一种出芽短梗霉菌OF-01菌株（CGMCC?No.7609）及用它制备烟草内源性衍生香料的方法和其在烟用添加剂中的应用。利用烟叶碎片作为原料，通过出芽短梗霉（Aureobasidium?pullulans）OF-01菌株发酵，产生胞外多聚糖（短梗霉多糖）、酶、抗菌素、单细胞蛋白、挥发性香气成分等多种产物，通过对发酵后烟叶碎片进行提取、浓缩，制备烟草内源性衍生香料，从而减少非烟草来源的香精香料产品在卷烟中的应用，实现烟叶碎片的再利用。致香成分分析表明，含多种烟草香气成分和其他衍生香气成分。加香评吸实验结果表明，该香料具有明显提调烟香、醇和烟气、降低刺激性、掩盖杂气和改善卷烟吸味的效果，成本低、香气成分丰富、对人畜安全等特点，可作为香料在卷烟生产中使用。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】一种出芽短梗霉菌OF-01菌株（CGMCC?No.7609）及用它制备烟草内源性衍生香料的方法和其在烟用添加剂中的应用。利用烟叶碎片作为原料，通过出芽短梗霉（Aureobasidium?pullulans）OF-01菌株发酵，产生胞外多聚糖（短梗霉多糖）、酶、抗菌素、单细胞蛋白、挥发性香气成分等多种产物，通过对发酵后烟叶碎片进行提取、浓缩，制备烟草内源性衍生香料，从而减少非烟草来源的香精香料产品在卷烟中的应用，实现烟叶碎片的再利用。致香成分分析表明，含多种烟草香气成分和其他衍生香气成分。加香评吸实验结果表明，该香料具有明显提调烟香、醇和烟气、降低刺激性、掩盖杂气和改善卷烟吸味的效果，成本低、香气成分丰富、对人畜安全等特点，可作为香料在卷烟生产中使用。【专利说明】—种出芽短梗霉菌0F-01菌株及用它制备烟草内源性衍生香料的方法
本专利技术属于烟用添加剂制备
，具体涉及一种出芽短梗霉菌0F-01菌株及用它制备烟草内源性衍生香料的方法，本专利技术还涉及其在卷烟中的应用。
技术介绍
烟用香料是专供各种烟草制品加香矫味使用的一种添加剂。烟用香料多为人工调配的、含两种或两种以上香气成分的混合物，一般分为天然香料和人工合成香料(余金恒等，2011)。天然香料可来源于植物、动物和微生物，根据不同的提取方法可得到精油、浸膏、净油、香树脂、酊剂等不同的产品。天然烟用香料加入卷烟后经燃烧裂解能释放出香气香味，在卷烟生产中占据着非常重要地位。在国内，各烟草大省都有自己的卷烟品牌，而每一品牌系列的香烟都有其独特的烟叶原料、香料配方和卷烟工艺，进而保证该品牌香烟的独特风味。随着香烟品牌竞争战略意识的加强，从烟叶原料中提取内源性香气成分以及利用微生物发酵转化产生的衍生香气成分是现阶段烟草香料的重要发展方向之一(李旭华，2011)。在卷烟生产加工过程中，产生了大量的烟末、烟叶碎片等烟草废弃物，占烟叶总产量的10-25%。如何有效的利用这些烟叶资源，采用现代微生物发酵技术和现代生化技术，对这些废弃烟叶碎片进行研究开发，提高其利用率，具有重要意义。从复烤线碎片、制丝线碎片中提取的烟叶内源性香料及其衍生香不仅能维持和提升原有香烟品牌的风格特征，而且成本低，稳定性好，从而在卷烟加工中有广阔的应用前景(王娜等，2010)。出芽短梗霉(Aureobasidium pullulans)是一类与酵母有密切关系的真菌。出芽短梗霉能产生胞外多聚糖、酶、抗菌素、单细胞蛋白、挥发性香气成分等多种产物，对人体无任何副作用，广泛地用于医药制造，食品包装，水果和海产品保鲜，化妆品工业等(崔堂兵等,2002)。目前,未见有从出芽短`梗霉(Aureobasidium pullulans)分离得到的芽短梗霉菌株0F-01的报道。利用该菌株发酵烟叶内源性组分能产生多种衍生香料成分，在卷烟加工中有应用前景。
技术实现思路
本专利技术的目的在于通过利用廉价烟叶碎片，提供从烟叶表面微生物中筛选在烟草香料方面具有工业化生产前景的菌株芽短梗霉菌株0F-01，并提供借助微生物发酵技术，利用微生物转化烟叶内源性香气成分制备烟草内源性衍生香料的方法，实现了废弃烟叶的循环利用和减少了非烟草来源的香精香料在卷烟生产中的应用。本专利技术的目的通过以下技术方案予以实现:一种出芽短梗霉菌株0F-01 (CGMCC N0.7609)，其具有产生短梗霉多糖、酶、抗菌素、单细胞蛋白、挥发性香气的能力。出芽短梗霉菌株0F-01 (CGMCC N0.7609)的ITS基因序列在GeneBank数据库中的序列号为JQ916049，该基因序列用于鉴别0F-01菌株。