本发明专利技术公开了抗草鱼IgM的单克隆抗体、杂交瘤细胞株及其应用。所述抗草鱼IgM的单克隆抗体是由保藏编号为CCTCCNO:C2013193的杂交瘤细胞株S467分泌产生的。利用所述的单克隆抗体构建了一种草鱼呼肠孤病毒间接ELISA检测试剂盒，所述试剂盒中包括抗草鱼IgM的单克隆抗体的酶标记物，包被有抗原的酶标板。本发明专利技术所构建的草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型ELISA检测试剂盒可以对草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型特异性抗体的进行定性或定量检测，同时可以检测草鱼多份血清样品并达到早期诊断的目的，对草鱼出血病的诊断、流行病学调查和病原监测具有较高的临床使用及推广价值，为降低水产养殖过程中因草鱼出血病所带来的巨大经济损失提供了技术保障。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了抗草鱼IgM的单克隆抗体、杂交瘤细胞株及其应用。所述抗草鱼IgM的单克隆抗体是由保藏编号为CCTCCNO:C2013193的杂交瘤细胞株S467分泌产生的。利用所述的单克隆抗体构建了一种草鱼呼肠孤病毒间接ELISA检测试剂盒，所述试剂盒中包括抗草鱼IgM的单克隆抗体的酶标记物，包被有抗原的酶标板。本专利技术所构建的草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型ELISA检测试剂盒可以对草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型特异性抗体的进行定性或定量检测，同时可以检测草鱼多份血清样品并达到早期诊断的目的，对草鱼出血病的诊断、流行病学调查和病原监测具有较高的临床使用及推广价值，为降低水产养殖过程中因草鱼出血病所带来的巨大经济损失提供了技术保障。【专利说明】—种草鱼呼肠孤病毒的间接ELISA检测试剂盒
本专利技术属于生物
，具体涉及一种抗草鱼IgM的单克隆抗体、杂交瘤细胞株及草鱼呼肠孤病毒间接ELISA检测试剂盒。
技术介绍
草鱼呼肠孤病毒(Grass carp reovirus, GCRV)隶属水生呼肠孤病毒属，为呼肠孤病毒科一新成员，是中国大陆分离的第一株鱼类病毒。该病毒主要引起中国、越南、緬甸等亚洲国家淡水养殖中的草鱼品种在鱼种阶段发生出血病，死亡率一般为30%-50%，最高可达60%-80%，而且还能感染青鱼、麦穗鱼、布氏餐条鱼等，并能使这几种鱼发生出血病症状而死亡，该病毒流行广、危害大、死亡率高、发病季节长，严重影响了广大养殖者的积极性和我国淡水养殖业的健康发展。草鱼呼肠孤病毒具双层衣壳，病毒粒子平均直径为60nm-70nm，二十面体对称，无囊膜，基因组由11条分节段的双链RNA组成。目前己经报道了 20多个分离株，包括 GCRV854、GCRV861、GCRV873、GCRV875、GCRV876、GCRV991、H962、ZV-8802、GCHV-854、GCRV HZ08、JX09-01、GCRV-104、⑶IO等，不同分离株在基因组序列、基因组带型、细胞病变、对草鱼的致病力等方面差异较大。草鱼呼肠孤病毒至今还没在血清学或者基因型上对其进行系统分类。根据现有的分离株序列信息，进行核苷酸序列与氨基酸序列比对以及构建系统进化树分析，所有毒株总体上可以分为3大类，分为3个基因型，即GCRV I型(代表株为 GCRV-873 与 GCRV-JX09-01)、GCRV II 型(代表株为 GCRV-HZ08 与 GCRV-GD10)和GCRV III型(GCRV-104，GC RV-HB1007)。当前，全国各地分离到的流行株中，三类亚型均有报道，有的单独感染，也有混合感染。通过我们2009年至2013年这4年的草鱼出血病监测和流行病学调查分析表明，目前导致草鱼出血病流行和爆发的最主要为GCRV II型。因此，对GCRV II型病毒引起的草鱼出血病的特异性诊断具有重要意义。草鱼呼肠孤病毒的检测方法有多种，各具优势和缺陷，病毒分离、电镜观察、核酸带型分析至今仍是检测草鱼呼肠孤病毒普遍采用的方法，但这些方法法费时费力、操作比较复杂，不能对病毒进行快速诊断，不利于草鱼出血病的流行病学调查工作。全病毒诊断涉及病毒培养、纯化及浓缩等过程，不仅制作过程复杂，耗时，成本较高，而且还潜在散毒危险，因此不利于推广使用。