两种拟青霉属真菌对三七的生物转化制造技术

本发明专利技术涉及两种拟青霉属真菌对三七药材进行生物转化的方法。该方法的操作步骤主要包括：（1）蝙蝠蛾拟青霉（Paecilomyce?shepiali?Chen?&?Dai）和蛹草拟青霉（Paecilomyces?militaris?Liang）菌种的制备；（2）三七培养基的制备；（3）发酵培养条件；（4）产物后处理和主要功效成分检测。使用本发明专利技术所提出的蝙蝠蛾拟青霉和蛹草拟青霉发酵三七的方法，直接以三七原药材作为发酵底物，通过一次发酵过程同时获得三七和药用虫草真菌的药用成分，使培养物兼具三七和药用真菌的双重功效。

【技术实现步骤摘要】
两种拟青霉属真菌对三七的生物转化
本专利技术属微生物
，涉及两种拟青霉属真菌对三七药材进行生物转化的方法。
技术介绍
三七\_Panax no toginseng (Burk.) F.H.Chen]为五加科人参属多年生草本植物，是我国传统的药用植物。主要活性成分为三七总阜苷iPanax notoginseng saponins,PNS)。三七总皂苷在耐缺氧、抗衰老、提高机体免疫力等方面的药理作用显著，且总皂苷和部分单体皂苷在血液系统、心脑血管系统、神经系统、物质代谢以及抗炎、抗肿瘤等方面均有较好活性。尤其是稀有皂苷在治疗心脑血管疾病、抗肿瘤方面表现出较好的药理活性，如人参皂苷Rd对心脑血管、神经系统、免疫系统等作用独特，是一种很有前景的候选药物。研究表明:天然的人参皂苷含量低，且分子结构不是最佳的活性状态，可通过生物转化减少人参皂苷结构中的糖基数目，将天然皂苷中含量较高的Rgl、Rbl、Rl、Re等皂苷转化为含量甚微的稀有皂苷:Rd、Rhl、F1、F2、C-K等，可提高其疗效和生理活性。 蝙fe蛾拟青霉焊Ce1S hepiali Chen & Dai)和蛹草拟青霉JoffiiFce1Smi Ii tar is Liang)是两种重要的药用虫草真菌，该真菌发酵产物中含有以虫草素和虫草腺苷为主的药用成分，具有抗肿瘤、抗菌、抗病毒、免疫调节、清除自由基的功效。本专利技术以三七药材为主要培养基成分，采用两种药用真菌蝙蝠蛾拟青霉{Paeci lomyces hepiali Chen & Dai )和虫甬草拟青霉焊ces mi Ii tar is Liang)对三七药材进行生物转化，同时获得药用稀有人参皂苷、虫草素和虫草腺苷，培养物兼具三七药效和真菌药效，提高了治疗和保健功效。
技术实现思路
本专利技术提供了一种利用药用真菌发酵三七药材，同时获得真菌和三七药用活性成分的方法。该方法的操作步骤如下: (1)菌种制备:将蝙蝠蛾拟青霉hepialiChen & Dai)和蛹草拟青霉{Paeci lomyces mi Ii tar is Liang)分别接种到PPDA斜面培养基,于26°C恒温培养7天； (2)三七培养基:精确称取Ig过60目筛的三七粉于100 mL三角瓶，加入0.2 mL无机盐:10 %KH2P04 和 5 %MgS04，20 mL 水，自然 pH, 121°C灭菌 30 min ； (3)液体发酵培养:将步骤(1)中制备好的菌种接入`步骤(2)三七培养基中，于10-30。。，120 r/min 培养 4-16 d ； (4)液体发酵物后处理:将步骤(3)中培养好的液体发酵物抽滤，用10mL纯水清洗滤渣，合并滤液，4000 r/min离心30 min，上清液加入纯水定容至30mL为上清处理液。取10 mL上清处理液加入等体积水饱和正丁醇超声萃取I h，静置分层后，收集上层正丁醇相60°C旋蒸至干燥，用5 mL 70%甲醇溶解，采用HPLC法检测其皂苷含量。取20 mL上清处理液烘干，取0.1 g该烘干样品加入I mL 20%甲醇溶解，采用HPLC法检测其虫草素和虫草腺苷含量。本专利技术的关键点在于:使用药用虫草真菌对三七药材进行生物转化，一次发酵过程同时获得真菌药效成分和三七药效成分，使培养物兼具三七和药用真菌的双重功效。 【具体实施方式】以下实施例用于说明本专利技术，但不是对本专利技术的限制。实施例1:不同培养温度对发酵产物有效成分种类和含量的影响 (1)菌种制备:将蝙蝠蛾拟青霉hepialiChen & Dai)和蛹草拟青霉{Paeci lomyces mi Ii tar is Liang)分别接种到PPDA斜面培养基,于26°C恒温培养7天； (2)三七培养基:精确称取Ig过60目筛的三七粉于100 mL三角瓶，加入0.2 mL无机盐:10 %KH2P04 和 5 %MgS04，20 mL 水，自然 pH, 121°C灭菌 30 min ； (3)液体发酵培养:将步骤(1)中制备好的菌种接入步骤(2)三七培养基中，于10°C和30。。，120 r/min 培养 10 d ； (4)液体发酵物后处理:将步骤(3)中培养好的液体发酵物抽滤，用10mL纯水清洗滤渣，合并滤液，4000 r/min离心30 min，上清液加入纯水定容至30 mL为上清处理液。取10 mL上清处理液加入等体积水饱和正丁醇超声萃取I h，静置分层后，收集上层正丁醇相60°C旋蒸至干燥，用5 mL 70%甲醇溶解，采用HPLC法检测其皂苷含量。取20 mL上清处理液烘干，取0.1 g该烘干样品加入I mL 20%甲醇溶解，采用HPLC法检测其虫草素和虫草腺苷含量。其结果见表1。 表1不同培养温度对发酵产物有效成分种类和含量的影响本文档来自技高网...

