一种在线粒体中构建3-羟基丁酮合成途径的方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种在线粒体中构建3-羟基丁酮合成途径的方法及应用，属于遗传工程领域。本发明专利技术通过线粒体信号肽(COX4)介导目的基因的表达，实现了在光滑球拟酵母(Torulops?is?glabrata?CCTCC?M202019)线粒体中过量表达外源乙酰乳酸合成酶(ALS)和乙酰乳酸脱羧酶(ALDC)基因，成功构建了3-羟基丁酮的合成途径，进而疏通丙酮酸流向3-羟基丁酮的碳代谢流，最终实现了3-羟基丁酮的积累。本发明专利技术公开的光滑球拟酵母基因工程菌在多重维生素限制的条件下，可实现3-羟基丁酮的积累，产量可达750mg/L，为研究在亚细胞器中实现代谢工程改造奠定了基础。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种在线粒体中构建3?羟基丁酮合成途径的方法及应用，其特征为：1)克隆了融合线粒体信号肽COX4的Bacillus?subtilis?ALS基因；2)人工合成融合了线粒体信号肽COX4、且经过密码子优化后的B.subtilis?ALDC基因；3)将步骤1)和步骤2)得到的PCR产物共同连接至表达载体pY26中，获得表达载体pY26?COX4?ALS?COX4?ALDC；4)将步骤3)得到的表达载体pY26?COX4?ALS?COX4?ALDC电转至酵母菌。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘立明，李树波，陈坚，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：