一种斑茅的快速繁殖方法技术

本发明专利技术提供一种斑茅的快速繁殖方法，包括步骤一：外植体选择与灭菌；步骤二，消毒处理好的种子，接种在愈伤组织诱导培养基上，培养瓶内每瓶接种10块外植体，调节培养基pH为5.8，放置于25℃下暗培养，培养5～7天开始形成愈伤组织；步骤三，暗培养条件下，将在愈伤组织培养基上培养出的胚性愈伤组织，剥离后转到继代培养基上培养，调节培养基PH为5.8，温度25±1℃，每20d～28d为一个增殖周期；步骤四：芽分化，步骤五：生根与增殖；步骤六：移栽。本发明专利技术提供的斑茅繁殖方法，该方法取样简便，培养的愈伤组织诱导率高，分化率高，增值系数高，稳定性好，能在较短时间内获得大量生长健壮的试管苗，而且该方法可操作性强，生产成本低，应用价值高，非常适合工业化生产。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及植物栽培
，尤其涉及。
技术介绍
斑茅(Saccharumarundinaceum(Retz) Jeswiet.)是禾本科(Poaceae)蜀泰族(高梁族)(Andropogoneae)甘鹿属(Saccharum)多年生、密丛高大草本，是一种C4植物，植株高大，野生状态株高4米以上，甚至6?7米，茎粗2厘米左右，根系发达，耐瘠薄和干旱，对环境友好，在丘陵坡地、河岸、路旁和砾石沙滩荒洲上生长良好，在我国热带、亚热带至暖温带地区广泛分布，印度、缅甸、泰国、越南、马来西亚等国也有丰富的野生资源。因其优良的植物学特性，斑茅已被广泛用于对栽培甘蔗的遗传改良上，通过远缘杂交、基因导入等手段将斑茅植株高大、抗逆性强、分蘖多、宿根性好等优良性状转移到甘蔗中，培育了大量的优良栽培甘蔗新品种。近年，随着生物质原料的发展，能源草研究逐步成为热点，斑茅因其具有高光效、高生物产量、高干物质积累和高木质纤维素含量等特点，符合以木质纤维素为原料的第三代生物质燃料要求，被认为是我国南方极具开发潜力的本土能源植物，受到广泛关注与研究，国内学者在资源收集、产能潜力评价等方面作了初步研究，但是与国外对柳枝稷等能源草的研究应用还有较大差距。要实现产业化，首先要解决原材料扩繁问题，由于斑茅种子细小且具较长的纤毛，不易收获，常规条件下发芽率也不高，靠种子扩繁效率较低，繁殖系数高是植物组织培养的主要优势，也是国际上种子繁殖困难物种实现工厂化生产种苗的有效途径。目前，关于斑茅组织培养的方法有:“斑茅幼叶的组织培养”，李富生，杨清辉，萧凤，何丽莲，植物资源与环境，1998，7(1):63?64.其具体公开了如下培养方法:诱导培养基:Ms附加2，4-D 1?3mg/L ;分化培养基:Ms附加0.5mg/L IBA和lmg/L KT ;生根培养基:Ms附加IAA 2mg/L和活性炭0.5%的液体培养基。培养过程:取茎梢带叶鞘的部位，用75%酒精表面消毒，剥去外层老叶鞘，留下3?4层的嫩叶鞘。将生长点以上0?4cm的嫩叶鞘切成约5mm长的小块，接种到诱导培养基上。每个材料在诱导培养基上接种40?50块外植体，于27?28°C的暗室内培养20d后统计各处理的愈伤组织诱导率平均为59.71%?78.26%。将产生的愈伤组织转移到分化培养基上，每种转接20?30块，在温度27?28°C，光强1500?20001x，每日光照12h的条件下培养，幼叶愈伤组织经过20d左右培养分化成苗，但分化率较低，在60%以下。待分化成苗后，分化苗移入生根培养基，同等条件下培养两周后即可长出较多粗壮的白根。但是，该培养方法存在的缺陷是:以幼嫩叶鞘为外植体，对取样要求高，操作难度大，取样不到位很容易导致愈伤诱导失败；而且该方法产生的愈伤组织大多属于松软型(只能偶尔分化出根)和粘糊型(不具有胚性能力)，分化能力较弱，分化率较低，在25%?59.09%。“甘蔗近缘属斑茅组织培养高频再生体系的建立”吴转娣，刘家勇，陆鑫，张敏，林秀琴，赵培方，吴才文.，中国糖料，2012，2 =9-10+14.，具体公开了如下培养方法:诱导培养基:MS附加2，4-D 3.0mg/L+6-BA 0.4mg/L ;继代培养基:Ms附加2，4-D3.0mg/L ;分化培养基:Ms附加KT 0.5mg/L+6-BA 1.0mg/L ;培养基中蔗糖质量浓度均为308/1，琼脂0.4%，？!1为5.8。培养过程:取回斑茅的顶端分生区约50cm长，第一次剥开部分老的叶鞘，保留材料下端(顶芽部分)完整，切除多余的老叶鞘，约25?30cm，以75%乙醇溶液消毒表面，放入超净工作台中，剥去老叶鞘，在无菌滤纸上切去老的叶鞘剩下10cm长的幼嫩叶鞘，此时能在材料的上端看到两片叶脉，外表面无毛，离材料下端2?3cm处有一个叶鞘与叶片连接的肥厚带，即材料已经剥到位，将材料切片，置于培养基上培养。愈伤组织诱导、愈伤组织继代均为暗培养，温度均为25±2°C。分化培养则在光照度为1000?20001x的光照条件下，25±2°C培养。暗培养15?25d观察生长情况，全部材料一皿换一皿继代1次。但是，同样，该方法存在如下缺陷:该方案对取样要求高，操作难度大，取样不到位很容易导致愈伤诱导失败而增加生产成本。
