【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及动物医学免疫检测
,是一种胶体金层析法检测雌酮硫酸钠的试纸条。
技术介绍
根据文献报道雌激素替代疗法范围越来越广泛。由于生理和病理原因引起的雌激素分泌不足而导致的各种患者呈不断增长态势。目前获取制备雌激素类药物原料的一个主要方向是从孕马尿中提取天然雌激素。市场需求量的激增,使从孕马尿中提取雌激素的生产规模不断扩大。对孕马尿含量的常规检测分析主要是利用气相色谱(GC)和高效液相色谱(HPLC)等仪器在试验室操作,方法繁琐、分析速度慢、成本高,要求仪器化程度高等;随着待检样品、特别是要求现场快速检测样品量的迅速增加,传统的分析手段难以适应要求,因此,迫切需要开发和应用高效率孕马尿中雌激素分析技术。
技术实现思路
本专利技术提供了一种胶体金层析法检测雌酮硫酸钠的试纸条,克服了上述现有技术之不足,其能有效解决孕马尿含量的常规检测方法繁琐、分析速度慢、成本高和仪器化程度高,已不能适应现有技术要求的问题。本专利技术的技术方案之一是通过以下措施来实现的:一种胶体金层析法检测雌酮硫酸钠的试纸条,包括底板、样品吸收垫、金标抗体结合垫、硝酸纤维素膜和吸水滤纸;在底板的中部顶端固定连接有硝酸纤维素膜,在硝酸纤维素膜的中部沿径向分别划有相平行的检测线和质控线,在硝酸纤维素膜的左部上端固定连接有金标抗体结合垫,在金标抗体结合垫的左部上端固定连接有样品吸收垫,在硝酸纤维素膜的右部上端固定连接有吸水滤纸。下面是对上述专利技术技术方案之一的进一步优化或/和改进:上述检测线按下述方法得到:第一步,精密称取6.6mg雌酮硫酸钠-17-肟置反应瓶中,在 ...
【技术保护点】
一种胶体金层析法检测雌酮硫酸钠的试纸条,其特征在于包括底板、样品吸收垫、金标抗体结合垫、硝酸纤维素膜和吸水滤纸;在底板的中部顶端固定连接有硝酸纤维素膜,在硝酸纤维素膜的中部沿径向分别划有相平行的检测线和质控线,在硝酸纤维素膜的左部上端固定连接有金标抗体结合垫,在金标抗体结合垫的左部上端固定连接有样品吸收垫,在硝酸纤维素膜的右部上端固定连接有吸水滤纸。
【技术特征摘要】
1. 一种胶体金层析法检测雌酮硫酸钠的试纸条,其特征在于包括底板、样品吸收垫、金标抗体结合垫、硝酸纤维素膜和吸水滤纸;在底板的中部顶端固定连接有硝酸纤维素膜,在硝酸纤维素膜的中部沿径向分别划有相平行的检测线和质控线,在硝酸纤维素膜的左部上端固定连接有金标抗体结合垫,在金标抗体结合垫的左部上端固定连接有样品吸收垫,在硝酸纤维素膜的右部上端固定连接有吸水滤纸。
2. 根据权利要求1所述的胶体金层析法检测雌酮硫酸钠的试纸条,其特征在于检测线按下述方法得到:第一步,精密称取6.6mg雌酮硫酸钠-17-肟置反应瓶中,在反应瓶中加入1mlN,N-二甲基亚酰胺溶解在雌酮硫酸钠-17-肟中,溶解后加入2.0ml二氧六环混匀,在温度为4℃下放置30min,后加入23.2μl三正丁胺并搅拌反应30min,反应后加入17.4μl氯甲酸已丁酯混匀后得到活化溶液(A);第二步,精密称取98.5mg牛血清白蛋白,在牛血清白蛋白中依次加入5ml浓度为0.01mol·L-1 、pH为7.4的磷酸盐缓冲液和2ml二氧六环并均匀,在温度为4℃下放置30min后得到溶液(B);第三步,将活化溶液(A)加入溶液(B)中并搅拌均匀,调节pH值为8.0至9,在温度为4℃下继续搅拌反应18h,反应完成后将反应液转移入透析袋,置于温度为4℃下、浓度为0.05 mol·L-1 、 pH为7.4的碳酸盐缓冲液中透析10h至24h,透析后得到结合比为1:24的人工抗原;第四步,将人工抗原和弗氏完全佐剂等体积乳化后得到初次免疫剂,人工抗原和弗氏不完全佐剂等体积乳化后得到加强免疫剂,选择体重为1.8kg至2.1kg的新西兰白雄兔,对新西兰白雄兔采用背部皮下多点注射法进行一次初次免疫和三次加强免疫,初次免疫用初次免疫剂,初次免疫剂的剂量为0.8mg/只兔,初次免疫后再进行三次加强免疫,加强免疫用加强免疫剂,加强免疫剂的剂量为0.40mg/只兔,每次免疫时间间隔为1周至2周,最后一次免疫完成10天后对新西兰白雄兔采血收集血清,用ELISA法测定抗血清的效价,待抗血清的效价达到1:20000后,采取兔心脏采血法获取全血,全血析出血清后,在血清过蛋白A亲和层析柱纯化后,加入体积百分比为0.01%的硫柳汞水溶液1ml至3ml混匀后得到抗雌酮硫酸钠特异性抗体;第五步,通过微量进样器在硝酸纤维素膜上用抗雌酮硫酸钠特异性抗体划线包被得到检测线。
3. 根据权利要求2所述的胶体金层析法检测雌酮硫酸钠的试纸条,其特征在于检测线的宽度为1mm至1.5mm,检测线的点样量按0.5cm宽的试纸条上点样1.5ul。
4. 根据权利要求1或2或3所述的胶体金层析法检测雌酮硫酸钠的试纸条,其特征在于质控线按下述方法得到:通过微量进样器在硝酸纤维素膜上用浓度为1.0mg/m1的羊抗兔IgG划线包被得到质控线。
5. 根据权利要求1或2或3所述的胶体金层析法检测雌酮硫酸钠的试纸条,其特征在于将划有检测线和质控线的硝酸纤维素膜用封闭液在37℃下浸泡封闭30分钟后自然风干;其中:封闭液包括磷酸盐缓冲液、牛血清白蛋白和Tween20,磷酸盐缓冲液为浓度为0.01mol·L-1 、pH为7.4的磷酸盐缓冲液,牛血清白蛋白在封闭液中的质量百分比为1%,Tween20在封闭液中的质量百分比为0.1%。
6. 根据权利要求4所述的胶体金层析法检测雌酮硫酸钠的试纸条,其特征在于将划有检测线和质控线的硝酸纤维素膜用封闭液在37℃下浸泡封闭30分钟后自然风干;其中:封闭液包括磷酸盐缓冲液、牛血清白蛋白和Tween20,磷酸盐缓冲液为浓度为0.01mol·L-1 、pH为7.4的磷酸盐缓冲液...
【专利技术属性】
技术研发人员:冯晓辉,高晓黎,温浩,巩月红,齐新伟,房彬彬,
申请(专利权)人:新疆医科大学第一附属医院,
类型:发明
国别省市:新疆;65
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