评估进行性多灶性白质脑病风险的方法技术

本发明专利技术涉及评估患者发展进行性多灶性白质脑病（PML）的风险的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】相关申请的交叉引用本申请要求2011年5月31日提交的美国临时申请N0.61/491，810、2011年7月15日提交的美国临时申请N0.61/508，584、2011年10月21日提交的美国临时申请N0.61/550，257和2012年4月20日提交的美国临时申请N0.61/636，588的权益。在先申请通过引用整体并入本文。专利
本专利技术涉及评估患者发展进行性多灶性白质脑病(PML)的风险的方法。专利技术背景显示抗VLA-4 (极晚期抗原4)抗体治疗性那他珠单抗治疗复发形式的多发性硬化(MS)和中度至重度克罗恩病。然而，那他珠单抗治疗与增加的进行性多灶性白质脑病(PML)风险相关，所述疾病是一种由JC病毒(JCV)引起的机会性脑感染。PML主要发生在免疫受损个体和接受包括那他珠单抗的某些免疫调节疗法的患者中。假设PML是宿主与病毒因子之间复杂相互作用的结果，导致潜伏原型JCV复活并突变成可以感染中枢神经系统的少突胶质细胞的神经营养形式。专利技术概述本专利技术特别涉及用于检测生物流体例如血清或血浆中JCV抗体存在的优化的、分析验证的、灵敏的测定，以及各种其它方法，包括评价和/或治疗患者的方法。相应地，一方面，本专利技术特征为评价样品中抗JCV抗体水平的方法。该方法包括以下步骤的一个或多个或全部:(a)形成第一反应混合物，所述第一反应混合物包含第一等份样品和其上置有HPVLP (高度纯化的病毒样粒子，例如，高度纯化的VPl粒子)的基底，例如高信噪比的HPVLP基底；(b)例如，通过检测与结合于所述基底的抗JCV抗体结合的标记检测试剂(例如酶标记的抗IgG抗体)来检测与其上置有HPVLP的所述基底(例如高信噪比的HPVLP基底)结合的抗JCV抗体的水平；从而评价样品中抗JCV抗体的水平(如本文讨论的，方法可以包括对样品分类或分配指示抗JCV抗体水平的值，所述值在本文有时被称为指数值。可以使用所述值来评价样品或患者，并且在一些实施方案中确定是否进行所述方法的额外步骤，例如，以下的步骤(c));和Ce)形成含有第二等份样品和溶液相HPVLP的第二反应混合物，并诸如通过检测能够与其上置有HPVLP的基底(例如高信噪比的HPVLP基底)结合的抗JCV抗体来检测所述第二反应混合物中未结合的抗JCV抗体的水平(如本文讨论的，所述方法可以包括对样品分类或分配指示与可溶相HPVLP —起孵育降低第二反应混合物中未结合的抗JCV抗体水平的程度的值，所述值在本文有时被称为抑制、％抑制或类似表达。可以使用该值来评价样品或患者)，从而评价样品中抗JCV抗体的水平。在一个实施方案中，所述方法还包括:(d)在样品中的抗JCV抗体未被HPVLP或其它抗原结合的情况下形成包含第三等份的第三反应混合物，并诸如通过检测能够与其上置有HPVLP的基底(例如高信噪比的HPVLP基底)结合的抗JCV抗体来检测第三反应混合物中抗JCV抗体的水平。抑制或％抑制可以被计算为与可溶相HPVLP —起孵育(步骤(c))与步骤(d)中的结果相比减少未结合抗JCV抗体量的程度的函数。在一个实施方案中，所述方法包括步骤(a)和(b)和任选地，向另一实体例如健康护理提供者提供结果。 在一个实施方案中，所述方法包括步骤(a)、(b)和(C)和任选地，向另一实体例如健康护理提供者提供结果。在一个实施方案中，所述方法包括步骤(a)、(b)、(c)和(d)和任选地，向另一实体例如健康护理提供者提供结果。在一个实施方案中，所述方法包括步骤(c )和任选地，向另一实体例如健康护理提供者提供结果。在一个实施方案中，所述方法包括步骤(C)和(d)和任选地，向另一实体例如健康护理提供者提供结果。本文描述的方法使用优化水平和量的试剂，允许改善的性能。因此，在一个实施方案中，对于第一反应混合物，将20ng至60ng、30ng至50ng、20ng至40ng、35ng至45ng HPVLP置于所述基底上。在一个实施方案中，将约20叫、30叩、401^、501^或601^ HPVLP置于所述基底上。通常，多基底装置，例如多孔板(例如聚苯乙烯多孔板)，将在多个基底的每一个上具有本文指定量的HPVLP。典型的基底是在多孔板上的孔的内部。本文描述的方法使用优化比例的试剂和样品，允许改善的性能。