当前，对于草鱼呼肠孤病毒的检测，最为常用的方法是基于PCR扩增技术的各种分子生物学检测方法，包括常规的RT-PCR和荧光定量PCR等，具有较高的敏感性和特异性。但这些分子生物学方法都是检测病毒的核酸存在与否，方法单一，经常导致假阳性和假阴性结果，难于对该病做到确诊。因此，急需其它方法来弥补分子生物学检测方法的不足，如各种免疫学(血清学)检测方法。至今为止，对于草鱼出血病的防治，还没有特异有效的治疗药物和方法，最为有效的办法仍然是注射疫苗，进行免疫预防。目前，针对草鱼出血病的疫苗，无论是法规许可的细胞弱毒疫苗还是市场上流行的土法疫苗，甚至一些细胞灭活疫，绝大部分都是针对GCRVII型的疫苗。而对这些疫苗免疫效果的评价，只是根据免疫草鱼的死亡率来初步估计，一旦其它疫病的爆发导致免疫草鱼死亡，就无法弄清是由于疫苗效果不好，草鱼出血病依然爆发导致而的死亡，还是由于其它疫病的爆发而导致的死亡，更无法对疫苗免疫效果进行评价。因此,也急需要一种检测GCRV特异性抗体的免疫学方法。
技术实现思路
我们的最近研究发现:GCRV-HZ08株SlO基因(SEQ ID NO:1)的编码蛋白(SEQ IDN0:2)为结构蛋白，且比GCRV其它结构蛋白诱导免疫动物产生更高效价的特异性抗体，具有更好的免疫原性；针对SlO编码蛋白的抗体可以特异性识别GCRV II型毒株，并对该类型毒株具有很强的中和能力；因此，可以利用SlO基因编码蛋白来捕获机体中的特异性抗体，从而实现特异性抗体的检测。因此，本专利技术的一个目的在于提供一株杂交瘤细胞株S467，已于2013年12月10日保藏于中国典型培养物保藏中心(CHINA CENTER FOR TYPE CULTURE COLLECTION)，地址:武汉，武汉大学，保藏编号为CCTCC NO: C2013193。本专利技术的另一个目的是提供一种由上述保藏编号为CCTCC NO: C2013193的杂交瘤细胞株分泌产生的抗草鱼呼肠孤病毒II型的单克隆抗体。本专利技术的另一个目的是提供一种草鱼呼肠孤病毒间接ELISA检测试剂盒。本专利技术所采取的技术方案是: 杂交瘤细胞株S467，已于2013年12月10日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为 CCTCC NO: C2013193。 一种抗草鱼IgM的单克隆抗体，其由保藏编号为CCTCC NO: C2013193的杂交瘤细胞株或其传代细胞株分泌产生。上述杂交瘤细胞株或单克隆抗体在制备抗草鱼呼肠孤病毒II型和/或草鱼出血病检测试剂或诊断试剂中的应用。一种草鱼呼肠孤病毒间接ELISA检测试剂盒，所述试剂盒中包括抗草鱼IgM的单克隆抗体的酶标记物，包被有抗原的酶标板。所述抗草鱼IgM的单克隆抗体由保藏编号为CCTCC NO: C2013193的杂交瘤细胞株或其传代细胞株分泌产生。所述抗原为草鱼呼肠孤病毒II型SlO基因的编码蛋白，其序列如SEQ ID N0:2所/Jn ο所述试剂盒中还包括标准血清、TMB显色液、终止液和洗涤液。一种草鱼呼肠孤病毒间接ELISA检测方法，包括如下步骤: Cl)加样:将待检样品加入包被有草鱼呼肠孤病毒II型SlO基因的编码蛋白(SEQ IDNO:2)的酶标包被板反应孔内； (2)温育:用封板膜封板后置37°C温育； (3)洗涤:揭掉封板膜，用PBST洗涤液洗涤酶标板； (4)加入二抗:往反应孔中加入酶标二抗，所述酶标二抗为抗草鱼IgM的单克隆抗体的辣根过氧化物酶标记物； (5)温育:操作同(2); (6)洗涤:操作铜(3); (7)显色:往反应孔中加入TMB显色剂，37°C避光显色；(8)测定及结果判断。本专利技术的有益效果是: 1、本专利技术的杂交瘤细胞株S467能够无限增殖并持续产生抗草鱼免疫球蛋白IgM单克隆抗体，该单克隆抗体特异性强、效价高。2、本专利技术中的包被抗原SlO编码蛋白的抗体可以特异性识别GCRV II型毒株，可以本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：曾伟伟，王庆，吴淑勤，王英英，梁红茹，刘春，李永刚，殷亮，
申请(专利权)人：中国水产科学研究院珠江水产研究所，
类型：发明
国别省市：
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