美洲大蠊微卫星位点及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一类微卫星标记及其在美洲大蠊群体遗传学中的应用。本发明专利技术公开了36个美洲大蠊微卫星位点及其引物，所述微卫星位点提供了可有效地应用于美洲大蠊种群遗传学研究的遗传标记，所述引物的扩增结果具有高效的多态性和稳定性，可用于分析美洲大蠊种群的遗传多样性、种质资源的鉴定以及亲缘关系的鉴定。

Microsatellite loci of Periplaneta americana and its application

The present invention discloses a kind of microsatellite marker and its application in population genetics of Periplaneta americana. The present invention discloses 36 Periplaneta americana and microsatellite loci primers, the microsatellite loci provide genetic markers can be effectively applied to the population genetics of Periplaneta americana, amplification results of the primers with high polymorphism and stability, can be used to analyze the genetic diversity of population of Periplaneta americana, germplasm resource identification and genetic relationship identification.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物技术和遗传学领域，尤其涉及美洲大蠊微卫星DNA，及其在美洲大蠊群体遗传学中的应用。
技术介绍
微卫星DNA(MicrosatelliteDNA)又称短串联重复序列(Shorttandemrepeat，STR)，或简单序列重复(Simplesequencerepeat，SSR)，一般是指基因组中由1-6个核苷酸为基本重复单元组成的DNA串联重复序列，例如(AG)n、(CT)n、(AGC)n、(AATT)n、(AAAAC)n等。广泛分布于真核生物和原核生物的基因组中，甚至在最小的细菌基因组中也存在，微卫星具有较高的突变率，且突变大都属于可积累的中性突变，因此微卫星具有丰富的多态性，可提供较多的遗传信息；微卫星各等位基因具有共显性特点，符合孟德尔遗传规律，而且微卫星片段小(一般在200bp以下)，其侧翼序列相对保守，通过在侧翼序列上设计引物很容易从基因组中扩增出来，技术要求不高，检测方便、迅速，灵敏度高、重复性好。美洲大蠊是我国传统的药用动物，近年来基于美洲大蠊已开发出了康复新液、心脉隆、肝龙胶囊等药品，由于康复新液等药品临床效果好，很受市场欢迎，美洲大蠊市场需求越来越大，人工养殖越来越多，而且已有规模养殖的需求。人工选育、优质种源的培育将成为规模化养殖的基础，需要了解有关该物种的遗传背景和群体遗传结构，从而建立美洲大蠊的遗传背景档案。近年来，人们通过各种DNA分子标记技术，从不同角度和不同层次，更加全面的揭示物种的遗传信息。目前，国内外对美洲大蠊的遗传背景知之甚少，还未见有微卫星等分子marker的报道以及亲缘鉴定等工作开展，美洲大蠊人工养殖种源质量、我国主要分布区美洲大蠊之间遗传差异等重要的种群遗传信息缺乏，这也是一个急需解决的问题。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供美洲大蠊微卫星位点，检测该标记的引物及方法等。在第一个方面，本专利技术提供美洲大蠊微卫星位点，所述微卫星标记的序列如SEQIDNO：1-36任意一条所示；所述微卫星标记由引物扩增而得。