在一个实施方案中，第一反应中样品(例如血清或血浆)的(这指未稀释的样品或者稀释液中样品的量，因此，100 ill的I ill:100 ill稀释液将是I U I样品)与置于基底上的HPVLP的ng的比例是:1:100 至 I:20 ；1:80 至 I:30 ；1:60 至 I:20 ；1:20 至 I:60 ；1:30 至 1:50。在一个实施方案中，样品例如血清或血浆的U I与置于基底上的HPVLP的ng的比例是大约:1:30,1:40或1:50。在一个实施方案中，样品例如血清或血浆的U I与置于基底上的HPVLP的ng的比例是大约:(0.08 至 1.2):30,(0.08 至 1.2):40 或(0.08 至 1.2):50。在一个实施方案中，用于第一反应的样品(例如血清)在与其上置有HPVLP的基底(例如高信噪比的HPVLP基底)接触之前在例如缓冲液中稀释诸如约100倍。在一个实施方案中，检测使用酶标记的抗体，例如酶标记的IgG，诸如HRP (辣根过氧化物酶)标记的IgG0在另一实施方案中，检测试剂(例如HRP标记的IgG)以至少0.0Iii g/mL、0.02 yg/mL、0.03 u g/mL、0.04 u g/mL、0.05 u g/mL、0.06 ii g/mL 或 0.08 u g/ml 的浓度添加。在一个实施方案中，检测试剂以相对于结合至基底的抗体IOx至IOOx过量提供。在一个实施方案中，检测试剂以与结合至基底的抗体相比给出等于或大于10x、20x、50x、75x或IOOx)过量的量提供。在一个实施方案中，(C)中溶液相HPVLP以相对于第二反应混合物或样品中抗JCV抗体2x至IOOx过量粒子存在。在一个实施方案中，第二反应混合物或样品中粒子相对于抗 JCV 抗体的过量等于或大于 2x、4x、5x、10x、15x、20x、40x、50x、70x、80x、IOOx 或 110x。在一个实施方案中，对于第二反应混合物，将20ng至60ng、30ng至50ng、20ng至40ng、35ng至45ng HPVLP置于所述基底上。在一个实施方案中，将约20ng、30ng、40ng、50ng或60ng HPVLP置于所述基底上。通常，多基底装置，例如多孔板(例如聚苯乙烯多孔板)在多个基底的每一个上具有本文指定量的HPVLP。典型的基底是在多孔板上的孔的内部。在一个实施方案中，对于第二反应混合物，使样品与可溶相HPVLP接触，并且然后允许未结合的抗JVC抗体结合至置于基底上的HPVLP。在一个实施方案中，对于第二反应混合物，样品与可溶相HPVLP和置于基底上的HPVLP同时接触。在一个实施方案中，样品(例如血清或血浆)的U I (这指未稀释的样品或者稀释液中样品的量，因此，100 ill的Iul:100 ill稀释液将是I ill样品)与置于基底上的HPVLP的 ng 的比例是 1:100 至 I:本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种评价样品中抗JCV抗体水平的方法，其包括：（a）形成第一反应混合物，所述第一反应混合物包含第一等份样品和其上置有HPVLP的基底；和（b）通过检测与结合于所述基底的抗JCV抗体结合的标记的检测试剂来检测与其上置有HPVLP的所述基底结合的抗JCV抗体的水平；其中满足以下之一或两者：（i）将20ng至60ng?HPVP置于所述基底上，和（ii）样品与基底的比例是1：50至1：30，从而评价样品中抗JCV抗体的所述水平。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2011.05.31 US 61/491,810;2011.07.15 US 61/508,5841.一种评价样品中抗JCV抗体水平的方法，其包括: Ca)形成第一反应混合物，所述第一反应混合物包含第一等份样品和其上置有HPVLP的基底；和 (b)通过检测与结合于所述基底的抗JCV抗体结合的标记的检测试剂来检测与其上置有HPVLP的所述基底结合的抗JCV抗体的水平； 其中满足以下之一或两者:(i )将20ng至60ng HPVP置于所述基底上，和(i i )样品与基底的比例是1:50至I:30, 从而评价样品中抗JCV抗体的所述水平。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述样品例如血清在与所述基底接触之前在例如缓冲液中稀释例如约100倍。3.根据权利要求1所述的方法，其中检测使用酶标记的抗体，例如酶标记的IgG，例如HRP标记的IgG。4.