一种亚临界水提取灰树花多糖的方法技术

本发明专利技术公开的一种亚临界水提取灰树花多糖的方法，包括烘干、粉碎、亚临界萃取、粗滤、保温、离心、浓缩、纯化、脱色、沉淀、干燥、再洗涤、干燥、二次提取等步骤，利用亚临界水具有良好的渗透与溶解能力，使细胞壁多糖与亚临界水充分接触和溶出，以水浴法浓缩，并结合Sevag法，对灰树花多糖进行纯化，同时回收一次离心沉淀物，用于灰树花多糖在提取，不仅提高了灰树花多糖的提取量，也大大降低了原料浪费，与现有其他提取方法相比，本发明专利技术的设备成本和运行成本都相对较低，灰树花多糖的提取效率和纯度都有显著提高。

Method for extracting polysaccharide of Grifola frondosa by subcritical water

A method of the invention discloses subcritical water extraction of Polysaccharide from Grifola frondosa, including drying, crushing, extraction, subcritical coarse filtration, heat preservation, centrifugation, concentration, purification, decolorization, precipitation, drying, washing, drying, two times extraction, using subcritical water has good permeability and solubility. So, the cell wall polysaccharides and subcritical water full contact and dissolution, the bath concentration, and combined with the Sevag method of grifolan were purified and recovered a centrifugal precipitate for grifolan in extraction, not only improves the extraction rate of Polysaccharide from Grifola frondosa, also greatly to reduce the waste of raw materials, compared with other existing extraction methods, equipment cost and operation cost of the invention are relatively low, the extraction efficiency and purity of grifolan were increased.

