一种杉木组织培养方法技术

本发明专利技术属于苗木种植方法领域，提供了一种杉木组织培养方法，包括：（1）外植体准备；（2）消毒；（3）初代无糖组织培养；（4）无根苗筛选；（5）继代无糖组织培养；（6）生根培养。本发明专利技术针对现有杉木组织培养过程中存在的问题，从碳源的补给、组织培养使用的培养容器等方面入手，研发一种新型的组织培养方法，该方法可加速杉木组织生根、提高生根率、减少疾病的发生。

Tissue culture method for Chinese fir

The invention belongs to the field of seedling cultivation method, provides a fir tissue culture method, including: (1) explant preparation; disinfection; (2) (3) sugar free culture of primary organization; (4) no root screening; (5) following the generation of sugar free tissue culture; rooting culture (6). Aiming at the problems existing in the process of cultivation of Chinese fir from existing organizations, carbon source supply, tissue culture container using aspects of training methods to develop a new type of organization, the method can accelerate the organization, improve the rooting rate of Chinese fir root, reduce the occurrence of disease.

【技术实现步骤摘要】
一种杉木组织培养方法
本专利技术属于苗木种植方法领域，具体地，涉及一种杉木组织培养方法。
技术介绍
杉木为杉科植物，是一种适应性广、材质优良的经济林树种。由于杉木是异花授粉树种，用种子繁殖，个体分化大，难以保持杉木母体的性状。而常规的扦插、压条或嫁接等无性繁殖方法，繁育速度缓慢，难以满足日益增长的市场需求。为此，杉木要在短期内获得大量优良无性系苗木，只有通过植物组织培养方法解决问题。组织培养方法是一种快速无性繁殖方法，选择杉木优良无性系材料，采用组织培养方法，既可以保持母体的优良性状，又可以有效节约生产成本。传统杉木组织培养幼苗主要依靠培养基中的糖作为碳源，极易引起微生物的污染。为了减少微生物的污染，必须使用封闭的、小的培养容器。培养容器小，并且由于培养基中糖的存在，导致叶片表层结构发育差，气孔开闭功能不强，叶片小，叶绿素含量低，最终抑制和降低了幼苗的光合作用能力。与幼苗自然生长差异悬殊的容器内环境，还导致幼苗生理、形态上的一定紊乱，导致部分幼苗生长发育延缓或死亡，幼苗生长细弱，叶片舒展度差，生根不良，引起驯化阶段幼苗较高的死亡率，为此必须使用植物生长调节剂，但是植物生长调节剂的使用又会导致畸形和变异。因此，导致了杉木组织过程中生根缓慢、生根率低、生长速度慢、易生病等问题，一直阻碍着杉木产业化育苗生产进程。
技术实现思路
针对现有方法中的缺陷，本专利技术的目的是提供一种杉木组织培养方法，该方法针对现有杉木组织培养过程中存在的问题，从碳源的补给、组织培养使用的培养容器等方面入手，研发一种新型的组织培养方法，该方法可加速杉木组织生根、提高生根率、减少疾病的发生。根据本专利技术提供的一种杉木组织培养方法，包括如下步骤：(1)外植体准备：选取生长健壮的杉木萌芽条，将其剪切成长5-9cm，直径0.16-0.30cm，消毒后于萌芽条顶部0.6-1.0cm处剪除顶芽，余下部分由上至下修剪成1.0-2.5cm长的茎段作为外植体，每根萌芽条取1-3个茎段作为杉木组织培养的外植体；(2)消毒：将(1)中处理后的外植体浸泡在消毒液中3-5min进行消毒灭菌，浸泡完成后用无菌水冲洗2-3次；(3)初代无糖组织培养：将(2)消毒后的外植体接种至无糖组织培养基中，置于木制外壳的植物培养箱中进行初代培养，所述初代无糖培养基配方：0.25mm的硅藻土粉8-10g/L，6-苄氨基腺嘌呤1-2mg/L，苹果泥90-110mg/L，凹凸棒泥3-7mg/L，玉米浆液7-13mg/L，PH值为5.5-5.7，所述培养的条件为：培养周期10-20天，培养温度20-26℃，光照强度1200-1400Lx，光照时间10-17h/天；(4)无根苗筛选：待(3)中初代培养的外植体生根后，进行生根苗筛选，选择长度为3-4cm的生长健壮的有根苗并用无菌水冲洗，将冲洗干净的有根苗切割成长度为0.5-1.2cm的单苗；(5)继代无糖组织培养：将(4)中的单苗接种至继代无糖培养基中，置于木制外壳的植物培养箱中进行继代培养，所述继代无糖培养基配方：0.25mm的硅藻土粉5-12g/L，a-萘乙酸1-3mg/L，香蕉泥115-120mg/L，凹凸棒泥5-11mg/L，小麦浆液5-11mg/L，PH值为6.1-7.1，所述继代无糖组织培养的条件为：培养周期9-18天，培养温度21-25℃，光照强度1800-2100Lx，光照时间9-15h/天；(6)生根培养：将(5)中所述继代培养苗接种到生根培养基中，进行生根培养，所述生根培养基配方：0.25mm的硅藻土粉6-12g/L，吲哚丁酸0.1-0.5mg/L，萘乙酸0.3-0.5mg/L，小麦浆液6-10mg/L，PH值为5.6-6.0，培养温度为25-30℃，光照强度1700-2000Lx，光照时间12-20h/天。