格列卫辅助治疗胃肠道间质瘤的用药选择及疗效检测试剂盒，涉及用于分子生物学和医学的检测试剂盒。包括BCR-ABL基因PCR反应液、Taq酶、对照品、配套的多重PCR扩增程序和包装物。通过检测格列卫药物靶向位点BCR-ABL融合基因存在与否来帮助胃肠道间质瘤选择合适药物并评估个体格列卫辅助治疗胃肠道间质瘤疗效，可应用于胃肠道间质瘤的临床辅助用药的选择和预后判断等多个领域。
【技术实现步骤摘要】
格列卫辅助治疗胃肠道间质瘤的用药选择及疗效检测试剂合Sl
本专利技术涉及用于分子生物学和医学的检测试剂盒，尤其是涉及一种格列卫辅助治疗胃肠道间质瘤的用药选择及疗效检测试剂盒。
技术介绍
胃肠道间质瘤(胃肠道间质瘤的英文全称为gastrointestinal stromal tumors,英文缩写为GIST)起源于胃肠道间叶组织的肿瘤，是一种发生于消化道的少见肿瘤，于 I983 年首次提出。(Mazur MT, Clark HB.Gastric stromal tumors.Reappraisal ofhistogenesis [J].Am J Surg Patholl983; 7:507-519)。GIST 占胃肠道恶性肿瘤的 1% ~3%，估计年发病率约为(10~20)/100万，且20%~30%是恶性的。但随着分子生物学的迅速发展，GIST的诊断以及治疗也取得了巨大进展。尤其是目前治疗肿瘤的靶向药物，针对特异性靶点进行治疗，从而避免对正常细胞的伤害，取得高效低副作用的治疗模式，在市场上占据了重要份额。靶向药物伊马替尼，商品名为格列卫，其活性成分为甲磺酸伊马替尼，是由诺华公司开发研制的第一个上市并用于临床的酪氨酸激酶抑制剂。它被FDA批准用于治疗慢性粒细胞白血病及胃肠道间质瘤，它的主要作用是能选择性的结合于某些相关的酪氨酸激酶受体，阻止磷酸基团从三磷酸腺苷向蛋白质底物的转移，使之不能催化底物酪氨酸残基的磷酸化而激活下游效应分 子的信号转导，从而抑制细胞增殖而诱导细胞凋亡(JABB0URE,CORTES J E, GHANEM H，et al.Targeted therapy in chronic myeloid leukemia[J].Expert review of anticancer therapy, 2008，8 (I):99-110.)。这些酪氨酸激酶包括BCR - ABL, TEL-ABL, ETV6-ABL、C-KIT等，它们胞外区是配体结合结构域，配体是可溶性或膜结合的多肽或蛋白类激素，包括胰岛素和多种生长因子，胞内段是酪氨酸蛋白激酶的催化部位，并具有自磷酸化位点。磷酸化的酪氨酸部位立即成为细胞内信号蛋白的结合位点，不同的细胞内信号蛋白和受体尾部磷酸化部位结合后被激活。信号复合物通过几种不同的信号转导途径，扩大信息，激活细胞内一系列的生化反应；或者将不同的信息综合起来引起细胞的综合性应答，如细胞增殖等。伊马替尼最早即是抑制BCR - ABL酪氨酸激酶功能，用以治疗不同病期的慢性粒细胞白血病患者，以慢性期疗效最好，加速期和急变期的疗效明显较慢性期差。临床数据显示出较好的治疗效果，具有完全的血液学缓解率，大约95%~98%，完全的细胞遗传学缓解率，在慢性期时达到80%~90%，仅有10%慢性期病例能达到分子水平缓解(DEININGERM, BUCHDUNGER E, DRUKER B J.The development of imatinib as a therapeutic agentfor chronic myeloid leukemia[J] ? Blood, 2005，105 (7): 2640-2653.)。而在 2000 年，有研究报道了第I例格列卫应用治疗不能切除的GIST病患，表明不论是在临床上还是组织学上都有明显的的疗效。另有研究应用格列卫治疗147例进展阶段的GIST患者，认为甲磺酸伊马替尼是有效的和安全的，其中54%的患者病情得到缓解，28%的患者病情稳定，随访9个月未发现难以治疗和控制的毒副作用。由于格列卫在治疗GIST的显著作用，一些无法切除的晚期GIST患者，在应用其进行新辅助化疗后，使得手术切除成为可能(DEMETRI G D, vonMEHREN M, BLANKE C D, et al.Efficacy and safety of imatinib mesylate in advancedgastrointestinal stronmal tumors [J].N Engl J Med, 2002，347 (7): 472-480.)。有研究者对126例不能切除(包括技术的原因和病人全身状况的原因)的c-KIT呈阳性的GIST患者进行研究，其中16例病人在应用格列卫治疗后行完整的肿瘤切除术。