本发明专利技术为一种马比木的快速繁殖方法，该方法是在MS培养基上培养带嫩芽段等组织，确切取带1-2个芽的嫩芽茎段为外植体，消毒后，接种在MS+6-BA1.2mg/L+IBA0.2mg/L培养基中培养，接种后10-15天左右芽体的萌发，30天左右形成带叶的小苗，将小苗切下转接于MS+6-BA1.2mg/L+IBA0.4mg/L培养基上，以保持高速度递增，增殖系数为5以上。选择MS+6-BA0.5mg/L+NAA1.5mg／L作为生根培养基，生根率达到95%以上，只需要30天左右形成完整植株。试管苗移载到沙土中，注意保水保湿，移载45天后，移载成活率达到93%以上，建立了一套高频稳定再生体系。本发明专利技术方法具有稳定好，操作简便，繁殖速度快，生产成本低，达到产业化水平等优点。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物工程领域，涉及植物组织培养技术，具体地说是一种马比木的组织培养方法。
技术介绍
植物是药物的天然宝库，人们利用药用植物的历史源远流长，全世界约有75%的人口以植物作为治疗预防疾病的药物来源(邢建民，2001)。人类已经从植物中发现了许多具有高度生理活性的药物，目前从植物来源的药物占药物总量的25%以上(郑光植，1987)。我国的传统中草药已有数千年的历史，至今仍在我国和许多国家和地区广为使用。但由于传统的中草药获取方法是以采集和消耗大量的野生植物资源为代价的，当采集和消耗量超过自然资源的再生能力时，必然会导致物种的濒危甚至灭绝。同时随着自然生态环 境的日益破坏，也进一步导致药用植物资源的匮乏。生物技术的蓬勃发展为从根本上改变传统药材的生产提供了一个崭新的方法，植物组织和细胞培养技术则是其中一个重要的手段。我国自1964年罗士韦教授首先报道了人参组织培养获得成功的研究成果以来，许多科学家先后从事了多种药用植物的组织培养研究。至今，我国药用植物的组织培养研究迅速发展。目前，世界各国对植物的药用开发和研究都十分重视，就以美国来说，其成药中有47%是以植物为原料制成的(谢启昆，1986)。为了解决药用植物的供需矛盾，人们采用人工栽培的方法扩大药源。但在人工栽培的药用植物中，有不少名贵药材等生产周期较长，如人参、黄连，如果以常规方法育种或育苗，需要花费很长的时间；另有一些药用植物如贝母、番红花等，因繁殖系数小、耗种量大，导致育种速度很慢，生产成本增加。利用植物的有性繁殖方式对其有效成分含量波动比较大，所以利用植物组织培养技术解决药用植物的植株再生与繁殖问题迫在眉睫。近年来，国内外在这方面已做了大量工作，已成功离体培养获得试管植株的药用植物至少有200种，如云南黑节草、延龄草、高山红景天、莪术、水母雪莲、星花绣线菊、溪黄草、玉叶金花、辽东榴木等；其中包括一些具有抗癌有效成分的珍稀植物，如红豆杉、马比木、黄杨、大戟属植物、长春花、米仔兰、七叶一枝花、狗牙花和香榧等。马比木，又名公黄珠子、追风伞，属于茶茱萸科植物，多年生矮灌木，高2-3 (-10)m。枝有棱，被短柔毛，后变无毛，芽被柔毛。叶互生或枝上部近对生；叶柄长l-3cm，上面具宽深精，槽里被糙伏毛；叶片长圆形或倒披针形，长7-24cm，宽2-4. 5cm,先端长渐尖，基部楔形，全缘，上面暗绿色，具光泽；中脉下凹，侧脉6-7对，弧曲上升，远离叶缘处网结。