在第二个方面，本专利技术提供扩增美洲大蠊微卫星标记序列的引物对，所述引物对选自SEQIDNO:37+SEQIDNO:38，SEQIDNO:39+SEQIDNO:40，SEQIDNO:41+SEQIDNO:42，SEQIDNO:43+SEQIDNO:44，SEQIDNO:45+SEQIDNO:46，SEQIDNO:47+SEQIDNO:48，SEQIDNO:49+SEQIDNO:50，SEQIDNO:51+SEQIDNO:52，SEQIDNO:53+SEQIDNO:54，SEQIDNO:55+SEQIDNO:56，SEQIDNO:57+SEQIDNO:58，SEQIDNO:59+SEQIDNO:60，SEQIDNO:61+SEQIDNO:62，SEQIDNO:63+SEQIDNO:64，SEQIDNO:65+SEQIDNO:66，SEQIDNO:67+SEQIDNO:68，SEQIDNO:69+SEQIDNO:70，SEQIDNO:71+SEQIDNO:72，SEQIDNO:73+SEQIDNO:74，SEQIDNO:75+SEQIDNO:76，SEQIDNO:77+SEQIDNO:78，SEQIDNO:79+SEQIDNO:80，SEQIDNO:81+SEQIDNO:82，SEQIDNO:83+SEQIDNO:84，SEQIDNO:85+SEQIDNO:86，SEQIDNO:87+SEQIDNO:88，SEQIDNO:89+SEQIDNO:90，SEQIDNO:91+SEQIDNO:92，SEQIDNO:93+SEQIDNO:94，SEQIDNO:95+SEQIDNO:96，SEQIDNO:97+SEQIDNO:98，SEQIDNO:99+SEQIDNO:100，SEQIDNO:101+SEQIDNO:102，SEQIDNO:103+SEQIDNO:104，SEQIDNO:105+SEQIDNO:106，SEQIDNO:107+SEQIDNO:108。第三个方面，本专利技术提供美洲大蠊微卫星位点群，所述微卫星标记群包括2到36个美洲大蠊微卫星位点，所述微卫星标记的序号如SEQIDNO1-36所示。第四个方面，本专利技术提供美洲大蠊微卫星位点或其微卫星标记群在美洲大蠊的种群遗传多样性检测、种质资源鉴定方面的应用。第五个方面，本专利技术提供一种筛选美洲大蠊微卫星位点的方法，包括：(a)利用MSDBv2.4软件中的SWR找出四碱基微卫星序列后，再从中选取两侧保守序列完整的完美型四碱基微卫星序列；(b)利用步骤(a)中选取四碱基原始序列，根据引物设计原则，利用软件Primer3设计引物，并以PCR进行引物筛选，确定36对引物，其序列分别为SEQIDNO:37+SEQIDNO:38，SEQIDNO:39+SEQIDNO:40，SEQIDNO:41+SEQIDNO:42，SEQIDNO:43+SEQIDNO:44，SEQIDNO:45+SEQIDNO:46，SEQIDNO:47+SEQIDNO:48，SEQIDNO:49+SEQIDNO:50，SEQIDNO:51+SEQIDNO:52，SEQIDNO:53+SEQIDNO:54，SEQIDNO:55+SEQIDNO:56，SEQIDNO:57+SEQIDNO:58，SEQIDNO:59+SEQIDNO:60，SEQIDNO:61+SEQIDNO:62，SEQIDNO:63+SEQIDNO:64，SEQIDNO:65+SEQIDNO:66，SEQIDNO:67+SEQIDNO:68，SEQIDNO:69+SEQIDNO:70，SEQIDNO:71+SEQIDNO:72，SEQIDNO:73+SEQIDNO:74，SEQIDNO:75+SEQIDNO:76，SEQIDNO:77+SEQIDNO:78，SEQIDNO:79+SEQIDNO:80，SEQIDNO:81+SEQIDNO:82，SEQIDNO:83+SEQIDNO:84，SEQIDNO:85+SEQIDNO:86，SEQIDNO:87+SEQIDNO:88，SEQIDNO:89+SEQIDNO:90，SEQIDNO:91+SEQIDNO:92，SEQIDNO:93+SEQIDNO:94，SEQIDNO:95+SEQIDNO:96，SEQIDNO:97+SEQIDNO:98，SEQIDNO:99+SEQIDNO:100，SEQIDNO:101+SEQIDNO:102，SEQIDNO:103+SEQIDNO:104，SEQIDNO:105+SEQIDNO:106，SEQIDNO:107+SEQIDNO:108；(c)提取32个美洲大蠊基因组DNA，并将步骤(b)筛选得到的引物进行FAM和HEX荧光标记，标记在每对引物的上游引物5’端，根据优化好的PCR扩增条件，用荧光标记的上游引物与原引物的下游引物扩增32个美洲大蠊DNA样品，得到美洲大蠊微卫星位点。在一种优选实施方式中，步骤(b)中采用的PCR体系为25μL反应体系：PCR扩增反应程序步骤是：95℃预变性4分钟，然后94℃变性30秒，52℃-62℃退火40秒，72℃延伸30秒，以上进行35个循环，72℃延伸1本文档来自技高网...