根据权利要求3所述的方法，其中所述检测试剂例如HRP标记的IgG以至少0.01u g/mL、0.02u g/mL、0.03u g/mL、0.04u g/mL、0.05u g/mL、0.06u g/mL 或 0.08 u g/ml的浓度添加。5.根据权利要求1所述的方法，其还包括 (c)形成含有第二等份样品和溶液相HPVLP的第二反应混合物，并诸如通过检测能够与其上置有HPVLP的基底结合的抗JCV抗体来检测所述第二反应混合物中未结合的抗JCV抗体的水平；和 任选地(d)在所述样品中的抗JCV抗体未被HPVLP或其它抗原结合的情况下形成含有第三等份的第三反应混合物，并诸如通过检测能够与其上置有HPVLP的基底结合的抗JCV抗体来检测所述第三反应混合物中未结合的抗JCV抗体的水平， 以提供干扰值。6.根据权利要求5所述的方法，其包括比较所述第二反应混合物中的检测水平与所述第三反应混合物中的检测水平。7.根据权利要求6所述的方法，其中所述比较包括:确定与所述第三反应混合物中未结合的抗体水平相比，所述第二反应混合物中HPVLP的存在对所述第二反应混合物中未结合的抗JCV抗体水平的抑制水平。8.根据权利要求7所述的方法，其中所述抑制小于45%，并且任选地，所述样品被分类为阴性。9.根据权利要求7所述的方法，其中所述抑制大于或等于45%，并且所述样品被分类为阳性。10.根据权利要求5所述的方法，其中响应于权利要求1的步骤b中检测的抗JCV抗体的所述水平来进行所述方法，例如所述nOD是〈0.2和〈0.4并且继续步骤c和d。11.根据权利要求5所述的方法，其中所述样品例如血清在形成所述第二反应混合物之前在例如缓冲液中稀释例如约100倍。12.根据权利要求5所述的方法，其中所述样品例如血清在形成所述第三反应混合物之前在例如缓冲液中稀释例如约100倍。13.根据权利要求5所述的方法，其中对所述第二和第三反应混合物之一或两者的检测使用酶标记的抗体，例如酶标记的IgG，例如HRP标记的IgG。14.根据权利要求3所述的方法，其中对所述第二和第三反应混合物之一或两者的检测使用HRP标记的IgG，使所述HRP标记的IgG以至少0.01 u g/mL、0.02 u g/mL、0.03 u g/mL、0.04 u g/mL、0.05 u g/mL、0.06 y g/mL 或 0.08 u g/ml 的浓度添加。15.根据权利要求1所述的方法，其还包括在步骤b中评价标准品，例如具有例如约I的评分的界限校准物。16.根据权利要求1所述的方法，其还包括在步骤b中评价标准品，例如具有例如约1.3的评分的阳性对照。17.根据权利要求1所述的方法，其还包括在步骤b中评价标准品，例如具有例如约0.1的评分的阴性对照。18.—种试剂盒，所述试剂盒包括权利要求1的基底。19.根据权利要求18所述的试剂盒，其中使所述基底提供在多孔板例如96孔板上。20.根据权利要求18所述的试剂盒，其还包括以下的一个或多个或者全部=HPVLP溶液；JCV界限校准物；抗兀￥抗体阳性对照和JVC阴性对照，其是人类血清样品；和用于检测含有与JCV抗原结合的抗JCV抗体的复合物的试剂。21.根据权利要求20所述的试剂盒，其中所述检测试剂是TMB(四甲基联苯胺)、洗涤缓冲液和终止试剂的一种或多种。22.—种评价患者发展进行性多灶性白质脑病(PML)的风险的方法，所述方法包括: 在来自患者的生物样品中的所述抗JCV抗体确认测定中确定表示为nOD、指数或其它单位的JC病毒(JCV)抗体滴度或诸如表示为百分比抑制的亲和力或亲合力的其它特征，其中 如果确定所述滴度或/和百分比抑制或两值的函数高于或低于预定水平，则确定所述患者处于较低的发展PML的风险，并且其中 如果确定所述滴度或/和百分比抑制或两值的函数高于或低于预定水平，则确定所述患者处于中等的发展PML的风险，并且其中 如果确定所述滴度或/和百分比抑制或两值的函数处于或高于预定水平，则确定所述患者处于较高的发展PML的风险，并且进一步的条件是 (i)确定所述患者样品中抗JCV抗体滴度或百分比抑制包括从所述患者的身体取生物样品或分析来自所述患者的样品，或 (ii)如果确定所述患者处于较低的发展PML的风险，则给所述患者施用疗法。23.根据权利要求22所述的方法，其中确定所述患者处于较低的发展PML的风险，并且给所述患者施用抗VLA-4疗法。24.根据权利要求22所述的方法，其中如果以下成立，则确定所述患者具有较低的PML风险: (i)确定如通过指数值或nOD指示的所述抗JCV抗体滴度是〈0.5,或 (ii)确定如通过指数值或nOD指示的所述抗JCV抗体滴度是>0.5且〈3.0,并且确定所述百分比抑制小于或等于70%。