另I例应用格列卫辅助化疗的GIST病例也取得了成功，此病例为一巨大(35cm)下腹部肿瘤，伴有肝内和肠系膜转移，因无法切除而应用格列卫治疗，用药12周后肿瘤自35cm缩小至18cm，肝内转移灶转为囊性病灶，原发肿瘤和肠系膜多发转移灶随后被完全切除(SCAIFE C L, HUNT K K，PATELS R, et al.1s there a role for surgery in patients with imatinib mesylate[J].AmJSury, 2003，186(6):665-669.)。由BCR-ABL编码出的融合蛋白作为一种具有持续活性酪氨酸激酶，参与多种信号通路的调节，例如干扰有丝分裂原蛋白激酶通路而上调细胞增殖，干扰磷酸肌醇3 -激酶/蛋白激酶B通路导致凋亡减少，最终影响细胞的正常工作(MELO JV，DEININGER M W.Biology of chronic myelogenous leukemia—signaling pathwaysof initiation and transformation[J].Hematology/oncology clinics of NorthAmerica, 2004, 18(3):545-568.)。可见它在GIST以及慢性粒细胞白血病的发生发展中扮演着重要角色，且作为靶向药物格列卫的特异性靶点，它的存在对于GIST的治疗选择以及使用格列卫治疗后的疗效评价都具有重要意义，鉴于对于疾病的诊断、预后、疗效评价等上的临床价值，融合基因检测技术的开发不得不说具有很大的市场价值以及临床意义。
技术实现思路
本专利技术的目的 在于提供一种格列卫辅助治疗胃肠道间质瘤的用药选择及疗效检测试剂盒。本专利技术的目的之二在于提供一种配套的PCR扩增程序。所述格列卫辅助治疗胃肠道间质瘤的用药选择及疗效检测试剂盒，包括BCR-ABL基因PCR反应液、Taq酶、对照品、配套的多重PCR扩增程序和包装物；所述BCR-ABL基因PCR反应液由PCR反应缓冲液、2条BCR-ABL基因特异性上游引物、I条BCR-ABL基因特异性下游引物组成；BCR基因上游引物Fl序列为:5，-TTTGAGGATTGCGGAGGC-3，, F2 序列为 5’ -GGAGCAGCAGAAGAAGTGTT-3’，ABL 某闵下游引物R 序列为:5，-GGTCCAGCGAGAAGGTTT-3，；所述PCR 反应缓冲液由 Tris-HCl 10mM、KC150mM、MgCl20.2mM 和 dNTPs0.2mM 组成，所述Tris-HCl 的 pH为 8.3 ;*PCR反应缓冲液由 IOOmM Tris-HCl, 500mM KCl,25mM MgCl2,25mM dNTPs 组成，所述 Tris-HCl 的 pH 为 8.8。所用引物浓度可为本文档来自技高网...
【技术保护点】
格列卫辅助治疗胃肠道间质瘤的用药选择及疗效检测试剂盒，其特征在于包括BCR?ABL基因PCR反应液、Taq酶、对照品、配套的多重PCR扩增程序和包装物；所述BCR?ABL基因PCR反应液由PCR反应缓冲液、2条BCR?ABL基因特异性上游引物、1条BCR?ABL基因特异性下游引物组成；BCR基因上游引物F1序列为：5’?TTTGAGGATTGCGGAGGC?3’，F2序列为5’?GGAGCAGCAGAAGAAGTGTT?3’，ABL基因下游引物R序列为：5’?GGTCCAGCGAGAAGGTTT?3’。
【技术特征摘要】
1.格列卫辅助治疗胃肠道间质瘤的用药选择及疗效检测试剂盒，其特征在于包括BCR-ABL基因PCR反应液、Taq酶、对照品、配套的多重PCR扩增程序和包装物； 所述BCR-ABL基因PCR反应液由PCR反应缓冲液、2条BCR-ABL基因特异性上游引物、I条BCR-ABL基因特异性下游引物组成；BCR基因上游引物Fl序列为:5，-TTTGAGGATTGCGGAGGC-3，, F2 序列为 5’ -GGAGCAGCAGAAGAAGTGTT-3’，ABL 某闵下游引物R 序列为:5，-GGTCCAGCGAGAAGGTTT-3，。2.如权利要求1所述格列卫辅助治疗胃肠道间质瘤的用药选择及疗效检测试剂盒，其特征在于所述PCR反应缓冲液由Tris-HCl 10mM、KC150mM、MgCl20.2mM和dNTPs0.2mM组成，所述 Tris-HCl 的 pH 为 8.3。3.如权利要求1所述格列卫辅助治疗胃肠道间质...
【专利技术属性】
技术研发人员：曾骥孟，林辉暖，吕晓楠，刘祝君，
申请(专利权)人：厦门大学，
类型：发明
国别省市：
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