果蔬高效拮抗菌素保鲜剂及制备方法技术

本发明专利技术涉及一种果蔬高效防拮抗菌素防霉保鲜剂及其制备方法，步骤如下：⑴由苏云金芽孢杆菌CICC 23702产生几丁质酶：⑵角质酶、纤维素酶由从葡萄中分离的灰霉诱导产生；⑵由从葡萄中分离的灰霉诱导产生角质酶、纤维素酶；⑶防霉保鲜剂配方：100份无菌水中加入海藻糖1‑3份、甘油4‑5份、环氧大豆油3‑4份和壳聚糖0.2‑0.4份，5‑10份的几丁质酶、5‑8份的角质酶、8‑10份的纤维素酶；⑷使用前抗菌酶复性。本发明专利技术的保鲜剂生产后形成干燥的粉末，非常容易保藏，常温保存即可，不需要特殊条件，使用时直接喷洒至葡萄表面，延长果蔬尤其是葡萄的保存期限。

Fruits and vegetables high Xiaojie antibiotic preservative and preparation method thereof

The invention relates to a high-efficiency anti mildew preservation of fruits and vegetables antagonistic antibiotic agent and a preparation method thereof, the steps are as follows: 1 the chitinase from Bacillus thuringiensis CICC Su Yun 23702: the cutinase, cellulase produced by separation from the grape gray mold of the induction; induced by isolated from grape gray mold to produce cutinase, the formula of cellulase; mildew preservation agent: 100 sterile water by adding trehalose 1 3, glycerol 4 5 copies, 4 copies of the 3 epoxy soybean oil and chitosan 0.2 0.4 copies, 10 copies of the 5 fiber chitinase, 5 cutinase, 8 copies of 10 copies of the 8 cellulase; the use of antibacterial enzyme renaturation. The invention of the preservative production after the formation of dry powder, very easy to collect, store at room temperature, without the need for special conditions, the use of direct spray to the surface of grape, prolong the retention period of grape fruits and vegetables especially.

