美人蕉黄斑驳病毒巢式PCR检测试剂盒及其检测方法技术

本发明专利技术涉及一种美人蕉黄斑驳病毒巢式PCR检测试剂盒及其检测方法，专用于美人蕉黄斑驳病毒的检测。该试剂盒包括：外侧上游引物、外侧下游引物、内侧上游引物、内侧下游引物、PCR?Buffer、dNTPs、Mgcl2、Taq?DNA聚合酶、阳性对照、阴性对照和ddH2O。本发明专利技术根据美人蕉黄斑驳病毒基因序列设计2对特异性引物，以提取的DNA为模板进行第一轮PCR扩增，再以第一轮PCR产物为模板进行第二轮PCR扩增，扩增产物通过琼脂糖凝胶电泳检测，如果出现大小为352bp的特异性目的片段，则判定检测的病毒为美人蕉黄斑驳病毒。本发明专利技术利用巢式PCR技术对美人蕉黄斑驳病毒进行检测，具有特异性强、灵敏度高、检测用时短的优点，能够满足进出境口岸检疫及农业生产的需要。

【技术实现步骤摘要】
美人蕉黄斑驳病毒巢式PCR检测试剂盒及其检测方法
本专利技术涉及ー种美人蕉黄斑驳病毒巢式PCR检测试剂盒及其检测方法，属于植物检疫
，适用于进出境及农业生产上美人蕉黄斑驳病毒的快速检测和监测。
技术介绍
美人蕉黄斑驳病毒(Canna yellow mottle virus,CaYMV)属于花椰菜花叶病毒科(Caulimo Viridae)、杆状DNA病毒属(Badnavirus)成员，最早发现于日本美人蕉上。CaYMV病毒粒子呈杆状(120-130nmX28nm)，病毒基因组为环状双链DNA (含3个ORF)。CaYMV的寄主范围较窄，已报道的自然寄主为美人蕉，该病毒侵染美人蕉后可以产生多种症状，典型症状包括叶片产生褪绿斑、叶脉黄化、茎杆和花上出现条斑等，危害美人蕉的正常生长，影响其观赏价值和经济价值。CaYMV主要分布在日本、美国。CaYMV引起的美人蕉黄斑驳病防治极其困难，近年来在美国ー些地区发生严重，当地被迫采取销毁病株的手段来防止其大面积扩散。由于CaYMV可随美人蕉种苗的运输而进行远距离传播，因此建立快速、有效的检测方法对预防和控制该病毒的发生具有重要意义本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种美人蕉黄斑驳病毒巢式PCR检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：1）外侧上游引物：10μmol/L，引物序列为5’?TAGGGCAGTCAAGGATTAAGC?3’；2）外侧下游引物：10μmol/L，引物序列为5’?CAATCTTGGCGTAGAACGAG?3’；3）内侧上游引物：10μmol/L，引物序列为5’?ACTGCGTCAGTTTCTCGG?3’；4）内侧下游引物：10μmol/L，引物序列为5’?GGCCTGGATCTCAGCATCTA?3’；5）PCR?Buffer：10×；6）dNTPs：10mmol/L；7）Mgcl2：25mmol/L；8）Taq?DNA聚合酶：2....

【技术特征摘要】
2013.09.18 CN 201310430311.71.ー种美人蕉黄斑驳病毒巢式PCR检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括:1)外侧上游引物:IOii mo 1/L，引物序列为5’ -TAGGGCAGTCAAGGATTAAGC-3’ ；2)外侧下游引物:10 ii mol/L，引物序列为 5 ’ -CAATCTTGGCGTAGAACGAG-3 ’ ；3)内侧上游引物:10 y mol/L,引物序列为5’ -ACTGCGTCAGTTTCTCGG-3’ ；4)内侧下游引物:10iimol/L，引物序列为5’-GGCCTGGATCTCAGCATCTA-3’；5)PCR Buffer:10X ；6)dNTPs:10mmol/L ；7)Mgcl2:25mmol/L ；8)Taq DNA聚合酶:2.5U/U L ;9)美人蕉黄斑驳病毒的阳性对照样品；10)不含美人蕉黄斑驳病毒的阴性对照样品；11) ddH20。2.利用权利要求1所述的美人蕉黄斑驳病毒巢式PCR检测试剂盒的检测方法，其特征在于，包括以下步骤: 1)第一轮PCR反应:在PCR管中加入待测样品DNA4iiL，按每管加浓度为2.5U/y LTaq DNA 聚合酶 0.L、浓度为 10mmol/L dNTPs 0.5u LUOXPCR Buffer 2.5yL、浓度为25mmol/L Mg...

【专利技术属性】
技术研发人员：沈建国，虞赟，蔡伟，陈智明，张永江，闫诚，
申请(专利权)人：福建出入境检验检疫局检验检疫技术中心，
类型：发明
国别省市：