一种鸡传染性支气管炎二价活疫苗及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种鸡传染性支气管炎二价活疫苗及其制备方法，该二价活疫苗由抗原和冻干保护剂组成，其中抗原包括保藏编号为：CCTCC-V201320的鸡肾型传染性支气管炎病毒K136株和鸡呼吸型传染性支气管炎病毒H120株。本发明专利技术中所述二价疫苗的制备方法是：将IBV-K136株和H120株分别经鸡胚扩大培养后，将培养产物混合均匀制备成疫苗抗原，再将疫苗抗原和冻干保护剂混合均匀后冻干制成疫苗。本发明专利技术制备的二价苗可同时预防鸡呼吸型和肾型传染性支气管炎，符合我国当前鸡传染性支气管炎的流行特征，解决了我国目前针对鸡肾型流行性传染性支气管炎无苗可用的问题，可以大范围的推广和使用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于畜禽用生物新医药
，尤其是涉及。
技术介绍
鸡传染性支气管炎(Avian Infectious Bronchitis, IB)是鸡的一种急性、高度接触性传染病，它主要侵害呼吸系统、泌尿生殖系统和消化系统。本病最早由美国Schalk和Hawn报道，临床以患鸡咳嗽、喷嚏和气管啰音的呼吸道症状为主，之后陆续在世界各国发生，1936年Beach和Schalm确定病原为病毒(呼吸型IBV)，后命名为鸡传染性支气管炎病毒(Infectious Bronchitis Virus, IBV),归入冠状病毒科,是冠状病毒的代表株。1972年邝荣禄等首次在广东证实我国也有该病发生。传染性支气管炎病毒血清型较多，常见的有 MassachussettS、Connecticat、lowa97>1wa609、Hotle、JMK、Clark333、SEl7、Florida、Arkanass99 和 Australian “T”。1962 年 Wintefield 等首次报道了肾型 IBV,主要引起肾脏肿大，尿酸盐沉积，外观呈现典型的“花斑肾”。鸡传染性支气管 炎呈世界性分布，对养鸡业的危害极大，它能使成鸡的增重和饲料报酬降低，鸡蛋的产量、质量和孵化率下降，并直接导致雏鸡死亡、肾脏病变和输卵管永久性退化；另外，IB还经常做为病因之一参与混合感染，例如诱发慢性呼吸道病(CRD)的爆发。由于IBV基因组核酸RNA复制的不连续机制及RNA聚合酶的不完全校对机制，使得病毒RNA在复制过程中易发生基因点突变、插入、缺失或重组，因此造成大量IBV变异株的出现。目前世界上已分离到的IB血清型已达30种之多，不同血清型毒株疫苗之间仅有部分或无交叉保护作用，IB的多血清型性为其免疫预防增加了难度。近年来，世界范围内鸡传染性支气管炎的流行呈上升趋势，尤其是肾病变型IB已蔓延至数十个国家和地区，给当地养鸡业造成了严重的经济损失。据流行病学调查结果显示，目前IBV在中国大部分地区流行，且以多种致病型同时存在，主要以“肾型”及“呼吸型”病毒为主。现阶段我国用于制备疫苗防治呼吸型IB的弱毒主要包括H120株、M41株等，经典的肾型弱毒主要包括W93株、Ma5株等。随着IBV病毒的变异，大部分经典的呼吸型弱毒株制备的疫苗逐渐被市场淘汰，而H120株制备的疫苗由于符合我国目前流行的呼吸型IB被市场所追捧，与大多数呼吸型IB经典株类似的是W93株也逐渐丧失了对我国目前流行的肾型IB的防治效力，且用该毒株制备的疫苗由于其副反应较大，不适合对我国的流行株的防治，因此筛选获得新的保护力好的肾型IB毒株并用于制备针对目前中国流行的肾型传染性支气管炎病毒活疫苗就显得尤为重要。目前我国尚没有能同时防治鸡肾型和呼吸型传染性支气管炎的商品化二价疫苗，为能有效防治“肾型”及“呼吸型”病毒对我国养鸡业的肆掠，常需要用相应的单价疫苗对养殖鸡群反复免疫，加大了对受免鸡群的免疫应激，同时极大的增强了人力、物力成本的消耗，更为重要的是现有市售疫苗往往对肾型鸡传染性支气管炎不具有保护作用，往往导致免疫失败。
技术实现思路
本专利技术的目的是在于提供一种鸡传染性支气管炎二价活疫苗，实现能够同时有效预防呼吸型和肾型鸡传染性支气管炎的效果，解决目前国内现有IBV疫苗对上述两种类型鸡传染性支气管炎只能提供部分预防或甚至无任何预防效果的问题，从而更大程度上避免鸡传染性支气管炎的广泛发生与流行。本专利技术的目的还在于提供上述一种鸡传染性支气管炎二价活疫苗的制备方法，即将肾型鸡传染性支气管炎弱毒K136株和呼吸型鸡传染性支气管炎弱毒H120株分别经鸡胚扩大培养后，将收获的培养产物等比混合制成疫苗抗原，再将疫苗抗原与冻干保护剂等体积混合后冻干制成疫苗产品。为实现本专利技术的上述目的，所采用的技术方案如下:一种鸡传染性支气管炎二价活疫苗，该活疫苗由抗原和冻干保护剂组成，所述抗原包括鸡肾型传染性支气管炎病毒和鸡呼吸型传染性支气管炎病毒。所述冻干保护剂包括10%蔗糖和5%脱脂乳。