一种蜂胶提取物中总黄酮含量的拉曼测定方法技术

本发明专利技术公开了一种蜂胶提取物中总黄酮含量的拉曼测定方法，包括：制备了针对蜂胶中黄酮检测的金纳米球、金属

【技术实现步骤摘要】
一种蜂胶提取物中总黄酮含量的拉曼测定方法


[0001]本专利技术涉及食品快速检测设备领域，具体为一种蜂胶提取物中总黄酮含量的拉曼测定方法。

技术介绍

[0002]蜂胶药用历史悠久，含有丰富而独特的生物活性物质，以黄酮类、酚酸类和萜烯类化合物为主。由于其广泛的生物学活性而成为国内外研究与开发的热点。黄酮含量是衡量蜂胶品质的重要指标，在蜂胶保健品的品质调控和产业化进程中起关键作用。然而，蜂胶产品质量良莠不齐，从外型、颜色和气味上都很难鉴别良伪。因此，实现蜂胶中黄酮的快速定量检测对判断蜂胶品质具有重要价值。
[0003]现有的蜂胶黄酮检测技术多为色谱技术，但其操作程序较复杂，无法实现便携快速检测。拉曼光谱技术已被用于检测醋泥、枸杞、柑橘中的黄酮类物质，通过前处理和数学方法可以极大程度改善基质成分对拉曼信号的干扰。但在蜂胶检测体系中，黄酮类和酚酸类物质的拉曼光谱信号存在严重重合，且其信号响应强度易受萜烯类、脂肪酸类物质影响。因此，需要开发一种蜂胶提取物中总黄酮含量的拉曼测定方法，为蜂胶品质控制和真假鉴别提供依据。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种蜂胶提取物中总黄酮含量的拉曼测定方法，。
[0005]本专利技术的目的可以通过以下技术方案实现：
[0006]一种蜂胶提取物中总黄酮含量的拉曼测定方法，包括：制备了针对蜂胶中黄酮检测的金纳米球、金属
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酚醛网络、环氧树脂和聚甲基丙烯酸甲酯
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微针复合检测材料，并依次建立了一种基于表面增强拉曼技术的蜂胶黄酮快速检测方法，实现对蜂胶黄酮的快速定性判断和定量检测。
[0007]作为本专利技术进一步的方案：具体步骤如下：
[0008]一、绘制蜂胶总黄酮标准曲线；
[0009]首先制备不同浓度的芦丁标准溶液、金纳米球、金属
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酚醛网络、环氧树脂和聚甲基丙烯酸甲酯
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微针复合检测材料；然后分别取不同浓度的芦丁标准溶液，体积均相同，记为V1；将金纳米球、金属
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酚醛网络、环氧树脂和聚甲基丙烯酸甲酯
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微针复合检测材料分别浸入V1体积的不同浓度标准溶液中，在室温下进行孵化，取出后得到不同浓度标准溶液下的微针结合物；
[0010]待干燥后利用拉曼光谱仪扫描微针结合物获得拉曼光谱图；以特征拉曼峰作为定量基准峰，测定定量基准峰位移处的拉曼峰强度值I，以芦丁标准溶液浓度与其相对应的拉曼峰强度值I绘制标准曲线。
[0011]作为本专利技术进一步的方案：步骤一中，所述芦丁标准溶液浓度范围为0～5mg/mL；所述芦丁标准溶液的浓度为0.1～5mg/mL；所述金纳米球、金属
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酚醛网络、环氧树脂和聚甲
基丙烯酸甲酯
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微针复合检测材料用量与V1的比例为1片：10～20μL。
[0012]作为本专利技术进一步的方案：步骤一中，所述在室温下进行孵化的时间为10～20s；所述拉曼特征峰为1580～1630cm
‑1。
[0013]作为本专利技术进一步的方案：步骤一中，所述金纳米球、金属
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酚醛网络、环氧树脂和聚甲基丙烯酸甲酯
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微针复合检测材料的具体制备方法如下：
[0014]a、制备金属
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酚醛网络溶液：将聚乙烯吡咯烷酮和六水合氯化铁加入到含有去离子水的烧瓶中，然后将鞣酸加入混合物中并在室温下搅拌20mi n；通过离心收集下层沉淀，离心条件为3000rpm/mi n且10mi n；并重悬于去离子水中，得到金属
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酚醛网络溶液。
[0015]作为本专利技术进一步的方案：步骤a中，所述聚乙烯吡咯烷酮的浓度为1～4mg/mL，六水合氯化铁的浓度为0.1～0.3mg/mL；鞣酸的浓度为0.1～1mg/mL；去离子水的用量为10～20mL；所述在室温下搅拌的时间为10～20mi n；所述离心的条件为2000～5000rpm/mi n，5～10mi n；
