一种金红茵芋的快速繁殖方法技术

本发明专利技术提供了一种金红茵芋的快速繁殖方法，以带腋芽的茎段作为外植体，先进行灭菌处理，然后进行离体培养。初代培养基是MS+ZT0.05～0.5mg/L+IBA0.02～0.05mg/L+GA3 2～10mg/L，诱导率最高达85％；增殖培养基是MS+ZT0.5～2mg/L+KT0.05～1mg/L+IBA0.02～0.2mg/L，培养30d，增殖率最高为3.6，试管苗高度达2.0cm；生根培养基为1/2MS+IBA1.0～2.0mg/L，生根率最高达90％；最后移栽入泥炭、蛭石、珍珠岩和有机肥组成的混合基质中，成活率可达80％以上。本发明专利技术建立的繁殖体系，繁殖后代株性一致，繁育系数高，不受季节气候限制，可周年生产，随时满足生产用苗。

A rapid propagation method of red Skimmia

The present invention provides a rapid propagation method of red Skimmia, stem with axillary bud as explants, the sterilization, and then cultured in vitro. Initial medium is MS+ZT0.05 ~ 0.5mg/L+IBA0.02 ~ 0.05mg/L+GA3 2 ~ 10mg/L, the induction rate of up to 85%; proliferation culture medium is MS+ZT0.5 ~ 2mg/L+KT0.05 ~ 1mg/L+IBA0.02 ~ 0.2mg/L, 30d culture, the highest proliferation rate was 3.6. The plantlet height of 2.0cm; 1/2MS+ medium was IBA1.0 ~ 2.0mg/L rooting, rooting rate of up to 90%; finally transplanted into peat, vermiculite, perlite and organic fertilizer mixed matrix, the survival rate was more than 80%. The breeding system established by the invention has the advantages of consistent plant characteristics, high breeding coefficient, no seasonal climate restriction, and annual production, and can meet the production seedlings at any time.