【技术实现步骤摘要】
果蔬高效拮抗菌素保鲜剂及制备方法
本专利技术属于果蔬采后保鲜生物防治
，尤其是一种果蔬高生防拮抗菌素防霉保鲜剂及其制备方法。
技术介绍
现有技术中有诸多的灰霉菌(Botrytiscinerea)染病实例，而且灰霉菌在诸多水果中都能繁殖和生长，产生病害。现有技术中通常是用化学药剂来抑制灰霉菌的生长，起主要确定体系在一下几个方面：1、抗药性危害：长期使用化学药剂导致病菌产生的抗药性，降低了其防病效果，同时残毒量增加而威胁着人类的健康。2、残留性危害：随着人们食品安全意识的加强，国内外对水果的农药残留要求也越来越严格，不使用化肥农药的绿色水果成为市场热门。3、环境危害：频繁反复的是用化学防霉剂对环境造成不可逆的伤害，容易造成环境中的灰霉菌变异等生物灾害，同时也会竞争抑制环境中的其他有益菌的生长。我国鲜食葡萄保鲜防腐技术越来越需要更加安全、环保的新技术，熏硫等化学剂防腐技术的被淘汰成为大势所趋，及时开展新型绿色防腐保鲜剂的研究具有十分重大的意义。
技术实现思路
本专利技术是为了克服现有技术的不足之处，提供一种防霉效果好，复性效率高的果蔬高生防拮抗菌素防霉保鲜剂及其制备方法。本专利技术实现目的的技术方案如下：一种果蔬高生防拮抗菌素防霉保鲜剂的制备方法，具体成分如下：(1)由苏云金芽孢杆菌CICC23702产生几丁质酶：采用磁化水代替蒸馏水制备培养基，培养基中加0.8～1.0％的Mg2+、0.3％～0.5％的Mn2+以及0.2～0.3wt％的几丁质配成高产几丁质酶的诱导培养液；在红光条件下，加入30～40mL的增殖诱导培养基培养4d，复合诱导苏云金芽孢杆菌高产几丁质酶，培养液采用超声频率为15KHz-20KHz的超声波进行细胞破碎并纯化以敲除几丁质酶杂基，然后5000r/min低温离心20min后收集上清液，调节pH5.5～5.8至该几丁质酶等电点，沉淀提取分离；(2)由从葡萄中分离的灰霉诱导产生角质酶、纤维素酶诱导条件：将108spore/mL灰霉菌孢子加5mL霉菌增殖培养基中，其中培养基中加入0.8％～1.2％的角质酶和2.0％～2.5％的纤维素酶以诱导霉菌高产角质酶和纤维素酶，28℃培养4d后，5000r/min冷冻低温离心10min～20min，以除去菌体和培养基残渣，取上清液调节上清液pH6.2-6.9至两酶等电点，沉淀提取生物活性物质角质酶和纤维素酶；(3)防霉保鲜剂配方：重量份数100份无菌水中加入海藻糖1～3份、甘油4～5份、环氧大豆油3～4份和壳聚糖0.2～0.4份，并500～600r/min搅拌1-1.5小时，使其完全溶解，5～10份的几丁质酶、5～8份的角质酶、8～10份的纤维素酶，500～600r/min搅拌20～30分钟混匀，所制备拮抗菌素防霉剂置于0℃～4℃条件下保存；(4)保鲜剂使用前首先进行抗菌酶复性复性加入复性剂，复性剂为：将0.5～0.6份Mg2+、0.3～0.5份的Mn2+，并用10份的0.1mol/L磷酸缓冲液，混匀，调节pH7.2～7.9。而且，所述步骤⑴的诱导培养液成分为：蛋白胨5.0g，牛肉浸膏3.0g，NaCl5.0g，蒸馏水1L，pH7.0，121℃灭菌20min备用；而且，所述霉菌增殖培养基配方：马铃薯200g，葡萄糖20g，蒸馏水1000mL，121℃灭菌20min。而且，100重量份数复性剂可以复性1-10重量份保鲜剂。本专利技术的优点和积极效果如下：本专利技术采用高产几丁质酶的菌种以及高效生产培养基来生产几丁质酶，能够大幅提高产率。本专利技术的保鲜剂生产后形成干燥的粉末，非常容易保藏，常温保存即可，不需要特殊条件，使用时直接喷洒至葡萄表面，延长果蔬尤其是葡萄的保存期限。本专利技术通过在培养基中增加诱导离子，同时辅以红光诱导，能够使几丁质的产量增加20％左右。经过高频超声的震荡，不仅能劈碎细胞，还能将几丁质上的杂基团震荡下去，提高几丁质酶的活性，保证生物保鲜剂的有效性。具体实施方式下面通过具体实施例对本专利技术作进一步详述，以下实施例只是描述性的，不是限定性的，不能以此限定本专利技术的保护范围。本专利技术以下没有提及的均为重量百分比，如果涉及液体为体积百分比。一种果蔬高生防拮抗菌素防霉保鲜剂及其制备方法，具体成分如下：本保鲜剂主要作用成分为几丁质酶、角质酶、细胞壁降解酶，具体制备过程如下⑴几丁质酶由产几丁质酶的苏云金芽孢杆菌(CICC23702)产生的，其为高生防拮抗菌素的主要成分。该菌株采用磁化水代替蒸馏水制备培养基(培养基成分：蛋白胨5.0g，牛肉浸取物3.0g，NaCl5.0g，蒸馏水1000mL，pH7.0)，培养基中加0.8～1.0％的Mg2+、0.3％～0.5％的Mn2+以及0.2％～0.3％的几丁质配成高产几丁质酶的诱导培养液；红光条件下加入30～40mL的增殖诱导培养基培养4d，复合诱导苏云金芽孢杆菌高产几丁质酶，培养液采用超声频率为15KHz-20KHz的超声波细胞破碎后5000r/min低温离心20min后收集上清液，调节pH5.5～5.8至该几丁质酶等电点，沉淀提取分离。其中，菌种苏云金芽孢杆菌(CICC23702)于2016年5月30日购买于中国食品发酵工业研究院，发票号：17576933。诱导培养液：蛋白胨5.0g，牛肉浸膏3.0g，NaCl5.0g，蒸馏水1L，pH7.0，121℃灭菌20min备用。⑵角质酶、纤维素酶由从葡萄中分离的灰霉诱导产生诱导条件：将108spore/mL灰霉菌孢子加5mL霉菌增殖培养基中，其中培养基中加入0.8％～1.2％的角质酶和2.0％～2.5％的纤维素酶以诱导灰霉菌高产角质酶和纤维素酶，28℃培养4d后，5000r/min冷冻低温离心10min～20min，以除去菌体和培养基残渣，取上清液调节上清液pH6.2-6.9至两酶等电点，沉淀提取生物活性物质角质酶和纤维素酶。本步骤中使用的灰霉菌(孢子)又叫做灰葡萄孢霉，分离于葡萄。英文：Botrytiscinerea公开文献：Botrytis：BiologyPathologyandControl,EditedbyY.Elad,B.Williamson,P.TudzynskiandN.Delen。霉菌增殖培养基配方：马铃薯200g，葡萄糖20g，蒸馏水1000mL，121℃灭菌20min。⑶防霉保鲜剂配方：重量份数100份无菌水中加入海藻糖1～3份、甘油4～5份、环氧大豆油3～4份和壳聚糖0.2～0.4份，并500～600r/min搅拌1-1.5小时，使其完全溶解，5～10份的几丁质酶、5～8份的角质酶、8～10份的纤维素酶，500～600r/min搅拌20～30分钟混匀，所制备拮抗菌素防霉剂置于0℃～4℃条件下保存；⑷保鲜剂使用前首先进行抗菌酶复性复性剂为：将0.5～0.6份Mg2+、0.3～0.5份的Mn2+，并用10份的0.1mol/L磷酸缓冲液，充分混匀，调节pH7.2～7.9，以提升酶活性；使用时活化保鲜剂后喷施于果蔬表面，自然晾干后于适宜温度、湿度和气体条件下贮藏。100重量份数复性剂可以复性1-10重量份保鲜剂，可以根据需要自己选择。相关实验数据说明：本申请防霉保鲜剂喷洒于葡萄表面，能够有效防止葡萄表面霉菌的生长。复性后100份水中加入5份保鲜剂重量份，喷洒与葡萄表面本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种果蔬高生防拮抗菌素防霉保鲜剂的制备方法，其特征在于：具体成分如下：⑴由苏云金芽孢杆菌CICC 23702产生几丁质酶：采用磁化水代替蒸馏水制备培养基，培养基中加0.8～1.0％的Mg