【技术实现步骤摘要】
一种亚临界水提取灰树花多糖的方法
本专利技术涉及灰树花多糖提取工艺，特别是一种亚临界水提取灰树花多糖的方法。
技术介绍
灰树花(舞茸)多糖是灰树花中的一种提取物，由葡聚糖、葡萄糖、木糖、岩藻糖、木糖、甘露糖、丰乳糖及少量蛋白质的异聚糖复合物组成。灰树花多糖中含有一种蛋白多糖，中文名叫舞茸地复仙（舞茸D-fraction）它的蛋白和多糖的比例是7：3平均分子量是100万。多糖部分由具有β-(1-3)侧链的β-(1-6)葡聚糖和具有β-(1-6)侧链的β-(1-3)葡聚糖组成。多糖成分中只有这种舞茸地复仙最有抗癌防癌的作用。近年来，研究人员采用酶解提取法、超声波提取法、微波提取法和亚临界水萃取法等新兴技术，都在一定程度上提高了灰树花多糖的提取率。酶解提取法有着多糖提取率高、反应条件温和、对多糖结构破坏小的优点，但由于酶的价格较贵，生产成本相对较高，不适合应用于大批量的工业生产。超声波提取法和微波提取法可以提高多糖的提取率，缩短提取时间，但有时会造成多糖提取物的组分更加复杂，给后续的分离纯化工序带来一定的难度。
技术实现思路
针对上述问题，本专利技术公开了一种亚临界水提取灰树花多糖的方法。为解决以上技术问题，本专利技术提供的技术方案是:一种亚临界水提取灰树花多糖的方法，包括以下步骤：（1）烘干：取灰树花子实体，对其进行2次烘干，第一次烘干温度控制在70~80℃，烘干时长为5~8min，去除灰树花子实体中大部分水分，第二次烘干温度控制在55~65℃，烘干时长为10~20min，进一步缓慢去除灰树花子实体中剩余水分，直至灰树花子实体内水分降至5%~8%，得到灰树花子实体干品；（2）粉碎：使用高速万能粉碎机对灰树花子实体干品进行粉碎处理，过45~90μm筛，得到灰树花子实体干粉；（3）亚临界萃取：将灰树花子实体干粉和去离子水，按照料液比1:15~23Kg/L，投入亚临界萃取釜，调整临界压力至14~21Mpa，液体温度100~155℃，提取20~60min，得到灰树花子实体萃取液；（4）粗滤、保温：萃取完成后，打开萃取罐出液阀，将灰树花子实体萃取液过滤，并送入保温罐中保温，保温温度设定50~60℃；（5）离心：将步骤（4）中粗滤并保温的灰树花子实体萃取液送入离心机中，并以3000~5000r/min离心10~15分钟，得上清液和一次离心沉淀物；（6）浓缩：将上清液投入恒温水浴锅进行蒸发浓缩，恒温水浴锅的温度控制在55~70℃，直至上清液体积浓缩至原先的1/2，得到浓缩上清液；（7）纯化：以Sevag法将正丁醇、氯仿混合溶液与浓缩上清液以5:1的体积比进行去蛋白3次，得纯化上清液；（8）脱色：对纯化上清液进行水浴脱色，水浴温度控制在45~50℃，时长为4h，前2h以过氧化氢氧化法脱色，后2h以活性炭吸附法脱色；（9）沉淀、干燥：向步骤（7）中得到的脱色后的纯化上清液中加入无水乙醇，静置10~12h，随后以5000r/min离心10~15分钟，得沉淀物，沉淀物即为灰树花多糖半成品；（10）再洗涤、干燥：以无水乙醇对灰树花多糖半成品进行洗涤，洗涤2~3次，取沉淀物，干燥，得到灰树花多糖成品；（11）二次提取：取一次离心沉淀物与去离子水以1:30~40的料液比（g/ml）充分混合，进行超声波破壁，得到灰树花子实体二次溶液，待灰树花子实体二次溶液累积足够，送入亚临界萃取釜，随后重复步骤（3）~步骤（10），得到灰树花多糖成品和二次离心沉淀物，二次离心沉淀物不再用于灰树花多糖的多次提取。如权利要求权利要求1所述的一种亚临界水提取灰树花多糖的方法，其特征在于，所述正丁醇、氯仿混合溶液中，正丁醇和氯仿的体积比为1:4或1:5。如权利要求权利要求1所述的一种亚临界水提取灰树花多糖的方法，其特征在于，步骤（11）中进行超声波破壁时，超声波功率设定于50~75W，破壁时长和温度分别为10~15min和45~55℃。如权利要求权利要求1所述的一种亚临界水提取灰树花多糖的方法，其特征在于，步骤（6）中所述的恒温水浴锅为中温循环水浴锅，其型号为C3000，购置于西安夏溪电子科技有限公司。本专利技术的有益效果为：本专利技术公开的一种亚临界水提取灰树花多糖的方法，包括烘干、粉碎、亚临界萃取、粗滤、保温、离心、浓缩、纯化、脱色、沉淀、干燥、再洗涤、干燥、二次提取等步骤，利用亚临界水具有良好的渗透与溶解能力，使细胞壁多糖与亚临界水充分接触和溶出，以水浴法浓缩，并结合Sevag法，对灰树花多糖进行纯化，同时回收一次离心沉淀物，用于灰树花多糖在提取，不仅提高了灰树花多糖的提取量，也大大降低了原料浪费，与现有其他提取方法相比，本专利技术的设备成本和运行成本都相对较低，灰树花多糖的提取效率和纯度都有显著提高。具体实施方式实施例一一种亚临界水提取灰树花多糖的方法，包括以下步骤：（1）烘干：取灰树花子实体，对其进行2次烘干，第一次烘干温度控制在75℃，烘干时长为6min，去除灰树花子实体中大部分水分，第二次烘干温度控制在57℃，烘干时长为13min，进一步缓慢去除灰树花子实体中剩余水分，直至灰树花子实体内水分降至5%~8%，得到灰树花子实体干品；（2）粉碎：使用高速万能粉碎机对灰树花子实体干品进行粉碎处理，过55筛，得到灰树花子实体干粉；（3）亚临界萃取：将灰树花子实体干粉和去离子水，按照料液比1:22Kg/L，投入亚临界萃取釜，调整临界压力至18Mpa，液体温度122℃，提取35min，得到灰树花子实体萃取液；（4）粗滤、保温：萃取完成后，打开萃取罐出液阀，将灰树花子实体萃取液过滤，并送入保温罐中保温，保温温度设定54℃；（5）离心：将步骤（4）中粗滤并保温的灰树花子实体萃取液送入离心机中，并以4200r/min离心10~15分钟，得上清液和一次离心沉淀物；（6）浓缩：将上清液投入恒温水浴锅进行蒸发浓缩，恒温水浴锅的温度控制在62℃，直至上清液体积浓缩至原先的1/2，得到浓缩上清液；（7）纯化：以Sevag法将正丁醇、氯仿混合溶液与浓缩上清液以5:1的体积比进行去蛋白3次，得纯化上清液；（8）脱色：对纯化上清液进行水浴脱色，水浴温度控制在47℃，时长为4h，前2h以过氧化氢氧化法脱色，后2h以活性炭吸附法脱色；（9）沉淀、干燥：向步骤（7）中得到的脱色后的纯化上清液中加入无水乙醇，静置11h，随后以5000r/min离心12分钟，得沉淀物，沉淀物即为灰树花多糖半成品；（10）再洗涤、干燥：以无水乙醇对灰树花多糖半成品进行洗涤，洗涤2次，取沉淀物，干燥，得到灰树花多糖成品；（11）二次提取：取一次离心沉淀物与去离子水以1:36的料液比（g/ml）充分混合，进行超声波破壁，得到灰树花子实体二次溶液，待灰树花子实体二次溶液累积足够，送入亚临界萃取釜，随后重复步骤（3）~步骤（10），得到灰树花多糖成品和二次离心沉淀物，二次离心沉淀物不再用于灰树花多糖的多次提取。如权利要求权利要求1所述的一种亚临界水提取灰树花多糖的方法，其特征在于，所述正丁醇、氯仿混合溶液中，正丁醇和氯仿的体积比为1:4。如权利要求权利要求1所述的一种亚临界水提取灰树花多糖的方法，其特征在于，步骤（11）中进行超声波破壁时，超声波功率设定于65W，破壁时长和温度分别为12min和52℃。如权利要求权利要求1所述的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种亚临界水提取灰树花多糖的方法，包括以下步骤：（1）烘干：取灰树花子实体，对其进行2次烘干，第一次烘干温度控制在70~80℃，烘干时长为5~8min，去除灰树花子实体中大部分水分，第二次烘干温度控制在55~65℃，烘干时长为10~20min，进一步缓慢去除灰树花子实体中剩余水分，直至灰树花子实体内水分降至5%~8%，得到灰树花子实体干品；（2）粉碎：使用高速万能粉碎机对灰树花子实体干品进行粉碎处理，过45~90μm筛，得到灰树花子实体干粉；（3）亚临界萃取：将灰树花子实体干粉和去离子水，按照料液比1:15~23 Kg/L，投入亚临界萃取釜，调整临界压力至14~21Mpa，液体温度100~155℃，提取20~60min，得到灰树花子实体萃取液；（4）粗滤、保温：萃取完成后，打开萃取罐出液阀，将灰树花子实体萃取液过滤，并送入保温罐中保温，保温温度设定50~60℃；（5）离心：将步骤（4）中粗滤并保温的灰树花子实体萃取液送入离心机中，并以3000~5000r/min离心10~15分钟，得上清液和一次离心沉淀物；（6）浓缩：将上清液投入恒温水浴锅进行蒸发浓缩，恒温水浴锅的温度控制在55~70℃，直至上清液体积浓缩至原先的1/2，得到浓缩上清液；（7）纯化：以Sevag法将正丁醇、氯仿混合溶液与浓缩上清液以5:1的体积比进行去蛋白3次，得纯化上清液；（8）脱色：对纯化上清液进行水浴脱色，水浴温度控制在45~50℃，时长为4h，前2h以过氧化氢氧化法脱色，后2h以活性炭吸附法脱色；（9）沉淀、干燥：向步骤（7）中得到的脱色后的纯化上清液中加入无水乙醇，静置10~12h，随后以5000r/min离心10~15分钟，得沉淀物，沉淀物即为灰树花多糖半成品；（10）再洗涤、干燥：以无水乙醇对灰树花多糖半成品进行洗涤，洗涤2~3次，取沉淀物，干燥，得到灰树花多糖成品；（11）二次提取：取一次离心沉淀物与去离子水以1:30~40的料液比（g/ml）充分混合，进行超声波破壁，得到灰树花子实体二次溶液，待灰树花子实体二次溶液累积足够，送入亚临界萃取釜，随后重复步骤（3）~步骤（10），得到灰树花多糖成品和二次离心沉淀物，二次离心沉淀物不再用于灰树花多糖的多次提取。...

