本发明专利技术涉及一种抗猪瘟病毒和猪圆环病毒2型感染的二联疫苗组合物及其制备和应用。该方法将猪圆环病毒2型亚单位抗原与猪瘟病毒抗原混合冻干制成抗猪瘟病毒和猪圆环病毒2型感染二联疫苗组合物，或以猪圆环病毒2型全病毒抗原灭活苗为稀释液，稀释猪瘟病毒疫苗获得抗猪瘟病毒和猪圆环病毒2型感染二联疫苗组合物的方式制成二联疫苗组合物试剂盒。该二联苗疫苗组合物不产生免疫干扰，免疫后猪瘟病毒抗原产生免疫反应加快，其保护抗体比单苗免疫后抗体提前一周达到免疫保护剂量，二联疫苗中猪圆环病毒疫苗产生的抗体与单苗免疫效果相当。该方法制苗工艺简单，生产效率高。经动物实验证明，疫苗组合物效果优于单苗免疫效果，具有很大的应用价值。
【技术实现步骤摘要】
抗猪瘟病毒和猪圆环病毒感染的疫苗组合物及制备和应用
本专利技术属于畜类生物制药
，涉及一种猪用疫苗组合物，具体说来，涉及一种抗猪瘟病毒和猪圆环病毒2型感染的二联疫苗组合物及其制备和应用。
技术介绍
猪痕(classicalswine fever, CSF)是由猪痕病毒(classical swine fevervirus,CSFV)引起的一种严重危害养猪业的毁灭性传染病。该病死亡率高达80%~90%，世界动物卫生组织(OIE)将其列为OIE疾病名录，我国也将其列为一类传染病。猪瘟的防制历来是全世界猪瘟存在国非常重视的课题，为此各国都投入了大量的人力、物力，并取得了很大的成绩。目前疫苗接种仍是控制猪瘟的重要手段。我国生产的猪瘟兔化弱毒疫苗有脾淋苗、乳兔组织苗、牛睾丸原代细胞苗及最近两年发展起来的猪睾丸传代细胞苗，这些工艺生产的猪瘟疫苗普遍存在生产工艺复杂、易受外源病毒污染、产毒滴度不高、批间差异大等缺点，给疫苗产量及质量的提高带来困难。猪圆环病毒(Porcine circovirus,PCV)属于圆环病毒科(Circoviridae)圆环病毒属(Circovirus),无囊膜,是目前发现的最小的动物病毒。猪圆环病毒现己成为全球广泛传播的猪病病毒，其具有流行范围广、各生长阶段猪感染严重、混合感染突出等特点，PCV2在我国的流行始于2000年，在我国该病毒的阳性率也呈逐年上升的趋势，目前在许多省份危害严重，给我国养猪业造成了巨大的损失，严重威胁了我国养猪业的发展。目前世界上研发的圆环病毒疫苗主要种类有:PCV2全病毒灭活疫苗CIRCOVAC ;PCVI_PCV2嵌合病毒灭活疫苗SuvaxynPCV2 ;杆状病毒表达多联疫苗CircoFLEX和PorcilisPCV。目前免疫接种仍是我国防治猪瘟和猪圆环病毒病的重要措施。但猪用疫苗品种很多，在实际操作中，多针次、多剂量、多种免疫程序难以合理安排，既繁琐、费时、费力、增加成本，且容易造成漏种，直接影响免疫效果。专利CN 101277717A公开了一种对抗猪圆环病毒2型(PCV-2)的疫苗，该疫苗由至少20微克/剂量的猪圆环病毒2型(PCV-2)与0RF-2蛋白或重组0RF-2蛋白构成，其重组蛋白优选通过由杆状病毒表达载体在昆虫细胞中表达的方式产生。该疫苗可用于保护仔猪免受PCV-2感染(并因此对抗PMWS)。该疫苗只能防治一种病，且其亚单位抗原经乳化后保存时间短。中国专利CN 101181637A公开了一种用细胞系生产猪瘟活疫苗的方法，该方法通过选择细胞系作为制苗用细胞，并对制苗用细胞的传代与培养，然后进行细胞毒种的繁殖及制苗毒液的繁殖，最后进行配苗、分装及冻干来生产猪瘟活疫苗。