【技术实现步骤摘要】
利用重组钝齿棒杆菌以葡萄糖为底物一步法合成Y-氨基丁酸的方法
利用基因工程技术，构建安全高效的钝齿棒杆菌工程菌。该菌以葡萄糖为底物一步法合成Y -氨基丁酸的方法，属于基因工程和酶工程领域，具体涉及基因工程重组钝齿棒杆菌生产Y-氨基丁酸的方法。技术背景Y-氨基丁酸是天然存在于某些生物体内的非蛋白质氨基酸，是哺乳动物中枢神经系统重要的抑制性神经递质，具有抗焦虑、降血压、镇定安神、增强记忆、调节激素分泌、促进生殖、利尿，镇痛等重要生理功能。在食品、饲料、医药等领域具有广泛的应用。2009年，卫生部批准Y-氨基丁酸为新资源食品，这意味着Y-氨基丁酸在国内市场跨入了一个薪新时代。目前，Y-氨基丁酸的制备主要通过化学合成法和微生物法，化学合成法反应条件剧烈，污染严重；微生物发酵法 条件温和、安全、成本较低。在微生物发酵法中，最受关注的是通过谷氨酸脱羧酶(EC4.1.1.15)催化L-谷氨酸的α-羧基脱羧来生产Y-氨基丁酸。在已报道的方法中，Y-氨基丁酸生产均需要添加外源谷氨酸作为底物，而谷氨酸是由糖质为原料经微生物发酵，采用等电点提取，离子交换树脂分离等方法制备获得。因而...
【技术保护点】
一株能以葡萄糖为底物，高效转化葡萄糖为谷氨酸的基因工程菌钝齿棒杆菌E01。
【技术特征摘要】
1.一株能以葡萄糖为底物，高效转化葡萄糖为谷氨酸的基因工程菌钝齿棒杆菌EOl。2.权利要求1中基因工程菌钝齿棒杆菌EOl的构建思路，其特征是利用一株高产精氨酸突变菌株纯齿棒杆菌(Corynebacterium crenatum SYP,保藏编号 CCTCC NO:M208133),经传代5次后，敲除argB基因，获得基因工程菌钝齿棒杆菌E01，该工程菌缺少Y -氨基丁酸合成途径，但能高效催化葡萄糖转化为谷氨酸。3.一株能以葡萄糖为底物，高效转化Y-氨基丁酸的重组钝齿棒杆菌，其分类命名为C.crenatum E01/pGADo4.权利要求书3中的重组菌C.crenatum EOl/pGAD的构建思路,其特征是根据植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)GBO1-21 (中国典型培养物保藏中心保藏,保藏号:CCTCCM209102)谷氨酸合成途径，但具有较高的谷氨酸脱羧酶活力，能高效催化Y _氨基丁酸的合成，以及权利要求1中的钝齿棒杆菌EOl缺少Y-氨基丁酸合成途径，但能高效催化葡萄糖转化为谷氨酸的特点，该重组菌成功重组了钝齿棒杆菌的谷氨酸代谢途径和植物乳杆菌的Y-氨基丁酸合成途径，获得能以葡萄糖为底物，生物转化Y-氨基丁酸的高效重组钝齿棒杆菌。5.权利要求书3中的重组菌C.crenatum EOl/pGAD的构建方法，其特征是将植物乳杆菌的Ipgad基因插入到载体pJC-tac,构建得重组质粒pGAD,电击转化钝齿棒杆菌E01,通过含有30 μ g/mL的卡那霉素抗性筛选,获得目的重组菌株C.crenatum EOl/pGAD。6.权利要求书3中的重组质粒pGAD的构建，其特征是将纯化后的Ipgad基因与pMD18-T连接，反应体系如下:质粒pMD18-T0.5 μ L，目的基因4.5 μ L，LigationSolution5yL，混合连接液，将其置于16°C培养箱中连接4h以上，转化大肠杆菌JM109，提取质粒pMD18-T-lpgad,酶切验证并测序,提取质粒pMD18-T_lpgad和表达载体pJC-tac, 二者同时用Sal I/BamH I双酶切，酶切产物通过粘性末端连接，获得重组质粒pGAD。7.权利要求5中的Ipgad基因的获得，其特征是以保藏编号为CCTCCM209102的L.plantarum GB01-21 为模板，设计正反向引物 lpgad F Sal I 和 lpgad R BamH I (如下所示)，以L.plantarum GB01-21染色体为模板，lpgad F、lpgad R为引物进行PCR扩增反应，PCR 采用 50yL 体系...
【专利技术属性】
技术研发人员：饶志明，孙红梅，徐美娟，李秀鹏，张显，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：
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