【技术实现步骤摘要】
一种金红茵芋的快速繁殖方法
本专利技术属于生物学领域，涉及一种植物的繁殖方法，具体来说是一种金红茵芋的快速繁殖方法。
技术介绍
茵芋属(SkimmiaThunb)植物为芸香科常绿花灌木，世界已知7或8种，分布于喜马拉雅山至日本，我国有3或4种，产西南部至南部，野生于山林、溪谷、路旁等处。喜温暖气候和光照充足的地方，也稍耐阴，喜湿润、肥沃壤土，不耐寒，园林中常作林缘种植，也可作盆景。除此之外，茵芋还是一种传统中药，有镇痛、抗炎活性等药效，相关学者在茵芋属的成分、药理、临床应用等方面做了诸多研究。目前茵芋主要依靠籽播、扦插进行繁育。园艺栽培品种金红茵芋(Skimmiajaponica‘rnbella’)，也称鲁贝拉茵芋、金丝香茵，圆锥花序顶生，小花乳白色极芳香，可提取芳香油。浆果，红色，秋冬季节红果，经久不落，深受人们喜爱(图1)，切枝也是插花高级花材，并且种子可榨油。扦插成活率不到20％，后代容易积累病毒，严重影响观赏品质；用种子进行繁殖，后代会出现分离，不能保持母株的优良特性，从播种至开花周期较长；国外进口种苗价格昂贵。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种金红茵芋的快速繁殖方法，所述的这种金红茵芋的快速繁殖方法要解决现有技术中，金红茵芋繁殖慢、籽播、扦插后代不能保持母本优良特性的技术问题。本专利技术提供了一种金红茵芋的快速繁殖方法，包括如下步骤：1)一个将金红茵芋带腋芽茎段做为外植体，进行表面灭菌的步骤，先用自来水流水冲洗1h～3h，后放置于超净工作台上，用质量百分比浓度为60％～80％的乙醇浸泡20s～40s，再用质量百分比浓度为0.1％～0.2％的升汞灭菌8min～12min，最后用无菌水冲洗3～6次；2)一个将金红茵芋无菌外植体进行初代诱导培养的步骤，将步骤a)中经灭菌的外植体转入初代诱导培养基中培养30d获得试管苗，所述的初代诱导培养基为MS+ZT0.05～0.5mg/L+IBA0.02～0.05mg/L+GA32～10mg/L；3)一个将金红茵芋试管苗进行增殖培养的步骤，将步骤2)诱导出的试管苗，待其逐渐长大，挑选0.5cm高度、颜色嫩绿的试管苗，转入增殖培养基，所述的增殖培养基是MS+ZT0.5～2mg/L+KT0.05～1mg/L+IBA0.02～0.2mg/L，培养30d；4)一个将金红茵芋外植体进行生根培养的步骤，将增殖培养的试管苗转入生根培养基，生根培养基为1/2MS+IBA1.0～2.0mg/L，培养30d；5)待试管苗的根系长至0.4～0.6cm时，选择根系发达、生长健壮的无菌苗，室内开瓶炼苗3d，移栽入混合基质中，温室中驯化45d后，移栽室外，给予肥水管理即可。进一步的，升汞浓度可以为0.1％～0.2％区间的任一浓度；灭菌时间可以为8min～12min区间的任一时间。其中0.15％升汞浸泡10min为最佳消毒液处理方式。进一步的，初代培养基中，ZT可以为0.05～0.5mg/L区间的任一浓度；IBA可以为0.02～0.05mg/L区间的任一浓度；GA3可以为2～10mg/L区间的任一浓度。其中最佳初代培养基为MS+ZT0.2mg/L+IBA0.04mg/L+GA30.5mg/L，诱导率最高达85％。进一步的，增殖培养基中，ZT可以为0.5～2mg/L区间的任一浓度；KT可以为0.05～1mg/L区间的任一浓度；IBA可以为0.02～0.2mg/L区间的任一浓度。其中最佳增殖培养基是MS+ZT1.0mg/L+KT0.5mg/L+IBA0.1mg/L，培养30d，增殖率最高为3.6，试管苗高度达2.0cm。进一步的，生根培养基中，IBA可以为1.0～2.0mg/L区间的任一浓度。其中最佳生根培养基为1/2MS+IBA1.0mg/L，生根率最高达90％。进一步的，混合基质由泥炭:蛭石:珍珠岩:有机肥组成。其中最佳配比为6:2:1:1(V/V)，移栽成活率可达80％以上。本专利技术探索了组织培养方式繁殖金红茵芋，历时两年探索，建立了完善的生产技术体系。本专利技术和已有技术相比，其技术效果是积极和明显的。本专利技术实现了以下技术指标：(1)繁殖系数2.5～3.6；(2)生根率85％以上；(3)移栽成活率75％以上。(4)无变异植株。目前已经试验生产了金红茵芋5000株，株性一致。本专利技术建立的繁殖体系，繁育系数高，不受季节气候限制，可周年生产，随时满足生产用苗。附图说明图1是金红茵芋冬季植株的照片。图2是金红茵芋初代培养的照片。图3是金红茵芋增殖培养的照片。图4是金红茵芋增殖培养的照片。图5是金红茵芋生根种苗的照片。图6是金红茵芋穴盘移栽的照片。具体实施方式试验材料：金红茵芋，健壮无病虫害植株，取带腋芽茎段做外植体，进行组织培养。培养条件：除特别说明外，无菌苗于光照条件下培养，光照强度为1500lx～2500lx，光周期10h/d～14h/d，温度23℃～26℃。各种培养基的pH调为5.6～5.9，蔗糖3％～5％，琼脂0.6～0.8％，分装后在高压灭菌锅中121℃条件下保持16min～20min。数据统计：统计数据时，每种处理调查20个，重复3次，统计诱导率、芽增殖率、生根率和移栽成活率。采用Excel2007和SPSS18.0软件对数据进行统计分析。采用单因素方差分析(one-wayANOVA)和Duncan法进行多重比较(α＝0.05)。诱导率＝(出芽外植体数/接种数)×100％；增殖系数＝增殖株数/接种数；生根率＝(生根株数/接种数)×100％；移栽成活率＝(成活数/移栽数)×100％。实施例1表面灭菌1.1取样3～5月份，晴朗午后取样，去枝叶，将茎段剪成2cm长，每节带一个腋芽或顶芽。用自来水流水冲洗1h～2h，于超净工作台上，先用60％～80％的乙醇浸泡30s～60s，再用不同灭菌剂浸泡不同时间，最后用无菌水冲洗5～6次。筛选最佳灭菌剂和灭菌时间。1.2不同灭菌时间对外植体存活率的影响设定0.15％(质量体积比，下同)升汞5个不同灭菌时间6min、8min、10min、12min、15min，比较对外植体成活率的影响，重复3次。存活率＝存活数/接种数×100％。结果显示，使用浓度为0.15％的升汞灭菌，灭菌时间为6min时，外植体全部污染或死亡；12min时虽然有存活的无菌外植体，但由于灭菌时间过长，存活率极低仅为5％。存活率最高的灭菌时间是10min，与其它处理相比，显著提高到15％(表1)，筛选最佳灭菌时间为10min。表1升汞的不同灭菌时间对外植体存活率的影响*表中数据为平均值±标准误差(n＝3)，同列数字后不同的字母表示0.05水平差异显著性(P﹤0.05)，以下同。1.3不同灭菌剂对外植体存活率的影响用升汞和次氯酸钠配制6种灭菌剂，分别为0.10％升汞、0.15％升汞、0.20％升汞、5％次氯酸钠溶液、10％次氯酸钠溶液和15％次氯酸钠溶液。灭菌时间均为10min，重复3次，存活率计算同上。表2不同灭菌剂对外植体存活率的影响结果显示，当升汞浓度为0.10％时，外植体污染严重没有得到无菌苗；而当升汞浓度为0.20％时，外植体又受消毒液毒害全部死亡。与升汞处理效果比较，次氯酸钠溶液的灭菌效果显著降低(表2)，最高仅为5％。筛选0.15％升汞为最佳灭菌剂，外植体存活率最高为15％本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种金红茵芋的快速繁殖方法，其特征在于：包括如下步骤：1)一个将金红茵芋带腋芽茎段做为外植体，进行表面灭菌的步骤，先用自来水流水冲洗1h～3h，后放置于超净工作台上，用质量百分比浓度为60％～80％的乙醇浸泡20s～40s，再用质量百分比浓度为0.1％～0.2％的升汞灭菌8min～12min，最后用无菌水冲洗3～6次；2)一个将金红茵芋无菌外植体进行初代诱导培养的步骤，将步骤a)中经灭菌的外植体转入初代诱导培养基中培养30d获得试管苗，所述的初代诱导培养基为MS+ZT0.05～0.5mg/L+IBA0.02～0.05mg/L+GA32～10mg/L；3)一个将金红茵芋试管苗进行增殖培养的步骤，将步骤2)诱导出的试管苗，待其逐渐长大，挑选0.5cm高度、颜色嫩绿的试管苗，转入增殖培养基，所述的增殖培养基是MS+ZT0.5～2mg/L+KT0.05～1mg/L+IBA0.02～0.2mg/L，培养30d；4)一个将金红茵芋外植体进行生根培养的步骤，将增殖培养的试管苗转入生根培养基，生根培养基为1/2MS+IBA1.0～2.0mg/L，培养30d；5)待试管苗的根系长至0.4～0.6cm时，选择根系发达、生长健壮的无菌苗，室内开瓶炼苗3d，移栽入混合基质中，温室中驯化45d后，移栽室外，给予肥水管理即可。...