该方法种毒制备过程繁琐，可控性差，批间差异大，生产周期长，只能防治一种疾病。因此，目前存在的问题是需要研究开发一种生产工艺简单，疫苗质量好，可以同时防治猪瘟、猪圆环病毒病两种传染病，并能避免多次接种造成免疫应激反应及免疫效果降低的疫苗及其制备方法。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种抗猪瘟病毒和猪圆环病毒2型感染的二联疫苗组合物及其制备和应用。该二联疫苗组合物含有圆环病毒2型抗原和猪瘟病毒抗原，可以同时防治猪瘟、猪圆环病毒病两种传染病，与单苗相比，该二联疫苗组合物并没有产生免疫干扰现象，疫苗免疫效果没有下降，采用该二联疫苗组合物免疫后猪瘟病毒抗原产生的免疫反应加快了，且二联疫苗组合物中圆环病毒2型疫苗产生的抗体与单苗免疫效果相当。该二联疫苗组合物的制苗工艺简单，生产效率高。经动物实验证明，该疫苗组合物的免疫效果优于单苗免疫效果，具有很大的应用价值。为此，本专利技术提供了一种抗猪瘟病毒和猪圆环病毒2型感染的二联疫苗组合物，其包含猪瘟病毒抗原和猪圆环病毒2型抗原。在本专利技术的一个实施例中，在所述二联疫苗组合物中，猪瘟病毒抗原与猪圆环病毒2型抗原的体积比为1: 2。根据本专利技术，所述猪瘟病毒抗原为灭活形式、改良的活的形式或减毒形式的猪瘟病毒抗原中的一种或几种，并且，所述猪瘟抗原选自猪瘟全病毒、含有猪瘟病毒免疫原性氨基酸序列的嵌合病毒，任何至少含猪瘟病毒免疫原性氨基酸序列的多肽或亚单位成分中一种或几种；优选所述猪瘟病毒抗原为猪瘟病毒兔化弱毒株全病毒抗原。本专利技术中，所述猪瘟病毒抗原接种猪可诱导、刺激或增强抵抗猪瘟病毒感染的免疫应答。所述二联疫苗组合物中每剂量或每头份(2ml)含猪瘟病毒抗原为104_°TCID5Q。同样，所述猪圆环病毒2型抗原为灭活形式、改良的活的形式或减毒形式的猪圆环病毒2型抗原中的一种或几种，并且，所述猪圆环病毒2型抗原选自猪圆环病毒2型全病毒抗原，含有猪圆环病毒2型免疫原性氨基酸序列的嵌合病毒，任何至少含有猪圆环病毒2型免疫原性氨基酸序列的多肽或亚单位成分中一种或几种。优选所述猪圆环病毒2型抗原为灭活的PCV2全病毒抗原和/或含有PCV2免疫原性氨基酸序列的多肽或亚单位成份。本专利技术中，所述抗原接种猪可诱导、刺激或增强抵抗PCV2感染的免疫应答。所述二联疫苗组合物中每剂量或每头份(2ml)含PCV2全病毒抗原灭活前病毒含量至少为IO5-5TCID50 0优选所述二联疫苗组合物中每剂量或每头份(2ml)含PCV2全病毒抗原灭活前病毒含量为4.5 X IO5 tlTCID5ci~106_°TCID5(i。进一步优选所述二联疫苗组合物中每剂量或每头份(2ml)含PCV2全病毒抗原灭活前病毒含量为9X 105_°TCID5Q。在本专利技术的一个【具体实施方式】中，所述猪圆环病毒2型抗原为PCV2SH株、PCV2LG株、PCV2DBN-SX07-2的抗原或疫苗和/或PCV2亚单位抗原。优选所述猪圆环病毒2型抗原为PCV2SH株(保藏编号为CGMCC N0.23890，公开于专利文献CN 101240264A)和/或PCV20RF2 蛋白。也就是说，由于PCV2基因组大小为1767bp或1768bp，不同毒株之间核苷酸序列同源性较高，均在90 %以上，因此PCV2SH株(GenBank登录号为AY686763)、PCV2LG株(GenBank 登录号为 HM038034)、PCV2DBN_SX07_2 (GenBank 登录号为 HM641752)的抗原或疫苗均在本专利技术保护范围之内。