本发明专利技术提供了一种抑制对血液中存在的血细胞以外的细胞的损坏、并对红细胞和白细胞产生损坏的简便的处理方法。在一种实施方式中，涉及一种含有血液成分的试样的处理方法，包括混合含有血液成分的试样与含有表面活性剂A的液体，所述表面活性剂A为通式R1-O-（EO）n-R2（I）所表示的非离子性表面活性剂。在其他的方式中，涉及一种含血液成分的试样的处理方法，包括混合含有血液成分的试样与含有表面活性剂A和表面活性剂B的液体、或者含有表面活性剂A的液体及含有表面活性剂B的液体，所述表面活性剂A为通式R1-O-（EO）n-R2（I）表示的非离子性表面活性剂，所述表面活性剂B对红细胞的溶解性高于所述表面活性剂A对红细胞的溶解性。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术提供了一种抑制对血液中存在的血细胞以外的细胞的损坏、并对红细胞和白细胞产生损坏的简便的处理方法。在一种实施方式中，涉及一种含有血液成分的试样的处理方法，包括混合含有血液成分的试样与含有表面活性剂A的液体，所述表面活性剂A为通式R1-O-（EO）n-R2（I）所表示的非离子性表面活性剂。在其他的方式中，涉及一种，包括混合含有血液成分的试样与含有表面活性剂A和表面活性剂B的液体、或者含有表面活性剂A的液体及含有表面活性剂B的液体，所述表面活性剂A为通式R1-O-（EO）n-R2（I）表示的非离子性表面活性剂，所述表面活性剂B对红细胞的溶解性高于所述表面活性剂A对红细胞的溶解性。【专利说明】
本公开涉及含血液的试样的处理方法、分离含血液的试样中的稀少细胞以及核酸的方法、CTC数测定方法、以及试剂盒。
技术介绍
血液的细胞成分为红细胞、白细胞、血小板，但是血液中也稀少地存在除此以外的细胞。作为其中一个例子，可以举出血中循环肿瘤细胞/CTC (Circulating Tumor Cell)。认为癌的转移是由于癌细胞通过血管、淋巴管运送到体内的其他部位并增殖而引起的。并且，报告了血液中的CTC数与癌的转移的可能性以及预后是相关的，并且已知为了作为癌(尤其是乳癌等转移性癌)的诊断、预后诊断、以及治疗效果的预测或判定的指标，而测定血液中的 CTC 数的计数、CTC 的核酸(Circulating Tumor cell ；Evolving Evidence andFuture Challenges.The oncologist2009 ;14 ;1070_1082)。作为血液中的CTC的分离、检测技术，有如下方法:通过针对CTC特异性表面抗原的抗体来捕捉分离血液中的CTC的方法(特许3834326号、特开2007-178193)、利用了粘附的分离方法(W02005/043121、W02006/078994 )、利用密度梯度的分离方法(特开2010 — 075073、W095/20429)、利用过滤器的分离方法(W02006/116327、W02008/155398)、测定CTC的端粒酶活性的方法(W02010/071114)、通过使用了低渗溶液的溶血的分离方法(W02004/056978)、利用了流式细胞仪的方法(W02008/057437)等。为了检测、定量、计数用上述分离的物质，进行PCR、利用了有亲和性的物质的核酸的测定，另外，进行组合了抗体、荧光染料的光学CTC的测定是一般的。
技术实现思路
专利技术要解决的问题为了在含血液成分的试样中的稀少细胞活着的情况下分析，或者分离并培养，需要在不对所述稀少细胞产生大的损坏的情况下，高效地去除血液中的细胞成分(尤其是红细胞及白细胞)。因此，本公开提供一种抑制对含血液成分的试样中的血细胞以外的细胞的损坏、并可迅速排除血细胞的简便的处理方法。另外，提供一种通过去除血细胞等来提高CTC的纯度从而可抑制CTC的计数、核酸测定时的噪声、并可进行CTC的检测的简便的处理方法、或者分离或检测方法。用于解决问题的手段本公开在一个方式中，涉及一种，包括混合含血液成分的试样与含有表面活性剂A的液体，不使用固定剂，所述表面活性剂A为下述通式(I)表示的非离子性表面活性剂。R1-O- (EO) n-R2 (I)本公开在又一方式中，涉及一种，包括:混合含有血液成分的试样与含有表面活性剂A及表面活性剂B的液体、或含有表面活性剂A的液体及含有表面活性剂B的液体，所述表面活性剂A为下述通式(I)表示的非离子性表面活性剂，所述表面活性剂B对红细胞的溶解性高于所述表面活性剂A对红细胞的溶解性。