本发明专利技术公开了一株出芽短梗霉菌菌株Aureobasidium pullulans F134M，该菌株经分离、筛选、鉴定、诱变获得，已保藏于广东省微生物菌种保藏中心保藏，保藏编号为：GDMCC No：60070。本发明专利技术的出芽短梗霉菌可以耐受并吸附重金属汞，可以用于重金属汞污染的水体及土壤等的治理。
Fungus strain resistant to heavy metal mercury and application thereof
The present invention discloses a strain of Aureobasidium pullulans Aureobasidium pullulans F134M, obtained the strain by isolation, screening, identification, mutation, has been preserved in Guangdong province microbial culture collection center of preservation, the preservation number is: GDMCC No:60070. The present invention can be used for the adsorption and adsorption of heavy metal mercury, and can be used for the treatment of heavy metal mercury polluted water and soil.
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物
或者环境治理
，涉及用于治理重金属汞污染的菌株，以及获得该菌株的方法及该菌株在重金属汞污染治理中的应用。
技术介绍
汞及其化合物是重要的工业原料，被广泛应用于冶金、化工、电子、油漆、塑料、制药、农药等领域，但在大量使用汞及其化合物后，含汞物质会通过各种途径进入环境中，引起严重的环境污染问题。汞重金属盐类难以去除，因此会在自然环境中长期存在，并且会通过食物链富集危及人类健康，如在日本水俣出现的“水俣病”。慢性汞中毒会出现头痛、精神迟钝、肢体麻木和疼痛、 头晕、运动失调、肌肉震颤等症状。汞污染的治理方法主要有化学沉淀法、金属还原法、活性碳吸附法、离子交换法、过滤法、电解法、羊毛吸收法、微生物法等。其中，微生物法是近年来新兴的方法，具有无二次污染、适用范围广、成本低等优势。中国专利CN 105502686 A采用E.coli将污水中的二价汞离子转化成氯化低汞沉淀沉积在水底，从而降低水中的含汞量，可治理的汞浓度为200 ug/L；中国专利CN 104560736 A采用真菌Fusarium oxysporum作为吸附剂吸附污水中汞，进而降低水体中的汞含量，可治理的汞浓度为50 mg/ml。目前，微生物法治理的污水中的汞浓度均较低，因此寻找一种高耐汞性性能的微生物用于高浓度汞离子的去除具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术的技术目的在于提供一株新型的耐受并吸附重金属汞的出芽短梗霉菌菌株，用于去除重金属汞。具体的，本专利技术的技术方案如下：一株耐重金属汞的出芽短梗霉菌菌株，其中，该菌株分类命名为Aureobasidium pullulans F134M，保藏于广东省微生物菌种保藏中心保藏，保藏编号为：GDMCC NO：60070。其中，本专利技术的菌株是经过原始菌株Aureobasidium pullulans F13通过化学诱变获得。本专利技术所述的方法，其中，原始菌株Aureobasidium pullulans F13 筛选、鉴定的具体操作步骤为：（1）将来自新疆地区某重金属污染的土壤溶于无菌生理盐水中后进行梯度稀释，选取10-2、10-3、10-4稀释液分别涂布于含重金属的分离培养基平板上，每个梯度3个重复，置28℃培养。待长出菌落后挑取形状、大小、颜色等不同的菌落分别划线接种于相应的平板，直至无杂菌落。（2）经培养筛选后确定的F13菌株于28℃培养6-7d，观察形态，菌落初期为白色、粘稠，后期转为棕黑色，凸起。参照《真菌鉴定手册》对F13菌株进行系统生理生化鉴定，经生理生化检测确定F13菌株为Aureobasidium属菌。（3）通过PCR获得F13菌株的LSU rDNA序列，经序列测定及BLAST同源性对比与进化分析，结果表明F13菌株与Aureobasidium pullulans var. subglaciale EXF-2480LSU rDNA的同源性为100%，因此将F13菌株命名为Aureobasidium pullulans F13。本专利技术所述的方法，其中，诱变原始菌株Aureobasidium pullulans F13获得Aureobasidium pullulans F134M的具体操作步骤为：(1) 将出发菌株Aureobasidium pullulans F13进行化学诱变，得到突变株，其中，化学诱变的条件是化学诱变剂的浓度为0.05-0.2 mol/L，诱变时间为20-60min。