在上述二价活疫苗中，所述抗原中包括的鸡肾型传染性支气管炎病毒是指保藏编号为CCTCC-V201320的K136株；所述抗原中包括的鸡呼吸型传染性支气管炎病毒是指H120 株。抗原中包括的鸡传染性支气管炎病毒H120株均是经典的疫苗抗原，用其制备的疫苗对我国流行的新城疫和鸡呼吸型传染性支气管炎有良好的防治效果。抗原中包括的K136株病毒是由专利技术人针 对我国目前流行的鸡肾型传染性支气管炎病毒连续鸡胚传代136代致弱的。其有效的克服了以W93株为代表的经典肾型毒株在疫苗制备过程中副反应大、不适合我国流行株防治的缺点，本专利技术中用K136株做抗原制备疫苗尚属首次。本专利技术还提供了一种鸡传染性支气管炎二价活疫苗的制备方法，所述制备方法的特征在于是选用鸡传染性支气管炎病毒K136株和H120株并分别经鸡胚扩大培养后，将培养产物混合均匀制备成疫苗抗原，再将疫苗抗原和冻干保护剂混合均匀后冻干制成疫苗。一种上述二价活疫苗的制备方法，其中包括以下步骤:I)选用鸡传染性支气管炎病毒K136株和H120株；2)分别将IBV-K136株和IBV-H120株经尿囊腔接种鸡胚，进行病毒扩大培养；3)分别收获上述两种病毒扩大培养液，经无菌处理并进行病毒含量测定后，等体积混合均匀制备成本专利技术疫苗的抗原；4)将疫苗抗原与冻干保护剂等体积混合均匀后冻干，制备成本专利技术中的疫苗。上述制备方法具体包括以下步骤:I)选用保藏的鸡传染性支气管炎病毒K136株和H120株,用于病毒扩大培养；2)分别将肾型鸡传染性支气管炎弱毒K136株和呼吸型鸡传染性支气管炎弱毒H120株经尿囊腔接种于10日龄SPF鸡胚；37°C孵育50-60小时后分别收获全部鸡胚尿囊液作为病毒扩大培养液；3)将上述培养产物分别进行无菌处理并测定病毒含量后，将两种病毒扩大培养液产物等比混合作为半成品，即为本专利技术中疫苗的抗原；4)将疫苗抗原与冻干保护剂按照体积比1:1进行配比，经冷冻干燥后36_48h后即得疫苗，即为成品。本专利技术制备的二价苗可同时预防呼吸型和肾型鸡传染性支气管炎，符合我国当前鸡传染性支气管炎的流行特征，可以大范围的推广和使用。而且本专利技术筛选获得的K136株为我国目前流行毒株多次传代弱毒株，其产品填补了我国目前针对流行性肾型鸡传染性支气管炎无苗可用的空白，同时将其与经典的呼吸型鸡传染性支气管炎H120株制成二价疫苗，可以有效降低受免鸡群的免疫应激，同时极大的降低了人力、物力成本的消耗。【具体实施方式】为能进一步说明本专利技术的内容、特点及功效，兹例举以下实施例进一步描述本专利技术。本领域的技术人员应该理解的是，在不偏离本专利技术的精神和范围的前提下可以对本专利技术技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本专利技术的保护范围。实施例1:鸡传染性支气管炎肾型株K136株的筛选本公司从2003年-2005年分别在我国不同鸡场采集疑似鸡传染性支气管炎病毒分离毒株。病鸡主要表现为精神不振、咳嗽，常听到呼噜声，病理剖检发现除气管环有小出血点外肾脏还有明显病变，经过初步鉴定获得4株肾型传染性支气管炎病毒毒株，分别命名为 CK/IBV/QD03 株、CK/IBV/ZC03 株、CK/IBV/YT0本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种鸡传染性支气管炎二价活疫苗，该活疫苗由抗原和冻干保护剂组成，其特征在于所述抗原包括鸡肾型传染性支气管炎病毒和鸡呼吸型传染性支气管炎病毒。

【技术特征摘要】
1.一种鸡传染性支气管炎二价活疫苗，该活疫苗由抗原和冻干保护剂组成，其特征在于所述抗原包括鸡肾型传染性支气管炎病毒和鸡呼吸型传染性支气管炎病毒。2.根据权利要求1所述的一种鸡传染性支气管炎二价活疫苗，其特征在于所述抗原中包括的鸡肾型传染性支气管炎病毒是指保藏编号为CCTCC-V201320的K136株；所述抗原中包括的鸡呼吸型传染性支气管炎病毒是指H120株。3.根据权利要求1或2所述的一种鸡传染性支气管炎二价活疫苗，其特征在于所述抗原中包括的K136株病毒是由发明人针对我国目前流行的鸡肾型传染性支气管炎病毒连续鸡胚传代136代致弱获得的。4.根据权利要求1或2或3所述的一种鸡传染性支气管炎二价活疫苗，其特征在于所述抗原中包括的K136株病毒在传代致弱评价中，传至第80代病毒株受试鸡开始无死亡，第100代病毒株受试鸡开始无眼观病变，第120代病毒株开始受试鸡开始无组织学病变。5.根据权利要求1或2或3所述的一种鸡传染性支气管炎二价活疫苗，其特征在于所述抗原中包括的K136株病毒在免疫评价中，传至第136代病毒株免疫组分...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙美玉，何召庆，杨保收，陈冰，邢婧珉，李云霞，梁武，李守军，
申请(专利权)人：天津瑞普生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：