【技术特征摘要】
1.一种金红茵芋的快速繁殖方法，其特征在于：包括如下步骤：1)一个将金红茵芋带腋芽茎段做为外植体，进行表面灭菌的步骤，先用自来水流水冲洗1h～3h，后放置于超净工作台上，用质量百分比浓度为60％～80％的乙醇浸泡20s～40s，再用质量百分比浓度为0.1％～0.2％的升汞灭菌8min～12min，最后用无菌水冲洗3～6次；2)一个将金红茵芋无菌外植体进行初代诱导培养的步骤，将步骤a)中经灭菌的外植体转入初代诱导培养基中培养30d获得试管苗，所述的初代诱导培养基为MS+ZT0.05～0.5mg/L+IBA0.02～0.05mg/L+GA32～10mg/L；3)一个将金红茵芋试管苗进行增殖培养的步骤，将步骤2)诱导出的试管苗，待其逐渐长大，挑选0.5cm高度、颜色嫩绿的试管苗，转入增殖培养基，所述的增殖培养基是MS+ZT0.5～2mg/L+KT0.05～1mg/L+IBA0.02～0.2mg/L，培养30d；4)一个将金红茵芋外植体进行生根培养的步骤，将增殖培养的试管苗转入生根培养基，生根...

【专利技术属性】
技术研发人员：吕秀立，方腾，郭小芳，付瑞，王铖，边黎明，
申请(专利权)人：上海市园林科学规划研究院，
类型：发明
国别省市：上海,31