一种楤木悬浮细胞培养的方法技术

本发明专利技术公开了一种楤木悬浮细胞培养的方法，包括无菌叶片的获得，愈伤组织的诱导，愈伤组织的增殖，悬浮细胞的培养。本发明专利技术建立了楤木的悬浮细胞培养的方法，可以在短期内获得大量的楤木愈伤组织和悬浮细胞，用于药用成分的提取和制药工业。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了，包括无菌叶片的获得，愈伤组织的诱导，愈伤组织的增殖，悬浮细胞的培养。本专利技术建立了楤木的悬浮细胞培养的方法，可以在短期内获得大量的楤木愈伤组织和悬浮细胞，用于药用成分的提取和制药工业。【专利说明】一种惚木悬浮细胞培养的方法
本专利技术涉及植物组织培养的快繁方法，属于植物
。
技术介绍
惚木，五加科，小乔木或灌木，别名仙人仗、鹊不踏、刺包头，分布黄河以南至两广北部、西南、东南各省区。生于林内、林缘或灌丛中，喜生于沟谷、阴坡、半阴坡海拔25(Tl000m的杂树林、阔叶林、阔叶混交林或次生林中。耐寒，但在阳光充足、温暖湿润的环境下生长更好。空气湿度在30%飞0%之间，喜肥沃而略偏酸性的土壤。惚木以根皮和茎入药，药材味苦、辛，性平。有补气安神、强精滋肾、健胃利水、祛风除湿、活血止痛的功用。惚木主治神经衰弱、风湿性关节炎、肝炎、慢性胃炎、胃痉挛、胃及十二指肠溃疡、肾炎水肿、糖尿病及阳虚气弱、慢性病气虚无力、颅外伤后无力综合症、肾虚阳痿等症，还具有降血压、降血糖及抗放射的作用。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种惚木悬浮细胞的培养方法，由该方法可以获得大量的惚木悬浮细胞，并规模化的为药厂提供制药的原料。本专利技术所要解决的技术问题是通过以下方案来实现的: 将惚木叶片用毛刷洗去表面污垢，用漂白粉浸泡三分钟，流水冲洗25min，超净工作台上氯化汞消毒处理8min，无菌水冲洗4-5次，然后用无菌的滤纸吸去叶片表面的水分，获得的惚木无菌叶片接种到愈伤组织诱导培养基MS+NAA0.5mg/L+IBA 3mg/L中进行愈伤组织诱导，培养条件为温度25 V，暗室培养，湿度30%飞0%，将惚木愈伤组织接种到愈伤组织增殖培养基MS+6-BA lmg/L+2，4-D 0.3 mg/L中进行增殖培养，培养条件温度25°C，光照强度1000-20001x，光期10h，暗期14h，湿度30%-60%，增殖后的惚木愈伤组织接种到MS+KT0.3mg/L+TDZ0.lmg/L培养基中，每50ml悬浮细胞添加IOOml培养液，接种于250ml锥形瓶中进行悬浮振荡培养，继代培养3代，获得大量的惚木悬浮细胞。采用本专利技术制备的惚木悬浮细胞，周期短，产量大，能耗少，利于大生产操作。下面将结合【具体实施方式】对本专利技术作进一步阐述，但本专利技术要求保护的范围并不局限于下列实施方式。实施例1 将惚木叶片用毛刷洗去表面污垢，用漂白粉浸泡三分钟，流水冲洗25min，超净工作台上氯化汞消毒处理8min，无菌水冲洗4-5次，然后用无菌的滤纸吸去叶片表面的水分，获得的惚木无菌叶片接种到愈伤组织诱导培养基MS+NAA 0.5mg/L+IBA3mg/L中进行愈伤组织诱导，培养条件为温度25 V，暗室培养，湿度30%飞0%，将惚木愈伤组织接种到愈伤组织增殖培养基MS+6-BA lmg/L+2，4-D 0.2 mg/L中进行增殖培养，培养条件温度25°C，光照强度1000-20001x，光期10h，暗期14h，湿度30%-60%，增殖后的惚木愈伤组织接种到MS+KT0.2mg/L+TDZ0.05mg/L培养基中，每50ml悬浮细胞添加IOOml培养液，接种于250ml锥形瓶中进行悬浮振荡培养，继代培养3代，获得大量的惚木悬浮细胞。实施例2 将惚木叶片用毛刷洗去表面污垢，用漂白粉浸泡三分钟，流水冲洗25min，超净工作台上氯化汞消毒处理8min，无菌水冲洗4-5次，然后用无菌的滤纸吸去叶片表面的水分，获得的惚木无菌叶片接种到愈伤组织诱导培养基MS+NAA 0.5mg/L+IBA3mg/L中进行愈伤组织诱导，培养条件为温度25°C，暗室培养，湿度30%飞0%，将惚木愈伤组织接种到愈伤组织增殖培养基MS+6-BA 2mg/L+2,4-D0.5 mg/L中进行增殖培养，培养条件温度25 °C，光照强度1000-20001x，光期10h，暗期14h，湿度30%飞0%，增殖后的惚木愈伤组织接种到MS+KT0.4mg/L+TDZ0.2mg/L培养基中，每50ml悬浮细胞添加IOOml培养液，接种于250ml锥形瓶中进行悬浮振荡培养，继代培养3代，获得大量的惚木悬浮细胞。