本发明专利技术一种利用三联柱层析技术从地黄中快速分离梓醇的方法，属于中药技术领域。在分离、纯化过程中，依次使用D101型大孔吸附树脂、H103型大孔吸附树脂和活性炭三种常用色谱填料，即可从中药地黄中获得纯度高于95%的梓醇。与现有技术相比，本发明专利技术具有以下优势：所选用的三种填料经常规再生处理后均可以反复利用；资金投入少，运行成本低；在分离与纯化过程中仅使用乙醇和水，更加符合环保要求；在进行三联柱层析前，提取液和大孔树脂洗脱液均无需浓缩和进行除杂处理，极大地简化了操作步骤和缩短了运行时间，并且降低了人力和能源消耗。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术，属于中药
。在分离、纯化过程中，依次使用D101型大孔吸附树脂、H103型大孔吸附树脂和活性炭三种常用色谱填料，即可从中药地黄中获得纯度高于95%的梓醇。与现有技术相比，本专利技术具有以下优势：所选用的三种填料经常规再生处理后均可以反复利用；资金投入少，运行成本低；在分离与纯化过程中仅使用乙醇和水，更加符合环保要求；在进行三联柱层析前，提取液和大孔树脂洗脱液均无需浓缩和进行除杂处理，极大地简化了操作步骤和缩短了运行时间，并且降低了人力和能源消耗。【专利说明】—种利用三联柱层析技术从地黄中快速分罔梓醇的方法
本专利技术涉及快速分离梓醇的方法，特别涉及三联柱层析技术从中药地黄中快速分离梓醇的方法，属于中药
。
技术介绍
中药地黄(Rehmanniae Radix)为玄参科(Scrophulariaceae)多年生草本植物地j^XRehmannia glutinosa Libosch.)的干燥块根,性甘、寒,归心、肝、肾经,具有清热凉血、养阴生津的功效，主治热入营血、温毒发斑、吐血衄血等。药理实验证明，环烯醚萜苷类化学成分是地黄的主要药效物质基础，尤其以梓醇具有突出的抗癌、神经保护、降血糖及抗肝炎病毒等作用，为2010版《中国药典》中地黄的质量控制指标成分。目前，地黄中梓醇的分离方法主要有三种:一、以水或含水醇提取，回收溶剂后，有机溶剂萃取除杂，水溶液载入大孔吸附树脂或活性炭单一填料，以水和不同浓度乙醇洗脱，收集含有梓醇的流分，减压浓缩，干燥，反复重结晶。例如，中国专利200710159335.8中，将地黄80%乙醇提取液回收乙醇，水分散，石油醚、乙酸乙酯依次萃取除杂，萃余水溶液载入H103大孔吸附树脂后以水和含水乙醇梯度洗脱，收集80%乙醇流分，减压浓缩并干燥，干燥物以甲醇-乙醇混合溶液反复重结晶，最终得到梓醇；二、将水提液进行多级膜分离后，载入活性炭和多种树脂组成的串联柱层析系统，以水和不同浓度乙醇洗脱，收集含有梓醇的流分，减压浓缩，干燥。例如，中国专利200710026330.8中，将水提取液经过微滤、超滤、纳滤三级膜过滤过程，再以活性炭、大孔吸附树脂、阳离子交换树脂和阴离子交换树脂连续柱层析系统进行分离，最终得到纯度约为65%的梓醇产品；三、以水、醇或含水醇提取，初步除杂后，载入大孔吸附树脂柱以水和含水乙醇梯度洗脱，收集含有梓醇的洗脱液，浓缩，再以混合溶剂进行硅胶柱层析分离，收集流份，回收溶剂并浓缩，结晶或重结晶，最终得到梓醇。