所述猪圆环病毒2型0RF2蛋白为序列表`SEQ N0.1的DNA序列编码的蛋白或序列表SEQ N0.2的氨基酸序列的蛋白或与其同源性在75%以上的氨基酸序列的蛋白。优选所述猪圆环病毒2型0RF2蛋白为与序列表SEQ N01.DNA序列编码的蛋白或序列表SEQ N02.氨基酸序列的蛋白同源性在80%以上的氨基酸序列的蛋白。进一步优选所述猪圆环病毒2型ORF2蛋白为与序列表SEQ NOl.DNA序列编码的蛋白或序列表SEQ N02.氨基酸序列的蛋白同源性在90%以上的氨基酸序列的蛋白。本专利技术中，所述二联疫苗组合物中猪圆环病毒2型0RF2蛋白的含量为0.5~20 μ g/头份。优选所述二联疫苗组合物中猪圆环病毒2型0RF2蛋白的含量为5~10 μ g/头份。本专利技术中，所述猪圆环病毒2型抗原还包含至少一种猪圆环病毒2型灭活疫苗和基因工程亚单位疫苗。所述PCV2抗原还可本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种抗猪瘟病毒和猪圆环病毒2型感染的二联疫苗组合物，其包含猪瘟病毒抗原和猪圆环病毒2型抗原。
【技术特征摘要】
1.一种抗猪瘟病毒和猪圆环病毒2型感染的二联疫苗组合物，其包含猪瘟病毒抗原和猪圆环病毒2型抗原。2.根据权利要求1所述的二联疫苗组合物，其特征在于: 所述猪瘟病毒抗原为灭活形式、改良的活的形式或减毒形式的猪瘟病毒抗原中的一种或几种，并且，所述猪瘟抗原选自猪瘟全病毒、含有猪瘟病毒免疫原性氨基酸序列的嵌合病毒，任何至少含猪瘟病毒免疫原性氨基酸序列的多肽或亚单位成分中一种或几种； 所述猪圆环病毒2型抗原为灭活形式、改良的活的形式或减毒形式的猪圆环病毒2型抗原中的一种或几种，并且，所述猪圆环病毒2型抗原选自猪圆环病毒2型全病毒抗原,含有猪圆环病毒2型免疫原性氨基酸序列的嵌合病毒，任何至少含有猪圆环病毒2型免疫原性氨基酸序列的多肽或亚单位成分中一种或几种。3.根据权利要求2所述的二联疫苗组合物，其特征在于: 所述二联疫苗组合物中每剂量或每头份含猪瘟病毒抗原为IO4 tlTCID5ci ； 所述二联疫苗组合物中每剂量或每头份含PCV2全病毒抗原灭活前病毒含量至少为105.5TCID50 ； 所述猪痕病毒抗原为猪痕病毒兔化弱毒株全病毒抗原； 所述猪圆环病毒2型抗原为灭活的PCV2全病毒抗原和/或含有PCV2免疫原性氨基酸序列的多肽或亚单位成份。4.根据权利要求3所述的二联疫苗组合物，其特征在于: 所述二联疫苗组合物中每剂量或每头份含PCV2全病毒抗原灭活前病毒含量为4.5 X 1O5.0TCID50 ~106.ciTCID50 ； 所述猪圆环病毒2型抗原为PCV2SH株、PCV2LG株、PCV2DBN-SX07-2的抗原或疫苗和/或PCV2亚单位抗原。5.根据权利要求4所述的二联疫苗组合物，其特征在于:...
【专利技术属性】
技术研发人员：张许科，孙进忠，白朝勇，
申请(专利权)人：普莱柯生物工程股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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