（2）将步骤（1）所得的突变菌株涂布于分别含有高浓度重金属汞的选择性固体培养基平板，培养，得到耐受高浓度重金属汞的出芽短梗霉菌。（3）对步骤（2）所得的耐受重金属的菌株的抗性稳定性进行考察，最终选定一株抗性稳定的菌株，命名为Aureobasidium pullulans F134M。（4）其中，化学诱变剂包括N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍、氮芥、亚硝酸等。本专利技术菌株能够耐受重金属汞，对汞的最高耐受浓度为700 mg/L。本专利技术的菌株对重金属汞具有吸附作用，当汞浓度≤200 mg/L时，吸附率均能达到99%。本专利技术所述的菌株在水体和土壤重金属污染治理中的应用。具体的，耐重金属汞菌株Aureobasidium pullulans F134M在吸附重金属汞方面的应用过程为：将Aureobasidium pullulans F134M接种于发酵培养基中，在28℃、转速150-200rpm条件下震荡培养6-7d，得到发酵液。将发酵液离心，去除培养基，获得菌体。将菌体置于分别含有汞的重金属污染水中，吸附24-72h。本专利技术的有益效果在于：本专利技术获得的突变株Aureobasidium pullulans F134M，能够耐受重金属汞，其中，对汞的最高耐受浓度为700 mg/L，比原始菌株提高了40%。本专利技术获得的突变株Aureobasidium pullulans F134M菌株对重金属汞具有吸附作用，当汞浓度≤200 mg/L时，吸附率均能达到99.9%。因此，本专利技术的菌株可用于重金属汞的污染治理中，具有比现有菌株更好的效果。生物材料的说明：本专利技术所述的菌种，其分类命名为Aureobasidium pullulans F134M，已保藏于广东省微生物菌种保藏中心（GDMCC），保藏编号为：GDMCC No：60070，保藏日期为：2016年08月29日，保藏地址为：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。具体实施方式实施例1：本实施例说明本专利技术使用到的培养基分离培养基：马铃薯 200g/L，葡萄糖 20g/L，琼脂粉 20g/L，氯化汞（0-900mg/L）。发酵培养基：马铃薯 200g/L，葡萄糖 20g/L。实施例2：菌株F13的筛选、分离与鉴定称取1 g来自新疆某重金属污染区的土样溶于100 ml无菌生理盐水中后进行梯度稀释，选取10-2、10-3、10-4稀释液分别涂布于含重金属Hg的分离培养基平板上，每个梯度3个重复，置28℃培养。待长出菌落后挑取形状、大小、颜色等不同的菌落分别划线接种于相应的平板，直至无杂菌落。经培养筛选后确定的F13菌株于28℃培养6-7d，观察形态，菌落初期为白色、粘稠，酵母样；后期转为棕黑色，凸起，无明显多糖产生。显微镜下观察有丝状体。参照《真菌鉴定手册》对F13菌株进行系统生理生化鉴定，经生理生化检测确定F13菌株为Aureobasidium属菌。通过PCR获得F13菌株的LSU rDNA序列，经序列测定及BLAST同源性对比与进化分析，结果表明F13菌株与Aureobasidium pullulans var. subglaciale EXF-2480LSU rDNA的同源性为100%，因此将F13菌株命名为Aureobasidium pullulans F13。实施例3：菌株Aureobasidium pullulans F13的诱变取长满孢子的出芽短梗霉菌F13斜面一支，用生理盐水洗脱孢子，制成孢子悬浮液，稀释至孢子的浓度为106个/ml，取2ml上述孢子悬浮液加入1ml 0.1mol/L 亚硝酸钠，28℃水浴5min，加入2ml醋酸缓冲液（pH 4.5），水浴一定时间后加入2ml 0.7mol/L Na2H本文档来自技高网...
【技术保护点】
一株出芽短梗霉菌菌株，其特征在于，其分类名为Aureobasidium pullulans F134M，保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为：GDMCC NO：60070。
【技术特征摘要】
1.一株出芽短梗霉菌菌株，其特征在于，其分类名为Aureobasidium pullulans F134M，保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为：GDMCC NO：60070。2.如权利...
【专利技术属性】
技术研发人员：黄和，唐苏苏，江凌，俞亚东，徐晴，徐娴，
申请(专利权)人：南京工业大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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