实施例3 将惚木叶片用毛刷洗去表面污垢，用漂白粉浸泡三分钟，流水冲洗25min，超净工作台上氯化汞消毒处理8min，无菌水冲洗4-5次，然后用无菌的滤纸吸去叶片表面的水分，获得的惚木无菌叶片接种到愈伤组织诱导培养基MS+NAA 0.5mg/L+IBA 3mg/L中进行愈伤组织诱导，培养条件为温度25 V，暗室培养，湿度30%飞0%，将惚木愈伤组织接种到愈伤组织增殖培养基MS+6-BA lmg/L+2，4-D 0.3 mg/L中进行增殖培养，培养条件温度25°C，光照强度1000-20001x，光期10h，暗期14h，湿度30%飞0%，增殖后的惚木愈伤组织接种到MS+KT0.2mg/L+TDZ0.2培养基中，每50ml悬浮细胞添加IOOml培养液，接种于250ml锥形瓶中进行悬浮振荡培养，继代培养3代，获得大量的惚木悬浮细胞。实施例4 将惚木叶片用毛刷洗去表面污垢，用漂`白粉浸泡三分钟，流水冲洗25min，超净工作台上氯化汞消毒处理8min，无菌水冲洗4-5次，然后用无菌的滤纸吸去叶片表面的水分，获得的惚木无菌叶片接种到愈伤组织诱导培养基MS+NAA 0.5mg/L+IBA3mg/L中进行愈伤组织诱导，培养条件为温度25°C，暗室培养，湿度30%飞0%，将惚木愈伤组织接种到愈伤组织增殖培养基MS+6-BA 2mg/L+2,4-D0.3 mg/L中进行增殖培养，培养条件温度25 °C，光照强度1000-20001x，光期10h，暗期14h，湿度30%飞0%，增殖后的惚木愈伤组织接种到MS+KT0.4mg/L+TDZ0.05mg/L培养基中，每50ml悬浮细胞添加IOOml培养液，接种于250ml锥形瓶中进行悬浮振荡培养，继代培养3代，获得大量的惚木悬浮细胞。【权利要求】1.一种惚木悬浮细胞培养的方法，包括无菌叶片的获得，愈伤组织的诱导，愈伤组织的增殖，悬浮细胞的培养和优化，其主要步骤如下: (1)按照常规植物组织培养的消毒方法对惚木叶进行消毒处理，获得无菌的惚木叶片; (2)将步骤(I)所获得的惚木无菌叶片接种到愈伤组织诱导培养基MS+NAA0.5mg/L+IBA 3mg/L中进行愈伤组织诱导； (3)将步骤(2)诱导出来的惚木愈伤组织接种到愈伤组织增殖培养基MS+6-BAl-2mg/L+2，4-D 0.2-0.5 mg/L中进行增殖培养； (4)将步骤(3)增殖过的惚木愈伤组织接种到MS+KT0.2-0.4mg/L+TDZ0.05-0.2mg/L培养基中振荡培养，继代培养3代，得到惚木悬浮细胞。2.按照权利要求1所述的一种惚木悬浮细胞培养的方法，其特征在于:步骤中所述无菌的惚木叶片按下列消毒方法得到:将惚木叶片用毛刷洗去表面污垢，用漂白粉浸泡三分钟，流水冲洗25min,超净工作台上氯化萊消毒处理8min,无菌水冲洗4_5次,然后用无菌的滤纸吸去叶片表面的水分。3.按照权利要求1所 述的一种惚木悬浮细胞培养的方法，其特征在于:步骤中惚木愈伤组织诱导的条本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种楤木悬浮细胞培养的方法，包括无菌叶片的获得，愈伤组织的诱导，愈伤组织的增殖，悬浮细胞的培养和优化，其主要步骤如下：（1）按照常规植物组织培养的消毒方法对楤木叶进行消毒处理，获得无菌的楤木叶片；（2）将步骤（1）所获得的楤木无菌叶片接种到愈伤组织诱导培养基MS+NAA?0.5mg/L+IBA?3mg/L中进行愈伤组织诱导；（3）将步骤（2）诱导出来的楤木愈伤组织接种到愈伤组织增殖培养基MS+6?BA?1?2mg/L+2，4?D?0.2?0.5?mg/L中进行增殖培养；（4）将步骤（3）增殖过的楤木愈伤组织接种到MS+KT0.2?0.4mg/L+TDZ0.05?0.2mg/L培养基中振荡培养，继代培养3代，得到楤木悬浮细胞。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：杨存，
申请(专利权)人：南京通泽农业科技有限公司，
类型：发明
国别省市：