【技术保护点】
美洲大蠊微卫星位点，其特征在于所述微卫星位点的序列如SEQ ID NO：1‑36任意一条所示。

【技术特征摘要】
1.美洲大蠊微卫星位点，其特征在于所述微卫星位点的序列如SEQIDNO：1-36任意一条所示。2.根据权利要求1所述的美洲大蠊微卫星位点的引物对，所述引物对选自SEQIDNO:37+SEQIDNO:38，SEQIDNO:39+SEQIDNO:40，SEQIDNO:41+SEQIDNO:42，SEQIDNO:43+SEQIDNO:44，SEQIDNO:45+SEQIDNO:46，SEQIDNO:47+SEQIDNO:48，SEQIDNO:49+SEQIDNO:50，SEQIDNO:51+SEQIDNO:52，SEQIDNO:53+SEQIDNO:54，SEQIDNO:55+SEQIDNO:56，SEQIDNO:57+SEQIDNO:58，SEQIDNO:59+SEQIDNO:60，SEQIDNO:61+SEQIDNO:62，SEQIDNO:63+SEQIDNO:64，SEQIDNO:65+SEQIDNO:66，SEQIDNO:67+SEQIDNO:68，SEQIDNO:69+SEQIDNO:70，SEQIDNO:71+SEQIDNO:72，SEQIDNO:73+SEQIDNO:74，SEQIDNO:75+SEQIDNO:76，SEQIDNO:77+SEQIDNO:78，SEQIDNO:79+SEQIDNO:80，SEQIDNO:81+SEQIDNO:82，SEQIDNO:83+SEQIDNO:84，SEQIDNO:85+SEQIDNO:86，SEQIDNO:87+SEQIDNO:88，SEQIDNO:89+SEQIDNO:90，SEQIDNO:91+SEQIDNO:92，SEQIDNO:93+SEQIDNO:94，SEQIDNO:95+SEQIDNO:96，SEQIDNO:97+SEQIDNO:98，SEQIDNO:99+SEQIDNO:100，SEQIDNO:101+SEQIDNO:102，SEQIDNO:103+SEQIDNO:104，SEQIDNO:105+SEQIDNO:106，SEQIDNO:107+SEQIDNO:108。3.一种美洲大蠊微卫星位点群，包括2到36个如权利要求1所述的美洲大蠊的微卫星位点。4.权利要求1或3所述美洲大蠊微卫星位点或其微卫星位点群在美洲大蠊的种群遗传多样性检测、种质资源鉴定方面的应用。5.一种筛选如权利要求1所述的美洲大蠊微卫星位点的方法，包括：(a)利用MSDBv2.4软件中的SWR找出四碱基微卫星序列后，再从中选取两侧保守序列完整的完美型四碱基微卫星序列；(b)利用步骤(a)中选取四碱基原始序列，根据引物设计原则，利用软件Primer3设计引物，并以PCR进行引物筛选，确定36对引物，其序列分别为SEQIDNO:37+SEQIDNO:38，SEQIDNO:39+SEQIDNO:40，SEQIDNO:41+SEQIDNO:42，SEQIDNO:43+SEQIDNO:44，SEQIDNO:45+SEQIDNO:46，SEQIDNO:47+SEQIDNO:48，SEQIDNO:49+SEQIDNO:50，SEQIDNO:51+SEQIDNO:52，SEQIDNO:53+SEQIDNO:...

【专利技术属性】
技术研发人员：耿福能，刘越飞，岳碧松，
申请(专利权)人：四川好医生攀西药业有限责任公司，
类型：发明
国别省市：四川;51