[0016]b、制备环氧树脂溶液：将环氧树脂溶解在氯仿中，得到混合物A；再取环氧固化剂溶解在氯仿中，得到混合物B；将混合物A、B分别进行超声，接着将两者混合、密封并继续超声，得到环氧树脂溶液。
[0017]作为本专利技术进一步的方案：步骤b中，所述环氧树脂与环氧固化剂的用量比为1g：(1～5)g；所述混合物A、B中氯仿的用量比为25mL：(20～50)mL；所述超声的条件为室温下超声10～30mi n；
[0018]c、合成环氧树脂、聚甲基丙烯酸甲酯
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微针：用无水乙醇和去离子水洗涤聚甲基丙烯酸甲酯
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微针，然后将聚甲基丙烯酸甲酯
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微针浸入环氧树脂溶液中，取出后置于烘箱中干燥，得到环氧树脂、聚甲基丙烯酸甲酯
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微针。
[0019]作为本专利技术进一步的方案：步骤c中，所述洗涤的条件为，室温下超声清洗10～15mi n，环氧树脂溶液的用量为100～300μL；所述浸入EPR溶液的时间为12～24h；置于烘箱中干燥的条件为40℃，12～24h；
[0020]d、合成金纳米球、金属
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酚醛网络、环氧树脂、聚甲基丙烯酸甲酯
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微针复合检测材料：将环氧树脂、聚甲基丙烯酸甲酯
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微针浸入金属
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酚醛网络溶液中，用去离子水洗涤后，得到金属
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酚醛网络、环氧树脂、聚甲基丙烯酸甲酯
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微针；将100mL的氯金酸0.01％加入圆底烧瓶中煮沸，接着加入1mL的1％柠檬酸钠溶液反应30mi n，冷却至室温后，得到金种子液；然后将金属
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酚醛网络、环氧树脂、聚甲基丙烯酸甲酯
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微针浸入金种子液中，得到金种子修饰的金属
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酚醛网络、环氧树脂、聚甲基丙烯酸甲酯
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微针；接着制备金生长液，将57μL硝酸银0.01M，1.5mL十六烷基三甲基溴化铵0.2M，96μL氯金酸40mM、2.75mL去离子水和240μL抗坏血酸0.1M依次充分混合；
[0021]然后，将金种子修饰的金属
‑
酚醛网络、环氧树脂、聚甲基丙烯酸甲酯
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微针浸入制备的金生长溶液中。随后，用无水乙醇和去离子水冲洗得到金纳米球、金属
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酚醛网络、环氧树脂、聚甲基丙烯酸甲酯
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微针复合检测材料。
[0022]作为本专利技术进一步的方案：步骤d中，所述金属
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酚醛网络溶液的用量为100～300μL；所述浸入金属
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酚醛网络溶液的时间为12～24h；所述用去离子水洗涤的条件为流动水冲洗10～30s；
[0023]所述金种子液与金生长液的用量为100～300μL：200～300μL；所述浸入金种子液
的时间为12～24h，浸入制备的金生长液的时间本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种蜂胶提取物中总黄酮含量的拉曼测定方法，其特征在于，包括：制备了针对蜂胶中黄酮检测的金纳米球、金属
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酚醛网络、环氧树脂和聚甲基丙烯酸甲酯