花两性或杂性，聚伞花序顶生，长约7cm，总梗、分枝、花序轴通常扁平，被粗伏毛，花梗长l-2mm ；花萼绿色，钟形，长约2mm，外面稀被粗伏毛，5裂齿，裂齿三角形；花瓣黄色，线形，反卷，长约7mm,宽约2mm ;雄蕊5,长约5mm,花丝长4_5mm,基部稍粗,花药卵形；子房近球形，被长硬毛，花柱绿色，长约2mm，柱头头状；花盘肉质，具不整齐裂片或深圆齿，里面疏被长硬毛，果时宿存。核果椭圆形，稍扁，幼果绿色，转黄色，熟时为红色，长l_2cm，径O. 6-0. 8cm，先端明显具鳞脐，有萼宿存。花期4-6月，果期6-8月。生态环境生于海拔(150) 450- (2500)m的林中。资源分布分布于甘肃、湖北、湖南、广东、海南、广西、四川、贵州等地。马比木根皮中含有喜树碱及喜树碱的甲氧基衍生物，其有效成分是喜树果的三倍以上，喜树碱的含量达到了 0.8%。马比木种子很难发芽，野生马比木主要以根茎芽繁殖，另外野生马比木在根皮中含量不稳定，其有效成分含量与野生马比木的生长年限有关，一般在10年以上的野生马比木含量较一致。所以以野生马比木的提取会造成资源枯竭，还有造成其喜树碱的产量不稳定。公开号为CN102071233A的中国专利公开了一种人工诱导臭马比木内生菌合成喜树碱的技术方法，将臭马比木未成熟的细胞按照接种量为50-200g/L湿重的比例，置于添加了 50-80ymol/L的生长调节剂萘乙酸(N AA)或5-10 μ mol/L苄氨基嘌呤(BA)的MS基本培养基中，在25-30°C中培养；在细胞指数生长初期，加入浓度为1-2000 μ mol/L的非生物诱导剂和20_50g/L的蔗糖或葡萄糖；在细胞指数生长中期，再加入浓度为1-2000 μ mol/L的非生物诱导剂。该专利技术虽利用了富含喜树碱的植物臭马比木，通过人工诱导，组织培养的方法实现喜树碱的合成，在一定程度上可提高喜树碱的产量，由于喜树碱在其根皮中长期积累所致，所以很难工业化生产。因此，为了满足日益增大的药用需求，种子收获量小，种子繁殖出苗率极低，种子培育过程烦琐，生长速度慢，同时保护马比木的野生资源，利用组培快繁技术，实现人工栽培是最好的解决方法。迄今为止，在国内外尚未见关于马比木组织培养快繁成功的报道。我们通过大量试验，终于摸索出一套成熟的方法，成功实现了马比木的组培快繁，可以快速培育出大量幼苗，为实现工业化人工栽培马比木提供可能。马比木的组培快繁技术方法的成功建立，可以为大规模人工栽培药用植物马比木提供种苗，为现代科技农业提供了一种切实可行的开发项目。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供马比木的快速繁殖方法，该方法非常适合工业化生产，配方效果佳，出芽率高，培养时间短，植株生长旺盛，可操作性强，应用价值高等优点。具有投入少，产出高的特点。本专利技术所述马比木的快速繁殖方法，其具体操作步骤如下I)外植体的选取与灭菌选用马比木的嫩茎上芽体作为培养材料，经洗洁精和自来水洗净，置流水下冲洗10-30分钟后，置于75%酒精中处理10-30秒，然后再经O. 1%的升汞消毒后用无菌水冲洗，切去外植体变色的部分后备用；2)芽体的萌发将灭菌处理后的芽体接种在Ms+6-BAl. 2mg/L+IBA0. 2mg/L培养基上，pH值为5. 8，培养温度25-27°C，每天光照12小时，光照强度1000LX，接种后10-15天芽体的萌发，30天左右形成带叶的小苗；3)丛生芽诱导和增殖培养将小苗切下转接于Ms+6-BAl. 2mg/L+IBA0. 4mg/L培养基上，直至形成丛生芽，PH值为5. 8，培养温度25-27°C，每天光照15小时，光照强度1000LX,25天左右为一个生长周期，以保持高速度递增，增殖系数为5以上；4)生根培养选择Ms+6-BAO. 5mg/L+NAA I. 5mg/L作为生根培养基，pH值为5. 