例如，中国专利201110184807.1，将水提液减压浓缩，浓缩液中加入95%乙醇，静置过夜，上清液浓缩后，载入XAD-16大孔树脂柱，先用水洗脱，再用乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩，浓缩物再如硅胶柱，以乙酸乙酯-甲醇混合溶剂洗脱，收集目标流份，减压浓缩，干燥，含水乙醇重结晶，得到纯度约为95%的梓醇；中国专利200810016005.8、201010529437.6和201110275524.8中，将由鲜地黄制得的含梓醇水溶液，以活性炭或大孔吸附树脂分离，得到粗品，再载入硅胶柱层析用氯仿-甲醇、乙酸乙酯-乙醇或甲醇-乙酸乙酯等混合溶剂洗脱，浓缩，干燥或再以甲醇、丙酮-水进行结晶等操作，得到梓醇。此外，2008年张秀丽等(中国生物工程杂志，第28卷，第I期，P65飞9)将鲜地黄匀浆液以95%乙醇温浸提取，提取液浓缩后以DlOl大孔吸附树脂分离，收集5%乙醇洗脱液，浓缩干燥后，进行硅胶柱层析，用氯仿-甲醇混合溶剂洗脱，浓缩，干燥，得到纯度为90%的梓醇；2010年刘海洋等(中医药信息，第27卷，第I期，P8618)以80%乙醇加热回流提取，提取液浓缩干燥后，以水溶解，载入H103大孔吸附树脂分离，用水和含水乙醇洗脱，收集含有梓醇的流份，减压浓缩至干，得到纯度约为40%的梓醇，此后用甲醇-乙醇混合溶剂反复重结晶处理，获得了梓醇。以上方法存在以下几处不足，难以满足规模化生产梓醇的要求:一、以硅胶柱进行分离，填料不能得以反复利用，而且梓醇的极性大，严重的死吸附导致梓醇大量损失；二、纯化过程中使用石油醚、乙酸乙酯、氯仿、甲醇、丙酮等有毒、易燃、管制试剂，环境负担重，管理成本高；三、在进行柱层析前，提取液需要经过浓缩、初步除杂等处理，人力、时间和能源消耗大；四、微滤、超滤、纳滤等膜分离技术资金投入大，运行成本高，而且最终产品的质量不佳。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术存在的以上四点不足，通过联用DlOl型大孔吸附树脂、H103型大孔吸附树脂和活性炭，提供。本专利技术的技术构思如下: 梓醇为环烯醚萜苷类化合物，极性大，DlOl型和H103型大孔吸附树脂均为非极性树月旨，两者常被用于从地黄中分离梓醇，但是单独使用时效果不佳，需结合硅胶柱层析、重结晶等方法提高产品纯度，原因在于前者的比表面约为400m2/g，孔径约为lOOnm，对梓醇的吸附作用很弱，在上样和以水进行洗脱时，梓醇与糖类、氨基酸等成分一同流出；后者的比表面为100(Tll00m2/g，孔径约为8.5^9.5nm，对梓醇的吸附作用较前者明显增强，而对糖类、氨基酸等强极性成分几乎没用吸附，但是在以含水醇洗脱时，梓醇易与提取液中的水溶性色素、毛蕊花糖苷一同流出；活性炭是另一种常用于分离梓醇的填料，但是由于地黄中的毛蕊花糖苷与梓醇同为单糖苷，在洗脱过程中，两者难以分离。本专利技术的技术构思是创新性地按照特定顺序联合使用DlOl型大孔吸附树脂、H103型大孔吸附树脂和活性炭三种可反复使用的色谱填料，首先由DlOl型大孔吸附树脂除去地黄提取液中的水溶性色素和毛蕊花糖苷，再由H103型大孔吸附树脂除去一部分糖类和氨基酸等成分，最后由活性炭除去剩余的杂质，即可得到纯度达95%以上的梓醇产品；在整个分离过程中，唯一使用的有机溶剂为安全无毒的乙醇；此外，除最后一步减压浓缩至干外，无需除去乙醇等溶剂，也无需特殊设备，并且避免了导致大量损失的硅胶柱层析，操作简便，可以快速地用于从地黄中制备高纯度的梓醇。