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微针复合检测材料，并依次建立了一种基于表面增强拉曼技术的蜂胶黄酮快速检测方法。2.根据权利要求1所述的蜂胶提取物中总黄酮含量的拉曼测定方法，其特征在于，具体步骤如下：一、绘制蜂胶总黄酮标准曲线；首先制备不同浓度的芦丁标准溶液、金纳米球、金属
‑
酚醛网络、环氧树脂和聚甲基丙烯酸甲酯
‑
微针复合检测材料；然后分别取不同浓度的芦丁标准溶液，体积均相同，记为V1；将金纳米球、金属
‑
酚醛网络、环氧树脂和聚甲基丙烯酸甲酯
‑
微针复合检测材料分别浸入V1体积的不同浓度标准溶液中，在室温下进行孵化，取出后得到不同浓度标准溶液下的微针结合物；待干燥后利用拉曼光谱仪扫描微针结合物获得拉曼光谱图；以特征拉曼峰作为定量基准峰，测定定量基准峰位移处的拉曼峰强度值I，以芦丁标准溶液浓度与其相对应的拉曼峰强度值I绘制标准曲线。3.根据权利要求2所述的蜂胶提取物中总黄酮含量的拉曼测定方法，其特征在于，步骤一中，所述芦丁标准溶液浓度范围为0～5mg/mL；所述芦丁标准溶液的浓度为0.1～5mg/mL；所述金纳米球、金属
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酚醛网络、环氧树脂和聚甲基丙烯酸甲酯
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微针复合检测材料用量与V1的比例为1片：10～20μL。4.根据权利要求2所述的蜂胶提取物中总黄酮含量的拉曼测定方法，其特征在于，步骤一中，所述在室温下进行孵化的时间为10～20s；所述拉曼特征峰为1580～1630cm
‑1。5.根据权利要求2所述的蜂胶提取物中总黄酮含量的拉曼测定方法，其特征在于，步骤一中，所述金纳米球、金属
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酚醛网络、环氧树脂和聚甲基丙烯酸甲酯
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微针复合检测材料的具体制备方法如下：a、制备金属
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酚醛网络溶液：将聚乙烯吡咯烷酮和六水合氯化铁加入到含有去离子水的烧瓶中，然后将鞣酸加入混合物中并在室温下搅拌20min；通过离心收集下层沉淀，离心条件为3000rpm/min且10min；并重悬于去离子水中，得到金属
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酚醛网络溶液。6.根据权利要求5所述的蜂胶提取物中总黄酮含量的拉曼测定方法，其特征在于，步骤a中，所述聚乙烯吡咯烷酮的浓度为1～4mg/mL，六水合氯化铁的浓度为0.1～0.3mg/mL；鞣酸的浓度为0.1～1mg/mL；去离子水的用量为10～20mL；所述在室温下搅拌的时间为10～20min；所述离心的条件为2000～5000rpm/min，5～10min；b、制备环氧树脂溶液：将环氧树脂溶解在氯仿中，得到混合物A；再取环氧固化剂溶解在氯仿中，得到混合物B；将混合物A、B分别进行超声，接着将两者混合、密封并继续超声，得到环氧树脂溶液。7.根据权利要求6所述的蜂胶提取物中总黄酮含量的拉曼测定方法，其特征在于，步骤b中，所述环氧树脂与环氧固化剂的用量比为1g：(1～5)g；所述混合物A、B中氯仿的用量比为25mL：(20～50)mL；所述超声的条件为室温下超声10～30min；c、合成环氧树脂、聚甲基丙烯酸甲酯
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微针：用无水乙醇和去离子水洗涤聚甲基丙烯酸甲酯
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微针，然后将聚甲基丙烯酸甲酯
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微针浸入环氧树脂溶液中，取出后置于烘箱中干燥，得到环氧树脂、聚甲基丙烯酸甲酯
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微针。
8.根据权利要求7所述的蜂胶提取物中总黄酮含量的拉曼测定方法，其特征在于，步骤c中，所述洗涤的条件为，室温下超声清洗10～15min，环氧树脂溶液的用量为100～300μL；所述浸入EPR溶液的时间为12～24h；置于烘箱中干燥的条件为40℃，12～24h；d、合成金纳米球、金属
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酚醛网络、环氧树脂、聚甲基丙烯酸甲酯
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微针复合检测材料：将环氧树...

【专利技术属性】
技术研发人员：邵兴军，张迪，毛日文，仲延龙，朱惠芬，
申请(专利权)人：江苏江大源生态生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：