【技术特征摘要】
1.一种果蔬高生防拮抗菌素防霉保鲜剂的制备方法，其特征在于：具体成分如下：⑴由苏云金芽孢杆菌CICC23702产生几丁质酶：采用磁化水代替蒸馏水制备培养基，培养基中加0.8～1.0％的Mg2+、0.3％～0.5％的Mn2+以及0.2～0.3wt％的几丁质配成高产几丁质酶的诱导培养液；在红光条件下，加入30～40mL的增殖诱导培养基培养4d，复合诱导苏云金芽孢杆菌高产几丁质酶，培养液采用超声频率为15KHz-20KHz的超声波进行细胞破碎并纯化以敲除几丁质酶杂基，然后5000r/min低温离心20min后收集上清液，调节pH5.5～5.8至该几丁质酶等电点，沉淀提取分离；⑵由从葡萄中分离的灰霉诱导产生角质酶、纤维素酶诱导条件：将108spore/mL灰霉菌孢子加5mL霉菌增殖培养基中，其中培养基中加入0.8％～1.2％的角质酶和2.0％～2.5％的纤维素酶以诱导霉菌高产角质酶和纤维素酶，28℃培养4d后，5000r/min冷冻低温离心10min～20min，以除去菌体和培养基残渣，取上清液调节上清液pH6.2-6.9至两酶等电点，沉淀提取生物活性物质角质酶和纤维素酶；⑶防霉保鲜剂配方：重量份数...

【专利技术属性】
技术研发人员：李丽梅，刘霞，乔丽萍，杨维巧，
申请(专利权)人：天津捷盛东辉保鲜科技有限公司，
类型：发明
国别省市：天津,12