【技术特征摘要】
1.一种亚临界水提取灰树花多糖的方法，包括以下步骤：（1）烘干：取灰树花子实体，对其进行2次烘干，第一次烘干温度控制在70~80℃，烘干时长为5~8min，去除灰树花子实体中大部分水分，第二次烘干温度控制在55~65℃，烘干时长为10~20min，进一步缓慢去除灰树花子实体中剩余水分，直至灰树花子实体内水分降至5%~8%，得到灰树花子实体干品；（2）粉碎：使用高速万能粉碎机对灰树花子实体干品进行粉碎处理，过45~90μm筛，得到灰树花子实体干粉；（3）亚临界萃取：将灰树花子实体干粉和去离子水，按照料液比1:15~23Kg/L，投入亚临界萃取釜，调整临界压力至14~21Mpa，液体温度100~155℃，提取20~60min，得到灰树花子实体萃取液；（4）粗滤、保温：萃取完成后，打开萃取罐出液阀，将灰树花子实体萃取液过滤，并送入保温罐中保温，保温温度设定50~60℃；（5）离心：将步骤（4）中粗滤并保温的灰树花子实体萃取液送入离心机中，并以3000~5000r/min离心10~15分钟，得上清液和一次离心沉淀物；（6）浓缩：将上清液投入恒温水浴锅进行蒸发浓缩，恒温水浴锅的温度控制在55~70℃，直至上清液体积浓缩至原先的1/2，得到浓缩上清液；（7）纯化：以Sevag法将正丁醇、氯仿混合溶液与浓缩上清液以5:1的体积比进行去蛋白3次，得纯化上清液；（8）脱色：对...

【专利技术属性】
技术研发人员：邵兴军，毛日文，朱惠芬，仲延龙，
申请(专利权)人：江苏江大源生态生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32