优选地，所述(2)中消毒液为浓度为0.2-0.5％的高锰酸钾溶液。优选地，所述凹凸棒泥的制备方法为：将粉状凹凸棒原料研磨后过80-100目筛，制成凹凸棒粉，加入到水中，搅拌15-25min，所加水的重量为凹凸棒粉重量的41-50％，搅拌15-25min，制得凹凸棒泥。优选地，所述玉米浆液是采用新鲜玉米的胚芽打浆而成的。优选地，所述小麦浆液的制作方法是将小麦用水浸泡后去除小麦皮，打浆制得。优选地，所述光照是采用LED组培灯进行光照。优选地，所述木制外壳的植物培养箱内部为无菌环境。优选地，所述培养箱在使用前经紫外线照射10-20min。与现有方法相比，本专利技术具有如下的有益效果：本专利技术提供的一种杉木组织培养方法，一方面进行碳源的改变，传统的杉木组织培养方法，外植体以糖(如蔗糖、白砂糖、果糖等)作为主要碳源进行异养或兼养生长，增加了微生物的感染。而本专利技术中则用苹果泥、玉米浆、香蕉泥、小麦浆替代糖作为杉木外植体或幼苗生长的碳源，在一定程度上避免了微生物的污染。一方面进行培养基质的改变：在传统的组织培养中，通常使用琼脂作为培养基质，它的透气性差，不利于水分、气体和营养物质的移动和吸收。本专利技术使用硅藻土粉作为培养基质，此基质具有良好的透气性，可以极大地提高小植株的生根率和生根质量，而且与琼脂相比，此无机基质价格相对低廉，节约了培养成本。一方面培养容器的改变，在传统的组织培养中，由于培养基中糖的存在，为了防止污染，只能使用小的培养容器。本专利技术在培养过程中不使用糖及各类有机物质，极大地避免了污染的发生，因此选用木制外壳植物培养箱作为培养容器，可以人工控制光照强度和温度。采用本专利技术的组织培养方法使得生根率提高10-15％，减少了疾病的发生。具体实施方式下面结合具体实施例，进一步阐述本专利技术。应理解，这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。实施例1本实施例提供的一种杉木组织培养方法，包括如下步骤：(1)外植体准备：选取生长健壮的杉木萌芽条，将其剪切成长9cm，直径0.16cm，消毒后于萌芽条顶部1.0cm处剪除顶芽，余下部分由上至下修剪成1.0cm长的茎段作为外植体，每根萌芽条取3个茎段作为杉木组织培养的外植体；(2)消毒：将(1)中处理后的外植体浸泡在消毒液中5min进行消毒灭菌，浸泡完成后用无菌水冲洗2次；(3)初代无糖组织培养：将(2)消毒后的外植体接种至无糖组织培养基中，置于木制外壳的植物培养箱中进行初代培养，所述初代无糖培养基配方：0.25mm的硅藻土粉10g/L，6-苄氨基腺嘌呤1mg/L，苹果泥110mg/L，凹凸棒泥3mg/L，玉米浆液13mg/L，PH值为5.5，所述培养的条件为：培养周期20天，培养温度20℃，光照强度1400Lx，光照时间10h/天；(4)无根苗筛选：待(3)中初代培养的外植体生根后，进行生根苗筛选，选择长度为4cm的生长健壮的有根苗并用无菌水冲洗，将冲洗干净的有根苗切割成长度为0.5cm的单苗；(5)继代无糖组织培养：将(4)中的单苗接种至继代无糖培养基中，置于木制外壳的植物培养箱中进行继代培养，所述继代无糖培养基配方：0.25mm的硅藻土粉12g/L，a-萘乙酸1mg/L，香蕉泥120mg/L，凹凸棒泥5mg/L，小麦浆液11mg/L，PH值为6.1，所述继代无糖组织培养的条件为：培养周期18天，培养温度21℃，光照强度2100Lx，光照时间9h/天；(6)生根培养：将(5)中所述本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种杉木组织培养方法，其特征在于：所述组织培养方法包括如下步骤：（1）外植体准备：选取生长健壮的杉木萌芽条，将其剪切成长5‑9 cm，直径0.16‑0.30 cm，消毒后于萌芽条顶部0.6‑1.0 cm处剪除顶芽，余下部分由上至下修剪成1.0‑2.5 cm长的茎段作为外植体，每根萌芽条取1‑3个茎段作为杉木组织培养的外植体；（2）消毒：将（1）中处理后的外植体浸泡在消毒液中3‑5min进行消毒灭菌，浸泡完成后用无菌水冲洗2‑3次；（3）初代无糖组织培养：将（2）消毒后的外植体接种至无糖组织培养基中，置于木制外壳的植物培养箱中进行初代培养，所述初代无糖培养基配方：0.25mm的硅藻土粉8‑10g/L，6‑苄氨基腺嘌呤1‑2mg/L，苹果泥90‑110mg/L，凹凸棒泥3‑7mg / L，玉米浆液7‑13mg/L，PH值为5.5‑5.7，所述培养的条件为：培养周期10‑20天，培养温度20‑26℃，光照强度1200‑1400Lx，光照时间10‑17h/天；（4）无根苗筛选：待（3）中初代培养的外植体生根后，进行生根苗筛选，选择长度为3‑4cm的生长健壮的有根苗并用无菌水冲洗，将冲洗干净的有根苗切割成长度为0.5‑1.2cm的单苗；（5）继代无糖组织培养：将（4）中的单苗接种至继代无糖培养基中，置于木制外壳的植物培养箱中进行继代培养，所述继代无糖培养基配方：0.25mm的硅藻土粉5‑12g/L，a‑萘乙酸1‑3mg/L，香蕉泥115‑120mg/L，凹凸棒泥5‑11mg / L，小麦浆液5‑11mg/L，PH值为6.1‑7.1，所述继代无糖组织培养的条件为：培养周期9‑18天，培养温度21‑25℃，光照强度1800‑2100Lx，光照时间9‑15h/天；（6）生根培养：将（5）中所述继代培养苗接种到生根培养基中，进行生根培养，所述生根培养基配方：0.25mm的硅藻土粉6‑12g/L，吲哚丁酸0.1‑0.5mg/L，萘乙酸0.3‑0.5mg/L，小麦浆液6‑10mg/L，PH值为5.6‑6.0，培养温度为25‑30℃，光照强度1700‑2000Lx，光照时间12‑20h/天。...