本专利技术，按照下述步骤进行: 1)取市售地黄，于60°c以下烘干，粉碎，过20目筛，收集细粉，按每千克地黄加入8~12L水,加热至微沸,煎煮2~3次，每次f 2 h,滤过，收集滤液，得到水煎液； 2)以步骤(1)中地黄质量:大孔吸附树脂质量为1: 5~10 (kg/kg)称取DlOl型大孔吸附树脂，用乙醇湿法装柱并进行常规预处理，将I)中水煎液载入DlOl型大孔吸附树脂柱，以水进行洗脱，流速:树脂质量为0.5-1: I (L.h-1，每小时流出体积/质量)，洗脱体积:树脂质量为4飞:I (L/kg)，收集水洗脱液； 3)以步骤(1)中地黄质量:大孔吸附树脂质量为1: 5~10 (kg/kg)称取H103型大孔吸附树脂，用乙醇湿法装柱并进行常规预处理，将2)中水洗脱液载入H103型大孔吸附树脂柱，以水进行洗脱，流速:树脂质量为0.5^1:1 (L.h_Vkg)，洗脱体积:树脂质量为4飞:I (L/kg)，弃去水洗脱液；换用10%~30%乙醇(tyV)进行洗脱，流速:树脂质量为0.5^2:1 (L.h_7kg)，洗脱体积:树脂质量为4~6: I (L/kg)，收集10%~30%乙醇(iyV)本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种利用三联柱层析技术从地黄中快速分离梓醇的方法，其特征在于按照下述步骤进行：1）取市售地黄，于60℃以下烘干，粉碎，过20目筛，收集细粉，按每千克地黄加入8~12?L水，加热至微沸，煎煮2~3次，每次1~2?h，滤过，收集滤液，得到水煎液；2）以步骤（1）中地黄质量：大孔吸附树脂质量为1：5~10（kg/kg）称取D101型大孔吸附树脂，用乙醇湿法装柱并进行常规预处理，将1）中水煎液载入D101型大孔吸附树脂柱，以水进行洗脱，流速：树脂质量为0.5~1：1（L·h?1/kg，每小时流出体积/质量），洗脱体积：树脂质量为4~6：1（L/kg），收集水洗脱液；3）以步骤（1）中地黄质量：大孔吸附树脂质量为1：5~10（kg/kg）称取H103型大孔吸附树脂，用乙醇湿法装柱并进行常规预处理，将2）中水洗脱液载入H103型大孔吸附树脂柱，以水进行洗脱，流速：树脂质量为0.5~1：1（L·h?1/kg），洗脱体积：树脂质量为4~6：1（L/kg），弃去水洗脱液；换用10%~30%乙醇（v/v）进行洗脱，流速：树脂质量为0.5~2：1（L·h?1/kg），洗脱体积：树脂质量为4~6：1（L/kg），收集10%~30%乙醇（v/v）洗脱液；4）以步骤（1）中地黄质量：颗粒状活性炭质量为1：6~10（kg/kg）称取颗粒状或粉末状商品活性炭，进行常规预处理后用水湿法装柱，将3）中10%~30%（v/v）乙醇洗脱液载入活性炭柱，以10%~30%乙醇（v/v）进行洗脱，流速：活性炭质量为0.5~1：1（L·h?1/kg），洗脱体积：活性炭质量为3~6：1（L/kg），弃去洗脱液，换用50%~60%乙醇（v/v）进行洗脱，流速：活性炭质量为0.5~1：1（L·h?1/kg），洗脱体积：活性炭质量为3~6：1（L/kg），收集50%~60%乙醇（v/v）洗脱液，60℃以下减压浓缩至干，即得白色固体为梓醇。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：杨欢，王海艳，顾芹英，沈玉萍，夏国华，
申请(专利权)人：江苏大学，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。