【技术实现步骤摘要】
检测猪蓝耳病病毒欧洲型与美洲型的RT-PCR引物及试剂合Si
本专利技术属于动物病毒分子生物检测
,具体涉及一对检测猪蓝耳病病毒欧洲型与美洲型的RT-PCR引物及试剂盒。
技术介绍
猪繁殖与呼吸综合征(Porcine!^productive and respiratory syndrome,PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的一种急性传染病,临床主要特征为流产、产死胎、木乃伊胎、弱胎,呼吸困难等,在发病过程中会出现两耳皮肤发绀发紫,故又称为“蓝耳病”。本病于1996年在我国首次报道。依据PRRSV结构基因序列的不同可以将其分为欧洲型(以Lelystad Virus株为代表)和美洲型(以ATCCVR-232株为代表)两种基因型,而依据其致病力的不同,又可将其中的美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒分为经典猪蓝耳病病毒和高致病性猪蓝耳病病毒两种亚型,高致病性猪蓝耳病病毒包括高致病性猪蓝耳病病毒江西株(JXAl-R株)、高致病性猪蓝耳病病毒湖南株(HuM-Fl 12株)、高致病性猪蓝耳病病毒天津株(TJ株)。欧洲地区主要流行欧洲型,美洲及亚 太地区则以美洲型为主。尽管PRRSV可以引起同一疾病,但是欧、美两型毒株之间的基因组序列及抗原性存在很大差异,血清学实验表明有一定的交叉反应。目前,我国分离获得的毒株大多数属于美洲型,近年来,有学者通过分子生物学和血清学方法鉴定了欧洲型PRRSV,表明我国猪群中已经存在欧洲型PRRSV。由于临床症状复杂,且多为混合感染,因此需要建立一种快速简便、特异性强的鉴别诊断方法,对国内猪群中的PRRSV进 ...
【技术保护点】
一对检测猪蓝耳病病毒欧洲型与美洲型的RT?PCR引物,其特征在于,所述引物的上游引物核苷酸序列为5′?ATGTGGGATAGGGTGGACA?3′,下游引物核苷酸序列为5′?AAGAACCAGAAAAGACACCCAA?3′。
【技术特征摘要】
1.一对检测猪蓝耳病病毒欧洲型与美洲型的RT-PCR引物,其特征在于,所述引物的上游引物核苷酸序列为Y -ATGTGGGATAGGGTGGACA-3 ',下游引物核苷酸序列为5' -AAGAACCAGAAAAGACACCCAA-3,。2.一种检测猪蓝耳病病毒欧洲型与美洲型的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包括权利要求1所述的引物。3.根据权利要求2所述检测猪蓝耳病病毒欧洲型与美洲型的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒还包括:RNA提取试剂、RT反应试剂、PCR反应试剂、电泳检测试剂、阴性对照和阳性对照。4.根据权利要求3所述检测猪蓝耳病病毒欧洲型与美洲型的试剂盒,其特征在于: (1)所述RNA提取试剂包括=Trizol裂解液、氯仿、异丙醇和75%的DEPC乙醇; (2)所述RT反应试剂包括:5Xbuffer缓冲液、dNTPs、HIR和下游引物E-Sd; (3)所述PCR 反应试剂包括:Taq DNA 酶、IOXbuffer 缓冲液、dNTPs,MgCl2 和 cDNA ; (4)所述电泳检测试剂包括:50倍稀释的TAE电泳缓冲液; (5)所述阴性对照包括:DEPC水; (6)所述阳性对照包括:猪蓝耳病病毒欧洲型、猪蓝耳病病毒美洲型。5.根据权利要求4所述检测猪蓝耳病病毒欧洲型与美洲型的试剂盒,其特征在于,所述猪蓝耳病病毒欧洲型为猪蓝耳病病毒欧洲型LV株;所述猪蓝耳病病毒美洲型为高致病性猪蓝耳病病毒JXAl-R株。6.一种如权利要求4-5中 任一所述检测口蹄疫A型病毒试剂盒的使用方法,包括以下步骤: (1)病毒RNA的提取: 取待检样品、阳性对照、阴性对照各500μ L于1.5ml灭菌无RNA酶污染的EP管中,加入等量Trizol裂解液进行裂解,充分振荡,室温放置10分钟...
【专利技术属性】
技术研发人员:颜健华,甘甲忠,黄宇,熊毅,曾永芳,冯淑萍,李军,张红云,
申请(专利权)人:广西壮族自治区动物疫病预防控制中心,玉林市动物疫病预防控制中心,
类型:发明
国别省市:
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