【技术保护点】
两种拟青霉属真菌对三七药材进行生物转化的方法，其特征在于该方法包括：（1）生产菌株为蝙蝠蛾拟青霉Paecilomyces?hepiali?Chen?&?Dai和蛹草拟青霉Paecilomyces?militaris?Liang；（2）?菌种制备：将蝙蝠蛾拟青霉和蛹草拟青霉分别接种到PPDA斜面培养基，于26℃恒温培养7天；（3）三七培养基：精确称取1?g过60目筛的三七粉于100?mL三角瓶，加入0.2?mL无机盐：10?%KH2PO4和5?%MgSO4，20?mL水，自然pH，121℃灭菌30?min；（4）?液体发酵培养：将制备好的菌种接入三七培养基中，于10?30℃，120?r/min培养4?16?d；（5）?液体发酵物后处理：将培养好的液体发酵物抽滤，用10?mL纯水清洗滤渣，合并滤液，4000?r/min离心30?min，上清液加入纯水定容至30?mL为上清处理液，取10?mL上清处理液加入等体积水饱和正丁醇超声萃取1?h，静置分层后，收集上层正丁醇相60℃旋蒸至干燥，用5?mL70%甲醇溶解，采用HPLC法检测其皂苷含量，取20?mL上清处理液烘干，取0.1?g该烘干样品加入1?mL?20%甲醇溶解，采用HPLC法检测其虫草素和虫草腺苷含量。...

【技术特征摘要】
1.两种拟青霉属真菌对三七药材进行生物转化的方法，其特征在于该方法包括: (1)生产菌株为蝙蝠蛾拟青霉hepialiChen & Dai和蛹草拟青霉Paecilomyces miIitaris Liang ； (2)菌种制备:将蝙蝠蛾拟青霉和蛹草拟青霉分别接种到PPDA斜面培养基，于26°C恒温培养7天； (3)三七培养基:精确称取Ig过60目筛的三七粉于100 mL三角瓶，加入0.2 mL无机盐:10 %KH2P04 和 5 %MgS04，20 mL 水，自然 pH, 121°C灭菌 30 min ； (4)液体发酵培养...

【专利技术属性】
技术研发人员：虞泓，葛锋，武阳阳，陈自宏，曾文波，杨俊媛，
申请(专利权)人：云南云百草实验室有限公司，
类型：发明
国别省市：