食葡萄糖食甲基菌及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一株食葡萄糖食甲基菌及其应用。该菌株为食葡萄糖食甲基菌（Methylovorusglucosotrophus）M25-40，其保藏登记号为CGMCCNo.7315。食葡萄糖食甲基菌（Methylovorusglucosotrophus）M25-40CGMCCNo.7315能够利用甲醇进行单细胞蛋白的生产，可用于生产动物饲料添加剂。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了一株食葡萄糖食甲基菌及其应用。该菌株为食葡萄糖食甲基菌（Methylovorusglucosotrophus）M25-40，其保藏登记号为CGMCCNo.7315。食葡萄糖食甲基菌（Methylovorusglucosotrophus）M25-40CGMCCNo.7315能够利用甲醇进行单细胞蛋白的生产，可用于生产动物饲料添加剂。【专利说明】食葡萄糖食甲基菌及其应用
本专利技术涉及一株转化甲醇生产单细胞蛋白的菌株及其在单细胞蛋白生产中的应用。具体指在利用我国丰富的甲醇资源，形成新的甲醇下游产品生产链时，将甲醇转化生成单细胞蛋白产品，具有生产能耗较低、不受环境和气候影响、勿需依赖耕地、可连续生产、易于控制和污染小等优点。解决传统单细胞蛋白生产受原料来源限制，不能大规模生产的缺点，从而实现普通蛋白饲料新的替代源。
技术介绍
以甲醇为原料，应用适宜的微生物为菌种繁殖生产的新型单细胞蛋白营养丰富， 含有丰富的蛋白质、氨基酸和多种维生素，用作饲料，能够促进畜禽生产和提高饲料利用率，具有较高的附加值，可以代替鱼粉、大豆、骨粉、肉类和脱脂奶粉等蛋白补充饲料。该单细胞蛋白安全无毒，已被英国、德国、比利时、荷兰、丹麦、俄罗斯、墨西哥等国政府批准可作为动物饲料使用，在国外已使用20余年，被证明是一种安全的动物饲料添加剂。以甲醇为原料生产的新型单细胞蛋白产品市场及生产过程中对甲醇的消耗量较大。饲料中蛋白含量一般为15%-20%，由细菌以甲醇为原料生产的新型单细胞蛋白的蛋白含量一般高于70%，若按I吨配制10吨饲料，可使其中蛋白含量达到7%以上。国内每年饲料的产量约为2亿吨，若其中7%的蛋白由该新型单细胞蛋白提供，则该产品的需求量为2千万吨；如果按生产I吨蛋白产品需要消耗2吨甲醇计算，可以消耗甲醇约4千万吨。因此，以甲醇为原料生产的新型单细胞蛋白产品市场前景较好，同时能将部分生产过剩的甲醇转化为附加值更高的产品形式。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供一株食葡萄糖食甲基菌，是应用甲醇无机盐培养基驯化濮阳中原大化厂区污泥样品，将分离纯化得到的菌株，通过真空诱变和IXlO16N+/ cm2注入诱变选育得到，该菌为食葡萄糖食甲基菌M25-40，拉丁文学名-.Methy1vorus glucosotrophus。保藏单位:中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏单位简称:CGMCC，保藏单位地址:北京市朝阳区北辰西路I号院3号，保藏日期:2013年3月15 日，保藏编号CGMCC N0.7315。食葡萄糖食甲基菌M25-40的菌落呈现浅粉色，边缘整齐；细胞形态和理化实验结果如表I所示；16S rRNA基因序列如SEQ ID N0.1所 示。本专利技术所提供的食葡萄糖食甲基菌M25-40可用于单细胞蛋白的生产。本专利技术的另一个目的是提供一种生产新型单细胞蛋白的生产方法，包括如下步骤:用所述食葡萄糖食甲基菌M25-40转化甲醇，得到单细胞蛋白。在上述新型单细胞蛋白的生产方法中，所述含有甲醇的培养基中接种5%?50%所述食葡萄糖食甲基菌M25-40进行。在上述单细胞蛋白的生产方法中，所述生产按照包括如下步骤的方法进行:在无机盐发酵基中，加入0.2%玉米浆，1211:灭菌20111，加入经过0.22 μ m孔径的微孔滤膜过滤除菌的甲醇，混合均匀后接种所述食葡萄糖食甲基菌M25-40。上述无机盐发酵基为在IL 水中加入 1.5g Κ2ΗΡ04、0.5g ΚΗ2Ρ04、0.2g MgSO4 7Η20、Ig NaCl 和 Ig (NH4) 2S04，pH 自然。