本发明专利技术提供一种铬-高密度脂蛋白螯合物及其制备方法和应用，该铬-高密度脂蛋白螯合物是铬离子与高密度脂蛋白通过巯基或/和半胱氨酸残基螯合而成，可用于制备检测人体铬-高密度脂蛋白螯合物的试剂。本发明专利技术首次证实了铬离子可直接作用于高密度脂蛋白。本发明专利技术建立了铬-高密度脂蛋白螯合物的定性定量检测方法，以检测一个地区人群体内高密度脂蛋白的含量，从而间接反映一个地区铬污染程度以及对人群的健康影响。本发明专利技术建立的铬-高密度脂蛋白螯合物定量检测方法准确度高重、复性好。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及重金属离子的免疫学检测，具体涉及一种铬-高密度脂蛋白螯合物及 其制备方法与应用。
技术介绍
脂蛋白（lipoproteins)是蛋白质与脂质结合所形成的一种脂质-蛋白质复 合物，按密度分为高密度脂蛋白（highdensitylipoprotein，简称HDL)、中间密度脂 蛋白（intermediatedensitylipoprotein，简称IDL)、低密度脂蛋白（lowdensity lipoprotein，简称LDL)、极低密度脂蛋白（verylowdensitylipoprotein,简称VLDL)、 乳糜颗粒（chylomicron，CM)。血液中大约百分之三十的胆固醇是通过高密度脂蛋白从组 织细胞中运输到肝脏转化为胆汁酸或通过胆汁排出体外的。高密度脂蛋白由50%的蛋白、 30%的磷脂、25%的胆固醇（其中70%为胆固醇酯）、5%的三酰甘油组成。高密度脂蛋白（简称HDL)是血浆中主要脂蛋白之一，其密度最高，颗粒直径最小， 蛋白和脂质含量大致均等的异质性脂蛋白。由50%的蛋白、30%的磷脂、25%的胆固醇（其 中70%为胆固醇酯）、5%的三酰甘油组成。HDL是动脉粥样硬化发生和发展的主要脂类保护因素，其在血清蛋白中有很强的 抑制动脉粥样硬化作用，是冠状动脉疾病的重要保护因子，与冠心病危险程度呈负相关。 但是，研究表明高密度脂蛋白胆固醇的数量并不能与心血管疾病的保护程度成正 比，因为其中已经发生结构改变的高密度脂蛋白仍然可以测量到但已经丧失正常功能甚至 会加重动脉粥样硬化的进展。而高密度脂蛋白胆固醇的数量下降则可显著提示动脉粥样硬 化的保护性减弱，因而检测定量血清中HDL对于冠心病具有重要意义，不仅可以用于早期 识别动脉粥样硬化的危险性，而且可以作为脂类调节药物治疗过程的检测以及预后评价的 指标之一。 络（chromium，Cr)是元素周期表VI族中的一种过渡金属，其质地坚硬，表面具有 光泽，有较高的熔点，在工业生产中具有重大的经济价值，一个世纪以来被广泛应用，每年 全球铬生产量高达107吨，因而铬是一种名副其实的重要金属污染物。目前，铬广泛应用于 电镀、鞣革、颜料、油漆、合金、印染等各个方面，与人们的生活息息相关，但是同样也对人 类的身体健康产生巨大影响。自然界中铬主要以三价和六价的形式存在，而一般认为，三价铬是人类所需的微 量元素，而六价铬才是明显的毒性物质。由于六价铬易通过细胞膜进入细胞，而且可以通过 一系列反应，产生强烈的细胞毒性及基因毒性，因而普遍认为六价铬的毒性高于三价铬，达 10 -100倍。学者认为当水中的六价铬含量超过0.05mg/L即是有毒的。六价铬可以通过皮 肤接触、食物摄入、饮用水饮入、呼吸道吸入等途径进入人体，对于职业性暴露人群主要是 通过呼吸道吸入六价铬灰尘，而对于普通人群则是通过饮入污染水源、食入被污染的食物、 吸入等方式摄入六价铬。六价铬进入体内后，可以引发氧化应激、显色体畸变、细胞凋亡、多 种DNA损伤（包括单链断裂、DNA-蛋白质交联、DNA-氨基酸交联、Cr-DNA配合物形成等）， 从而造成机体多处组织、器官、系统损伤。 如前所述，铬与多种蛋白质之间关系密切，可以与多种蛋白质结合，抑制多种蛋白 酶的活性。随着对铬毒性研究的深入，人们逐渐认识到铬与蛋白的相互作用在其致毒过程 中扮演着重要的角色，被认为是了解铬的毒性机理的关键所在，因此，对铬和蛋白质相互作 用的研究就显得愈发重要。而现在关于铬与蛋白质作用的机理仅是冰山一角，还有很多蛋 白质与铬之间的关系还不清楚，因而加强对于铬与蛋白质之间的关系至关重要。 关于铬中毒，特别是慢性铬中毒的评价，通过检测血铬含量也不能准确评价人体 内的循环铬含量，无法进一步评估铬对于机体功能的损伤程度，而随着科学技术的飞速发 展，铬与人体的关系也日益紧密，因而寻找一种可以从免疫功能角度评价铬中毒，特别是慢 性铬中毒对于机体的损害程度的评价方式日益重要。