8，培养温度25-27°C，每天光照16小时，光照强度1000LX，生根率达到95%以上，只需要30天左右形成完整植株；5)试管苗的移栽选取根系生长良好的试管苗，放入清水中把根部的琼脂清洗干净，移载到沙土或富养土中，注意保水保温保湿，移载45天，移载成活率达到92%以上。在一个具体实施方案中，步骤I中采用O. I %升汞进行消毒，消毒时间控制优选在12-15分钟。在另一个具体实施方案中，步骤5中大田移栽湿度控制在40-70%;温度控制在20-30。。。技术效果(I)利用马比木带芽根茎段为外植体，使得外植体取材较容易，一年四季均可取材，而且数量多，采用根茎芽体做外植体，保证了遗传稳定性，同时克服了组织培养中，愈伤组织在分化培养基上随着芽的分化而逐渐停止生长，失去增殖能力的弱点，可防止伤组织继代培养过程中，随着培养代数的增加，分化出来的苗出现变异的现象。(2本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种马比木的快速繁殖方法，其具体操作步骤如下：1)外植体的选取与灭菌：选用马比木的嫩茎上芽体作为培养材料，经洗洁精和自来水洗净，置流水下冲洗10?30分钟后，置于75％酒精中处理10?30秒，然后再经0.1％的升汞消毒后用无菌水冲洗，切去外植体变色的部分后备用；2)芽体的萌发：将灭菌处理后的芽体接种在Ms+6?BA1.2mg/L+IBA0.2mg/L培养基上，pH值为5.8，培养温度25?27℃，每天光照12小时，光照强度1000LX，接种后10?15天芽体的萌发，30天左右形成带叶的小苗；3)丛生芽诱导和增殖培养：将小苗切下转接于Ms+6?BA1.2mg/L+IBA0.4mg/L培养基上，直至形成丛生芽，pH值为5.8，培养温度25?27℃，每天光照15小时，光照强度1000LX，25天左右为一个生长周期，以保持高速度递增，增殖系数为5以上；4)生根培养：选择Ms+6?BA0.5mg/L+NAA?1.5mg/L作为生根培养基，pH值为5.8，培养温度25?27℃，每天光照16小时，光照强度1000LX，生根率达到95%以上，只需要30天左右形成完整植株；5)试管苗的移栽：选取根系生长良好的试管苗，放入清水中把根部的琼脂清洗干净，移载到沙土或富养土中，注意保水保温保湿，移载45天，移载成活率达到93%以上。...
【技术特征摘要】
1.一种马比木的快速繁殖方法，其具体操作步骤如下 1)外植体的选取与灭菌选用马比木的嫩茎上芽体作为培养材料，经洗洁精和自来水洗净，置流水下冲洗10-30分钟后，置于75%酒精中处理10-30秒，然后再经0. 1%的升汞消毒后用无菌水冲洗，切去外植体变色的部分后备用； 2)芽体的萌发将灭菌处理后的芽体接种在Ms+6-BAl.2mg/L+IBA0. 2mg/L培养基上，pH值为5. 8，培养温度25-27°C，每天光照12小时，光照强度1000LX，接种后10-15天芽体的萌发，30天左右形成带叶的小苗； 3)丛生芽诱导和增殖培养将小苗切下转接于Ms+6-BAl.2mg/L+IBA0. 4mg/L培养基上，直至形成丛生芽，PH值为5. 8，培养温度25-27...
【专利技术属性】
技术研发人员：向华，
申请(专利权)人：向华，
类型：发明
国别省市：
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