在上述单细胞蛋白的生产方法中，所述发酵的温度为25V?37°C，所述发酵的时间为2?24h，起始甲醇浓度为0.2?1%，接种量为4?50%，装液量为66?75%，进气量为1: 0.3 ?1:1.6。上述所述方法制备得到的所述新型单细胞蛋白属于本专利技术的保护范围。应用上述方法制备得到的单细胞蛋白产品蛋白含量为71.53%?77.92%，甲醇残留未检出。产品动物毒性试验结果为实际无毒级。Ames试验、骨髓细胞微核试验及小鼠精子畸形试验结果为阴性。微生物检测结果表明，产品不含沙门氏菌等致病菌。使用本专利技术所提供的食葡萄糖食甲基菌glucosotrophus)M25-40转化甲醇生产单细胞蛋白具有成本低廉、易于控制、可规模化生产等优点，可用于动物饲料添加剂的生产。保藏说明 菌种名称:食葡萄糖食甲基菌 拉丁名-Methylovorus glucoso trophus 菌株编号:M25-40 保藏机构:中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心 保藏机构简称=CGMCC 地址:北京市朝阳区北辰西路I号院3号 保藏日期:2013年3月15日 保藏中心登记入册编号:CGMCC N0.7315。【专利附图】【附图说明】图1 为食葡萄糖食甲基舊(Methylovorus glucosotrophus) M25-40 CGMCCN0.7315在50L发酵罐中不同浓度甲醇条件下发酵的菌体密度。图2 为食葡萄糖食甲基舊(Methylovorus glucosotrophus M25-40 CGMCCN0.7315在50L发酵罐中不同空气流量条件下菌体生长与发酵液溶氧变化， 图中I为进气量1:0.3，2为进气量1:1。图3 为食葡萄糖食甲基舊(Methylovorus glucosotrophus M25-40 CGMCCN0.7315在IOL发酵罐与50L发酵罐中不同空气流量条件下菌体生长与发酵液溶氧变化。【具体实施方式】下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。无机盐液体发酵基:溶剂为水，溶质为K2HPO4L 5g/L，KH2PO40.5g/L，MgSO4 7H200.2g/L，NaCl Ig /L, (NH4) 2S04 lg/L，pH 自然。固体培养基:每升上述无机盐液体培养基添加15g琼脂制备得到的培养基。实施例1、食葡萄糖食甲基菌(Methylovorus glucosotrophus) M25-40 CGMCC N0.7315的诱变选育及鉴定。分别将5g濮阳中原大化厂区污泥样品接种于装有IOOmL含有5%甲醇的无机盐培养基的250mL三角瓶中，180rpm，30°C驯化培养15d，间隔5d补加培养基。驯化后的液体经过固体平板分离纯化得到单菌落，其中菌株M在含有5%甲醇的无机盐液体培养基中生长性能最好。以菌株M为出发菌株，用无菌棉签将固体培养基上划线扩大培养生长出的菌株M加入到5mL水或5%海藻糖溶液中，振荡，取0.1mL涂60mm平皿，干燥后分别进行剂量为IXlO15 NVcm2,5 X IO15 NVcm2和IXlO16 N+/cm2的离子注入，同时设置不同剂量下的真空处理组，诱变后用3mL水洗下，加入到IOOmL含有5%甲醇的无机盐培养基中摇床培养24h，分别于固体培养基上分离纯化。将分离得到的单菌落在固体培养基上扩大培养，用无菌棉签擦下长出的菌落，洗溶于无菌水中。将上述菌液按1%的接种量分别接种于装有IOOmL含有5%或0.2%甲醇无机盐培养基的250mL三本文档来自技高网...

【技术保护点】
食葡萄糖食甲基菌，其特征在于该菌株为食葡萄糖食甲基菌（Methylovorus?glucosotrophus）M25?40，其保藏登记号为CGMCC?№.7315。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王雁萍，宋灿，焦浈，魏灵朝，李宗伟，晁一旸，苏明杰，张秀全，李宁，蒋元力，李伍成，
申请(专利权)人：河南煤业化工集团研究院有限责任公司，郑州大学，
类型：发明
国别省市：