技术实现思路
本专利技术的目的在于解决上述现有技术存在的缺陷，提供一种愈伤组织诱导率高，分化率高，增殖系数高的斑茅的繁殖方法。为实现本专利技术目的，采用以下技术方案:—种斑茅的繁殖方法，包括以下步骤:步骤一:植体选择与灭菌以种子为外植体，将采集回的种子选取颗粒饱满的用镊子剥出，无菌水浸泡12h备用；消毒处理为70%酒精浸泡30秒，无菌水漂洗3-5次，用0.1 %取(:12表面灭菌7?lOmin，无菌水漂洗5_7次；步骤二:愈伤组织的诱导将消毒处理好的种子，接种在愈伤组织诱导培养基上，培养瓶内每瓶接种10块外植体，调节培养基pH为5.8，放置于25 °C下暗培养，培养5?7天开始形成愈伤组织；步骤三:愈伤组织的增殖培养暗培养条件下，将在愈伤组织培养基上培养出的胚性愈伤组织，剥离后转到继代培养基上培养，调节培养基PH为5.8，温度25± 1°C，每20d?28d为一个增殖周期；步骤四:芽分化经过继代培养，将呈现出结构致密、颗粒状、淡黄色的胚性愈伤组织转移至芽分化培养基上，调节培养基PH为5.8，温度25± 1°C，加1500-2500LX光照，3?5天开始分化出芽点；步骤五:生根与增殖将长2cm以上的丛生芽转移至培养基上，调节培养基PH为5.8，温度25±1°C，加2000Lx光照，5?7天开始分化出根；步骤六:移栽选取根系生长良好的试管苗，放入清水中把根部的琼脂清洗干净，将生根幼苗移栽到基质中。进一步地，如上所述的斑茅的繁殖方法，所述愈伤组织诱导培养基为:Ms+2, 4-D+6-BA+ 蔗糖 + 琼脂，其中，2，4-D 的浓度为:1.0mg/L ?3.0mg/L, 6-BA 的浓度为0.lmg/L?0.2mg/L，蔗糖的浓度为30g/L，琼脂的浓度为7g/L。进一步地，如上所述的斑茅的繁殖方法，所述愈伤组织诱导培养基为:Ms+2，4_D+蔗糖+琼脂，其中，2，4-D的浓度为:0.5mg/L，蔗糖的浓度为30g/L，琼脂的浓度为7g/L。进一步地，如上所述的斑茅的繁殖方法，所述继代培养基为:Ms+2，4-D+6-BA+蔗糖+琼脂，其中2，4-D的浓度为lmg/L、6-BA的浓度为0.2?0.5mg/L，蔗糖的浓度为30g/L，琼脂的浓度为7g/L。进一步地，如上所述的斑茅的繁殖方法，所述芽分化培养基为MS+6-BA+KT+蔗糖+琼脂；其中，6-BA的浓度为:0.5mg/L，KT的浓度为:1.0mg/L?2.0mg/L，蔗糖的浓度为30g/L，琼脂的浓度为7g/L。进一步地，如上所述的斑茅的繁殖方法，步骤五中所述培养基为:l/2Ms+蔗糖+琼脂，其中，蔗糖的浓度为20g/L，琼脂的浓度为7g/L。进一步地，如上所述的斑茅的繁殖方法，步骤六中所述基质包括:营养土、蛭石、珍珠岩，所述营养土、蛭石、珍珠岩三者的质量比为:2:1:1。本专利技术提供的斑茅繁殖方法，该方法取样简便，培养的愈伤组织诱导率高，分化率高，增值系数高，稳定本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种斑茅的繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一：植体选择与灭菌以种子为外植体，将采集回的种子选取颗粒饱满的用镊子剥出，无菌水浸泡12h备用；消毒处理为70％酒精浸泡30秒，无菌水漂洗3‑5次，用0.1％HgCl2表面灭菌7～10min，无菌水漂洗5‑7次；步骤二：愈伤组织的诱导将消毒处理好的种子，接种在愈伤组织诱导培养基上，培养瓶内每瓶接种10块外植体，调节培养基pH为5.8，放置于25℃下暗培养，培养5～7天开始形成愈伤组织；步骤三：愈伤组织的增殖培养暗培养条件下，将在愈伤组织培养基上培养出的胚性愈伤组织，剥离后转到继代培养基上培养，调节培养基PH为5.8，温度25±1℃，每20d～28d为一个增殖周期；步骤四：芽分化经过继代培养，将呈现出结构致密、颗粒状、淡黄色的胚性愈伤组织转移至芽分化培养基上，调节培养基PH为5.8，温度25±1℃，加1500‑2500Lx光照，3～5天开始分化出芽点；步骤五：生根与增殖将长2cm以上的丛生芽转移至培养基上，调节培养基PH为5.8，温度25±1℃，加2000Lx光照，5～7天开始分化出根；步骤六：移栽选取根系生长良好的试管苗，放入清水中把根部的琼脂清洗干净，将生根幼苗移栽到基质中。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：鄢家俊，白史且，张瑜，张建波，张劲，游明鸿，李达旭，
申请(专利权)人：四川省草原科学研究院，
类型：发明
国别省市：四川;51