25.根据权利要求22所述的方法，其中如果以下成立，则确定所述患者具有中等的PML风险:(i)确定如通过指数值或nOD指示的所述抗JCV抗体滴度是>0.5且〈1.5，并且 (ii)确定所述百分比抑制值是>70%。26.根据权利要求22所述的方法，其中如果以下成立，则确定所述患者具有较高的PML风险: (i)确定如通过指数值或nOD指示的所述抗JCV抗体滴度是>3，并且确定所述百分比抑制值是>70%，或 (ii)所述患者显示指数、nOD或滴度比之前测试增加2倍。27.根据权利要求26所述的方法，其中通过以下方式测量抗JCV抗体的百分比抑制: (i)使来自受试者的生物样品与溶液中的高度纯化的VPl粒子(HPVLP)在适合所述样品中抗JCV抗体与HPVLP结合的条件下接触； (ii)从所述溶液分离与HPVLP结合的JCV抗体以产生二次样品； (iii)使所述二次样品与HPVLP在与(i)相同的条件下接触；和 (iv)检测所述二次样品中与HPVLP结合的抗JCV抗体的所述水平。28.根据权利要求22所述的方法，其中使所述抗JCV抗体滴度通过测定测量，所述测定包括: (i)使所述生物样品与HPVLP在适合所述样品中抗JCV抗体与HPVLP结合的条件下接触； (ii)检测所述样品中与HPVLP结合的抗JCV抗体的水平；和 (iii)使所述检测的水平与参考集相关联，其中选择所述参考集以指示不超过3%的假阴性率。29.根据权利要求22所述的方法，其中通过使用VIDAS⑩测定(bioM6rieUX)来测量所述抗JCV抗体滴度。30.根据权利要求28所述的方法，其中所述测定指示所述生物样品不含有JCV抗体，并且所述方法还包括: (iv)使来自所述受试者的生物样品的一部分与溶液中的HPVLP在步骤(i)之前接触，并且其中使步骤(i)的HPVLP与固体基底连接，从而提供二次样品； (V)使所述二次样品与HPVLP在与(i)相同的条件下接触； (vi)检测所述二次样品中与HPVLP结合的抗JCV抗体的水平；和 (vii)比较所述二次样品中抗JCV抗体的检测水平和当与无HPVLP的溶液一起孵育时所述生物样品中的结合水平，其中与所述溶液孵育的样品相比，与HPVLP —起预孵育的所述样品的检测水平的降低指示所述样品是抗JCV抗体阳性的，并且所述检测水平无变化指示所述样品中不存在抗JCV抗体。31.根据权利要求28所述的方法，其中所述测定指示所述生物样品含有JCV抗体，并且确定所述患者处于较高的PML风险。32.根据权利要求30所述的方法，其中所述测定指示所述生物样品含有JCV抗体，并且确定所述患者处于较高的PML风险。33.根据权利要求30所述的方法，其中如果以下成立，则确定所述患者具有较低的PML风险: (i)确定如通过指数值或nOD指示的所述抗JCV抗体滴度是〈0.5,或(ii)确定如通过指数值或nOD指示的所述抗JCV抗体滴度是>0.5且〈3.0,并且确定所述百分比抑制小于或等于70%。34.根据权利要求30所述的方法，其中如果以下成立，则确定所述患者具有较高的PML风险: (i)确定如通过指数值或nOD指示的所述抗JCV抗体滴度是>3，并且确定所述百分比抑制值是>70%，或 (ii)所述患者显示指数、nOD或滴度比之前测试增加2倍。35.根据权利要求30所述的方法，其中所述测定指示所述生物样品不含有JCV抗体，并且确定所述患者处于较低的PML风险。36.根据权利要求22所述的方法，其中以6个月或12个月的间隔重新测试所述抗JCV抗体滴度或百分比抑制。37.根据权利要求36所述的方法，其中抗体滴度或百分比抑制的增加指示患者发展PML的风险的增加。38.根据权利要求36所述的方法，其中抗JCV抗体滴度的2倍或更大的增加指示发展PML的增加的风险。39.根据权利要求22所述的方法，其中所述评价在施用抗VLA-4疗法之前进行。40.根据权利要求22所述的方法，其中所述评价在所述患者已开始抗VLA-4疗法之后进行。41.根据权利要求22所述的方法，其中确定所述患者处于较低的PML风险，并且给所述患者施用抗VLA-4疗法。`42.根据权利要求22所述的方法，其中确定所述患者处于较高的PML风险，并且给所述患者施用抗VLA-4疗法。43.根据权利要求22所述的方法，其中所述抗VLA-4疗法是那他珠单抗。44.根据权利要求37所述的方法，其中确定所述患者具有增加的PML风险，并且所述患...

【专利技术属性】
技术研发人员：GL布鲁姆格伦，C博奇克，S李，M苏布拉马尼亚姆，T普拉维纳，
申请(专利权)人：比奥根艾迪克MA公司，
类型：
国别省市：