技术实现思路
针对铬污染严重的问题，本专利技术的目的在于提供一种铬-高密度脂蛋白螯合物及 其制备方法，并建立铬-高密度脂蛋白螯合物的定性、定量检测方法，以便定量检测铬-高 密度脂蛋白螯合物在评价一个地区铬污染程度的应用。通过定量检测一个地区人群血清中 铬-高密度脂蛋白螯合物，可以间接反映这个地区人群受铬污染的情况，从而间接反映这 个地区铬污染程度。 本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是：提供一种铬-高密度脂蛋白螯合 物，该铬-高密度脂蛋白螯合物是铬离子与高密度脂蛋白通过巯基或/和半胱氨酸残基螯 合而成。 本专利技术还提供一种上述的铬-高密度脂蛋白螯合物的制备方法，即体外合成法， 包括以下步骤： A)铬-高密度脂蛋白的合成：在提纯源于人体的高密度脂蛋白或按照生物学方法 重组的高密度脂蛋白中加入铬离子进行螯合反应，得到反应溶液； B)铬-高密度脂蛋白螯合物纯化：采用免疫亲和层析法，去除步骤A)反应溶液中 未反应的高密度脂蛋白、特异性抗体和铬离子，即得铬-高密度脂蛋白螯合物。 作为优选，所述步骤B)中具体包括以下步骤： (1)溶解样品：将上述步骤A)的铬-高密度脂蛋白螯合物溶解于生理盐水中，得 铬-高密度脂蛋白螯合物溶液； (2)平衡层析柱：使用稀释缓冲液冲洗层析柱的管路，在层析柱中装入能与高密 度脂蛋白特异性结合的填料，装柱后，继续使用稀释缓冲液平衡层析柱； 所述能与高密度脂蛋白特异性结合的填料为吸附有可与高密度脂蛋白特异性结 合物质的硅胶或树脂； (3)上样：待层析柱平衡后，用稀释缓冲液稀释步骤（1)所述溶液，然后上柱，使高 密度脂蛋白与填料特异性结合； (4)洗脱：使用稀释缓冲液冲洗层析柱至基线平衡，然后使用0. 05-0.lOmol/L的 Na2HP0j§液进行洗脱； (5)收集：收集步骤⑷的洗脱液，收集完毕后立即使蛋白复原； (6)透析：将步骤（5)中的收集的洗脱液装透析袋，用CldH2O透析除盐，换水三次 后，4°C透析过夜，收集样本； (7)平衡层析柱：采用新的层析柱，用稀释缓冲液冲洗管路，在该层析柱中装入能 与铬特异性结合的填料，装柱后再用稀释缓冲液平衡层析柱； 所述能与铬特异性结合的填料为吸附有可与铬特异性结合物质的硅胶或树脂； (8)上样：待层析柱平衡后，用稀释缓冲液稀释步骤(6)中样本，然后上柱； (9)洗脱：使用稀释缓冲液冲洗层析柱至基线平衡，然后使用0. 5-1.Omol/L的 Na2HP0j§液进行洗脱； (10)收集：收集步骤（9)的洗脱液，收集完毕后立即使蛋白复原； (11)透析：将步骤（10)的洗脱液装透析袋，用CldH2O透析除盐，换水三次后，4°C透 析过夜，收集样本，即得铬-高密度脂蛋白螯合物。 作为优选，上述铬-高密度脂蛋白螯合物的制备方法，还包括以下对铬-高密度脂 蛋白螯合物的鉴定步骤，具体包括以下步骤： (1)制备胶床：以琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶中的一种作为介质制备胶床； (2)加样：取步骤B)中提取纯化得到的铬-高密度脂蛋白螯合物，加入上样缓冲 液，并混匀，然后加样于样品槽中； (3)电泳：连接电泳板，进行电泳； (4)检测：在胶床上找出含铬的蛋白条带，将该蛋白条带取出，将蛋白条带溶解， 然后再采用ICP-本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种铬‑高密度脂蛋白螯合物，其特征在于，该铬‑高密度脂蛋白螯合物是铬离子与高密度脂蛋白通过巯基或/和半胱氨酸残基螯合而成。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：张积仁，阳帆，董欣敏，吴婧，蔡睿，孙遥，赵乙木，
申请(专利权)人：上海拜豪生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31
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