度洗脱，收集含目标化合物的洗脱液B，将所得洗脱液B减压蒸除溶剂得到二次柱层析产品；(5)三次柱层析：用200～300目柱层析硅胶进一步对步骤(4)中所得二次柱层析产品进行柱层析分离，以二氯甲烷/甲醇体积比40/1～2/1的混合液为洗脱剂C，进行梯度洗脱，收集含目标化合物的洗脱液C，将所得洗脱液C减压蒸除溶剂得到三次柱层析产品；(6)收集含目标化合物：将步骤(5)所得三次柱层析产品用甲醇进行清洗，所得固体产物经干燥后得到所述式(I)所示的芹菜素-8-C-β-D-木糖苷。3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述甲醇浸提的操作方法为：将干燥粉碎后的黄毛豆腐柴与甲醇混合，在20～30℃下浸提5～10天，过滤得到甲醇提取液，将所得滤渣重复浸提2～4次，合并每次所得甲醇提取液，减压蒸干，得到甲醇浸膏；所述的甲醇加入量以所述的黄毛豆腐柴的质量计为3～5mL/g。4.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述乙酸乙酯萃取的操...

【专利技术属性】
技术研发人员：王奎武，张婷婷，
申请(专利权)人：浙江工商大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33