R1-O- (EO) n-R2 (I)本公开在又一方式中，涉及一种，包括:混合含有血液成分的试样与含有表面活性剂A及表面活性剂B的液体、或含有表面活性剂A的液体及含有表面活性剂B的液体，所述表面活性剂A为聚氧乙烯辛基十二烷基醚(Ε0=23?50)，所述表面活性剂B为对红细胞的溶解性高于所述表面活性剂A对红细胞的溶解性的非离子性表面活性剂，并且为从聚氧乙烯聚氧丙烯烷基醚、聚氧乙烯辛基十二烷基醚(Ε0=8?22)、聚氧乙烯脂肪酸酯、蔗糖脂肪酸酯、山梨糖醇脂肪酸酯、以及它们的组合所组成的组中选择的非离子性表面活性剂。本公开在又一方式中，涉及一种分离或检测含血液成分的试样中的稀少细胞或核酸的方法，包括:通过本公开涉及的处理方法处理含有血液成分的试样；以及从处理后的试样中分离或检测稀少细胞或核酸。本公开在又一方式中，涉及一种测定含血液成分的试样中的CTC (循环肿瘤细胞)数或CTC的核酸的方法，包括:通过本公开涉及的处理方法来处理含有血液成分的试样；或者通过本公开涉及的分离或检测方法分离或检测血液成分中的稀少细胞或核酸。本公开在又一方式中，涉及一种含血液成分的试样中的稀少细胞的分析方法，包括:在通过本公开涉及的处理方法处理含有血液成分的试样之后，通过包括细胞的动态观察或活性测定的方法进行分析。本公开在又一方式中，涉及一种试剂盒，用于本公开涉及的处理方法、本公开涉及的分离或检测方法、本公开涉及的CTC数或CTC的核酸的测定方法、和/或本公开涉及的分析方法，所述试剂盒包含所述表面活性剂A和/或所述表面活性剂B。专利技术效果根据本公开，能够抑制对含有血液的试样中存在的血细胞以外的细胞的损坏，并溶解红细胞、对白细胞产生损坏。【专利附图】【附图说明】图1是示出表面活性剂N0.2和表面活性剂N0.1的混合物的混合比与癌细胞的生存率之间的关系的曲线图的一个例子；图2是示出表面活性剂N0.3和表面活性剂N0.1的混合物的混合比与癌细胞的生存率之间的关系的曲线图的一个例子；图3是对表面活性剂混合物的处理之后用离心分离回收的癌细胞进行培养的结果的显微镜观察照片的一个例子；图4是显微镜观察对没有进行表面活性剂混合物的处理的(A)试样以及进行了表面活性剂混合物的处理的(B)试样进行过滤处理之后的试样的照片的一个例子；图5是对含有经绿色荧光染色的癌细胞(SNU-1)和经蓝色荧光染色的白细胞的含癌细胞的血液试样进行了表面活性剂混合物的处理之后的荧光显微镜观察的结果的一个例子；图6是对含有癌细胞(SNU-1)悬浮液或白细胞的含血液成分的试样进行了表面活性剂混合物的处理之后(A)的试样以及未进行表面活性剂混合物的处理(B)的试样进行库尔特式的流式细胞仪分析的结果的一个例子；图7是对含有癌细胞(SNU-1)和白细胞的含有血液成分的试样进行了表面活性剂混合物的处理之后(A)的试样以及未进行表面活性剂混合物的处理(B)的试样用库尔特式的流式细胞仪分析后的结果的一个例子；图8是示出对悬浮在生理盐水中的含癌细胞(SNU-1)或含有白细胞的含血液成分的试样用各种PH的表面活性剂混合物进行处理之后的生存率的曲线图的一个例子。【具体实施方式】预计今后循环肿瘤细胞(Circulating Tumor Cell:CTC)等血液中的稀少细胞的分析会更加盛行，并需求更简便、损耗少的方法。IOml的血液中通常含有数百亿个红细胞、数千万个白细胞，CTC为O?数千个左右。因此，直接分析CTC时的技术问题很多，例如需要分离、浓缩等处理。因此，期待开发从血液中更本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种含血液成分的试样的处理方法，包括：混合含血液成分的试样与含有表面活性剂A及表面活性剂B的液体、或者含有表面活性剂A的液体及含有表面活性剂B的液体；所述表面活性剂A为下述通式（I）所示的非离子性表面活性剂，所述表面活性剂B对红细胞的溶解性高于所述表面活性剂A对红细胞的溶解性，R1?O?（EO）n?R2???（I）所述式（I）中，R1表示具有支链的碳数为12～40的烃基，EO表示氧乙烯基，n为EO的平均附加摩尔数，为23～50，R2为氢原子或碳数为1～3的烃基。
【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：高木英纪，
申请(专利权)人：爱科来株式会社，
类型：发明
国别省市：
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