【技术特征摘要】
1.一种杉木组织培养方法，其特征在于：所述组织培养方法包括如下步骤：（1）外植体准备：选取生长健壮的杉木萌芽条，将其剪切成长5-9cm，直径0.16-0.30cm，消毒后于萌芽条顶部0.6-1.0cm处剪除顶芽，余下部分由上至下修剪成1.0-2.5cm长的茎段作为外植体，每根萌芽条取1-3个茎段作为杉木组织培养的外植体；（2）消毒：将（1）中处理后的外植体浸泡在消毒液中3-5min进行消毒灭菌，浸泡完成后用无菌水冲洗2-3次；（3）初代无糖组织培养：将（2）消毒后的外植体接种至无糖组织培养基中，置于木制外壳的植物培养箱中进行初代培养，所述初代无糖培养基配方：0.25mm的硅藻土粉8-10g/L，6-苄氨基腺嘌呤1-2mg/L，苹果泥90-110mg/L，凹凸棒泥3-7mg/L，玉米浆液7-13mg/L，PH值为5.5-5.7，所述培养的条件为：培养周期10-20天，培养温度20-26℃，光照强度1200-1400Lx，光照时间10-17h/天；（4）无根苗筛选：待（3）中初代培养的外植体生根后，进行生根苗筛选，选择长度为3-4cm的生长健壮的有根苗并用无菌水冲洗，将冲洗干净的有根苗切割成长度为0.5-1.2cm的单苗；（5）继代无糖组织培养：将（4）中的单苗接种至继代无糖培养基中，置于木制外壳的植物培养箱中进行继代培养，所述继代无糖培养基配方：0.25mm的硅藻土粉5-12g/L，a-萘乙酸1-3mg/L，香蕉泥115-120mg/L，凹凸棒泥5-11mg/L，小麦浆液5-11mg/L，PH值为6.1...

【专利技术属性】
技术研发人员：汪中奇，
申请(专利权)人：合肥申沃园艺有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽,34