出芽短梗霉菌株0F-01 (CGMCC N0.7609)作为烟用添加剂出芽短梗霉菌株0F-01 (CGMCC N0.7609)在制备烟叶内源性衍生香料中的应用。用出芽短梗霉菌株0F-01 (CGMCC N0.7609)制备烟草内源性衍生香料的方法，将0F-01菌株通过试管斜面种子培养、液体种子培养、菌株发酵罐大量培养获得的菌体用于烟叶碎片发酵，发酵结束后，通过提取、浓缩得烟草内源性衍生香料。所述的制备方法中，0F-01 (CGMCC N0.7609)菌株试管斜面种子培养是将该菌株的菌体接种到MYP培养基即麦芽提取物7g，酵母提取物0.5g，蛋白胨2.5g，琼脂20g，水1L，pH7.0斜面上，20-30°C下培养4-10d后获得斜面种子，适宜的培养条件是28°C下培养7d ；0F-01菌株液体种子培养是将斜面种子接种到三角瓶中的MYP的液体培养基中，15-30°C，50-300rpm条件下摇床培养3-7d获得。最适培养条件为28°C，200rpm条件下培养4d ；OF-OI菌株发酵罐大量培养是将液体种子按1-5% (V/V)的比例接入发酵罐中的MYP液体培养基中，在20-1000L发酵罐中的培养条件为:温度26-32°C，搅拌速度150_250rpm，发酵时间4-6do所述的制备方法中，烟叶碎片发酵是取Ikg烟叶碎片，加入IOOg糖蜜，用清水将湿度调节到30-50%，混合均匀后于蒸汽湿热高压灭菌锅中121°C灭菌lh，冷却后接种0F-01菌株液体种子IOOmL,混合均匀后在25-35°C下温箱中培养7_15d。所述的制备方法中，烟叶内源性衍生香料的制备是将2kg水加入烟叶发酵产物中，混合均匀后转入烧瓶中，在100°C下回流提取2h，用纱布过滤去除残渣后得到的滤液在60°C下减压浓缩到一半体积；加入3-5倍体积的95%的乙醇，静置10-24h，取上清液并在60°C下减压浓缩到五分之一体积，得到的烟膏即为烟叶内源性衍生香料，利用GC/MS测定香料的香气成分。本专利技术与传统的方法相比较，具有以下明显优点: (I)本专利技术首次将出芽短梗霉0F-01菌株用于发酵烟叶碎片，并制备烟草内源性衍生香料。(2)所制成的烟草内源性香料应用到卷烟中效果非常明显，能起到提调烟香、醇和烟气、降低刺激性、改善口感的作用。(3)以烟叶碎片为原料，大大节约了成本，使得烟叶的利用率进一步提高。(4)所制成的烟草内源性香料应用到卷烟增香，操作简便、成本低廉、具有操作性、规范性和可控性强的特点，便于实现大规模工业化生产。【具体实施方式】为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下通过实施例及试验数据，对本专利技术进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。保藏生物材料的说明本专利技术涉及的短梗霉菌OF - 01的菌株已经保存在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；地址:中国.北京市朝阳区北辰西路I号院3号；保藏日期:2013年5月13日；保藏号为CGMCCN0.7609 ;分类命名:出芽短梗霉Aureobasidium pullulans。实施例1:1、本专利技术微生物OF-OI菌株来源:将仓储陈化3年的红花大金元烟叶样品粉碎，取5克粉碎后的烟末放入装有IOOml无菌水的三角瓶中，在100-250rpm摇床上震荡30分钟后过滤去除烟末，用悬液涂布MYP培养基(麦芽提取物7g，酵母提取物0.5g，蛋白胨2.5g，琼脂20g，水1L，pH7.0)平板，200微升/皿，共50皿，在28°C温箱中培养5-7天后用MYP培养基本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种出芽短梗霉菌株OF?01（CGMCC?No.7609），其具有产生短梗霉多糖、酶、抗菌素、单细胞蛋白、挥发性香气的能力。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：杨蕾，杨清，杨乾栩，段焰青，何雪峰，李勇，蔡波，党立志，师建全，杨洪明，周国福，冯洪涛，莫明和，
申请(专利权)人：红云红河烟草集团有限责任公司，
类型：发明
国别省市：
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